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实验四 凝胶包埋法固定化脲酶一、实验原理 凝胶包埋法是将酶或含酶菌体包埋在各种凝胶内部的微孔中，制成一定形状 的固定化酶或固定化菌体。常用的凝胶有琼脂、海藻酸钙、明胶和聚丙烯酰胺等。 本实验把脲酶用聚丙烯酰胺凝胶包埋起来，制成固定化脲酶，可广泛应用于人工 肾或处理尿素废水。二、仪器和试剂1、仪器：天平，小烧杯，刀片，滤纸等2、试剂：(1) 丙烯酰胺(2) N,N、-亚甲基双丙烯酰胺(交联剂)(3) 磷酸缓冲液(pH 7.0)： 6.7 g Na2HPO4.2H2O, 3.25 g KH2PO4，溶于 蒸馏水并定容至 100 ml( 4) 10%过硫酸钾溶液(引发剂)( 5) 10%亚硫酸氢钠溶液( 6) 脲酶粉末(实验二制备)三、实验步骤1、称取丙烯酰胺2.5 g，N,N-亚甲基双丙烯酰胺0.5 g，溶于30 ml pH 7.0的 磷酸缓冲液中；2、取上述溶液 1 ml 于 EP 管中，冰水浴中加入 10 mg 脲酶，搅拌均匀，加 入 0.05 ml 10%过硫酸钾溶液和 0.05 ml 10%亚硫酸氢钠溶液，不断搅拌下 完成聚合反应，即得到含酶凝胶。3、待凝结充分固化后，切成2-3 mm 见方的小块，反复水洗后，用干滤纸吸 干水，称重。置于4C冰箱中备用。四、实验结果 计算每克凝胶包埋酶的 mg 数。
