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1、吉首大学毕业论文 JISHOUUNIVERSITY本科生毕业论文题 目：茶籽饼粕蛋白发酵饲料技术的研究作 者：贾法学 号：20094066048所属学院：化学化工学院专业年级：2009级食品质量与安全指导教师：李加兴 职 称：教授完成时间：2012年12月1日吉首大学教务处制目 录摘 要2关键词2Abstract2Key words2前言21 实验部分31.1 实验仪器和药品31.1.1 实验仪器31.1.2 实验原料41.1.3 实验试剂41.2 实验方法41.2.1 油茶饼粕的制备41.2.2 固态发酵工艺41.2.3 单菌种发酵法初步筛选培养基配方41.2.4 混合菌种配比试验51.2.
2、5 单因素试验51.2.6 正交试验51.2.7 蛋白质含量的测定62 结果分析62.1 不同培养基配方茶籽饼粕发酵后蛋白质含量62.2 混合菌种配比试验62.3 单因素试验72.3.1 接种量对油茶饼粕发酵饲料蛋白质含量的影响72.3.2 发酵温度对油茶饼粕发酵饲料蛋白质含量的影响82.3.3 发酵时间对油茶饼粕发酵饲料蛋白质含量的影响82.4 正交试验结果93 结论9参考文献10摘 要2关键词2Abstract2Key words2前言21 实验部分31.1 实验仪器和药品31.1.1 实验仪器31.1.2 实验原料31.1.3 实验试剂31.2 实验方法31.2.1 油茶饼粕的制备31.
3、2.2 固态发酵工艺31.2.3 单菌种发酵法初步筛选培养基配方41.2.4 混合菌种配比试验41.2.5 单因素试验41.2.6 蛋白质含量的测定52 结果分析52.1 不同培养基配方茶籽饼粕发酵后蛋白质含量52.2 混合菌种配比试验62.3 单因素试验62.3.1 接种量对油茶饼粕发酵饲料蛋白质含量的影响62.3.2 发酵温度对油茶饼粕发酵饲料蛋白质含量的影响72.3.3 发酵时间对油茶饼粕发酵饲料蛋白质含量的影响72.4 正交试验82.4.1 因素水平表82.4.2 正交试验结果83 结论9参考文献9茶籽饼粕蛋白发酵饲料技术的研究贾法指导老师 李加兴（吉首大学化学化工学院 湖南吉首 41
4、6000）摘 要：以油茶饼粕为原料，利用生物发酵技术制备茶籽粕蛋白饲料，首先采用单菌种发酵法筛选培养基配方，再通过混合菌种试验确定最佳的枯草芽孢杆菌，酵母菌和黑曲霉配比，在此条件下，研究了接种量、发酵温度和发酵时间等因素对茶籽粕蛋白饲料蛋白质含量的影响，并经正交试验对发酵条件进行优化。试验结果表明，制备茶籽饼粕蛋白发酵饲料的最佳工艺条件为：接种量为12.5%，培养时间为2d，培养温度为30，通过此工艺可将油茶枯饼的蛋白含量从12.68%提高至21.25%。以油茶粕为主要原料，接入混合菌种进行固态发酵，使油茶粕的蛋白质含量得到较大提高，改善油茶粕的适口性和消化吸收率，从而使油茶粕成为一种较好的蛋
5、白饲料资源。关键词：茶籽饼粕；发酵；蛋白质；饲料。Tea Seed Cake Protein Fermented Feed TechnologyJa FaTeacher Li Jiaxing(College of Chemistry and Chemical Engineering, Jishou University, Jishou Hunan, 416000) Abstract: Camellia oleifera seed meal as the main raw material, to access mixed cultures solid-state fermentation, s
6、o that the the Camellia meal protein content has been improved greatly improve the Camellia meal palatability and digestion and absorption rate, so that the Camellia meal become a better protein feedresources.The camellia cake dregs as raw material, the use of biological fermentation technology in t
7、he preparation of tea seed meal protein feed, the first single strain fermentation method for the screening of culture medium formula, and then through the test to determine the optimum mixed strain of Bacillus subtilis, yeast and Aspergillus niger ratio, under this condition, studied the inoculatio
8、n, fermentation temperature and fermentation time and other factors tea seed meal protein feed on protein content, and by way of orthogonal test to optimize fermentation conditions. The test results show that, the preparation of tea seed cake protein fermented feed of the optimum process conditions
9、for: inoculum 12.5%, fermentation time was 2D, culture temperature 30 , through this process can be oil-tea camellia defatted cake protein content increased from 12.68% to 21.25%. Key words: tea seed meal; fermentation; protein; feed.前言油茶是指山茶属植物种子中含油量较高、且有一定经济栽培价值的一类植物的总称1,与油棕、油橄榄核椰子并称世界四大木本油料树种2。我国
10、现有油茶栽培面积超过300万公顷hm2，年产油茶籽约96万吨。，年产枯饼榨油后将产生70多万