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1、二甲双胍与美沙拉嗪在小鼠结肠炎中的疗效 比较 作者：邓钧 曾丽珊 刘乐 陈烨 来源：新医学2021 年第 08 期 【摘要】 目的 探讨二甲双胍与美沙拉嗪在治疗小鼠结肠炎中的疗效差异性。方法 选取 6 8 周龄的 C57BL/6 雄性小鼠 32 只，随机分为 Control 组、硫酸葡聚糖（DSS）组、DSS+美 沙拉嗪组、DSS+二甲双胍组，每组 8 只。Control 组小鼠自由饮用高压灭菌双蒸水，并每日予 0.2 ml 磷酸盐缓冲液（PBS）灌胃。采用 3%DSS 诱导 C57BL/6 雄性小鼠结肠炎模型。DSS 组 小鼠自由饮用 3%DSS 溶液，每日予 0.2 ml PBS 灌胃，D
2、SS+美沙拉嗪组、DSS+二甲双胍组自 由饮用 3%DSS 溶液，予 100 mg/（kgd） 的美沙拉嗪或 100 mg/（kgd） 二甲双胍灌胃。评估 各组小鼠体质量变化、结肠长度、疾病活动指数、组织病理学改变及肠道炎症因子表达情况。 结果 与 DSS 组相比，DSS+二甲双胍与 DSS+美沙拉嗪组均可降低小鼠结肠炎所致的体质量丢 失、疾病活动度评分、组织病理学评分及肠道炎症因子表达水平（P 均 0.05）。结论 二甲双胍 可以减轻 DSS 诱导的小鼠结肠炎，其疗效不亚于美沙拉嗪。 【关键词】 结肠炎;二甲双胍;美沙拉嗪;疗效 Comparison of efficacy between
3、metformin and mesalazine in treatment of experimental colitis in mouse models Deng Jun， Zeng Lishan， Liu Le， Chen Ye. Department of Gastroenterology， the Sixth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University， Guangzhou 510655， China Corresponding author， Chen Ye， E-mail：*.cn 【Abstract】 Objective To co
4、mpare the efficacy between metformin and mesalazine in the treatment of experimental colitis in mouse models. Methods Thirty-two C57BL/6 male mice aged 6-8 weeks were randomly divided into the control， dextran sulphate sodium （DSS）， DSS+mesalazine and DSS+metformin groups， with 8 animals in each gro
5、up. In the control group， the animals were given ad libitum access to autoclaved double-distilled water and oral gavage of 0.2 ml PBS daily. C57BL/6 male mouse models were induced by 3% DSS. In the DSS group， the mice were given ad libitum access to 3% DSS and oral gavage of 0.2 ml PBS daily. In the
6、 DSS+mesalazine and DSS+metformin groups， the animals were given ad libitum access to 3% DSS， and oral gavage of 100 mg/（kgd） mesalazine or metformin. The body weight， colon length， disease activity index （DAI）， histopathological changes and the expression levels of pro-inflammatory cytokines were e
7、valuated in each group. Results Compared with the DSS group， mice treated with DSS+metformin or DSS+mesalazine experienced significantly less body weight loss，lower DAI scores， lower histopathological scores and lower expression levels of pro-inflammatory cytokines （all P 0.05）. Conclusion Metformin
8、 can ameliorate DSS-induced experimental colitis in mice， which yields equivalent efficacy to that of mesalazine. 【Key words】 Colitis;Metformin;Mesalazine;Efficacy 潰疡性结肠炎（UC）一种以腹痛、腹泻和黏液血便为表现的慢性非特异性肠道疾病。UC 目前尚无有效治愈药物，临床上常用的治疗药物包括氨基水杨酸制剂、糖皮质激素、免疫抑制 剂和生物制剂。UC 病程易反复迁延，严重影响患者身心健康和生活质量，同时病情控制需要 长期药物维持，给患者
9、造成较大的经济负担1-2。因此，寻求一种廉价有效的药物用于 UC 治 疗具有重要意义及经济学价值。肠道屏障功能破坏是 UC 的特征性改变3。我们近期研究发现 临床用于 2 型糖尿病治疗的一线药物二甲双胍能够减轻硫酸葡聚糖（DSS）诱导小鼠 UC 模型 结肠炎的发生，保护肠黏膜上皮屏障功能4。这提示二甲双胍具备用于治疗 UC 的潜能。美沙 拉嗪是用于 UC 治疗的基石药物，已被广泛用于临床。美沙拉嗪需长期使用，因此患者仍需承 受较高的医疗支出。目前关于二甲双胍与美沙拉嗪在减缓 UC 肠道炎症的疗效优异性相关研究 尚未有报道。故本研究通过应用二甲双胍或美沙拉嗪治疗 UC 小鼠模型，对比其减轻肠道炎
10、症 的疗效，为二甲双胍用于治疗 UC 进一步提供理论依据。 材料与方法 一、材 料 1.實验动物 6 8 周 21 24 g 的 C57BL/6 雄性小鼠，购于南方医科大学实验动物中心，饲养于南方 医科大学 SPF 级动物中心，以普通颗粒饲料饲养，光照周期为明暗交替 12 h，常规适应性饲养 7 d。本实验符合动物实验相关伦理规范（L2015059）。 2. 实验试剂与设备 2.1 实验试剂 DSS（美国 MP 公司）;二甲双胍和美沙拉嗪（美国 Sigma 公司）、隐血试剂盒（南京建成 生物工程研究所）;小鼠 IL-6、IL-1b、TNF-a ELISA 试剂盒（杭州联科生物技术股份有限公 司
11、）;戊巴比妥钠（美国 Sigma 公司）;HE 试剂（上海碧云天生物技术有限公司）;TRIzol 试 剂、逆转录 RT 试剂盒、SYBR Premix Ex Taq（日本 Takara 公司）。 2.2 实验设备 超速低温离心机（美国 Thermo-Fiser 公司）;酶标板（美国 Corning 公司）;包埋盒（海门 市康泰实验器材厂）;载玻片（江苏世泰实验器材有限公司）;切片机、展片机、烤片机（德国 Leica 公司）;超声波破碎仪（美国 Sonics 公司）;实时荧光定量 PCR 仪（瑞士 Roche 公司）。 二、实验方法 1. 动物模型构建 按随机分组原则分为 4 组（Control
12、 组、DSS 组、DSS+美沙拉嗪组、DSS+二甲双胍组）， 每组 8 只。Control 组小鼠自由饮用高压灭菌双蒸水，并每日予 0.2 ml 磷酸盐缓冲液（PBS） 灌胃。UC 模型组（包括 DSS 组、DSS+美沙拉嗪组、DSS+二甲双胍组）小鼠自由饮用 3%DSS 溶液，其中 DSS 组每日予 0.2 ml PBS 灌胃，DSS+美沙拉嗪组、DSS+二甲双胍组则分别予 100 mg/（kgd）的美沙拉嗪或 100 mg/（kgd） 二甲双胍灌胃。实验开始前各组分别使用 PBS 或 治疗药物提前灌胃 1 周，达到适应性灌胃和预处理效果。实验开始后每日观察各组小鼠毛发、 进食、活动情况，以
13、及体质量、大便情况，重点观察有无稀便、血便，7 d 后 UC 模型组的 DSS 溶液全部更换为灭菌双蒸水，所有组别小鼠禁食 1 d，但不禁水，第 8 日后全部小鼠予 0.1%戊巴比妥腹腔麻醉后经内眦静脉取血，留取血清，断颈处死小鼠。 2. 疾病活动指数（DAI）评分 根据体质量变化情况、大便情况及大便隐血或便血情况对每只小鼠每日的 DAI 进行综合 评价4。 3. 肠道病变组织病理学评分 按照炎症、病变深度、隐窝破坏情况及病变范围的严重程度进行评分，总评分为各项的合 计分值4。 4. 组织总 RNA 提取及荧光定量 PCR 总 RNA 提取：将适量结肠组织用 PBS 洗涤干净，置于无 RNA
14、酶的 1.5 ml EP 管中剪 碎， 加入 200 ml TRIzol 液，用超声破碎仪将组织匀浆，补足 TRIzol 液至 1 ml，室温静止 5 min;每 1 ml TRIzol 中加 1/5 总体积的氯仿（200 ml），用力摇晃约 15 s，充分混匀后静置 10 min 后，然后在 4下 12 000 转/分离心 15 min;离心后可见液体分为 3 层（上层清液为 RNA 液），轻轻吸取上层液体至新的 1.5 ml EP 管（约 200 ml），加入等体积异丙醇（200 ml），混 匀后静置 10 min，4 离心机 12 000 转/分离心 10 min;离心后可见 EP 管底部有少量 RNA 沉 淀，弃去上清，留下沉淀，沿管壁缓慢加入加 1 ml 现配的 75%乙醇溶液（用 DEPC 水配，4 预冷），振荡洗涤 RNA 沉淀 1 次后，在 4下离心机 12 000 转/分离心 5 min;去掉上清，沉 淀在空气中干燥 5 10 min。在管中加入适量的 DEPC 水溶解，采用 Nanodrop 超微量分光光
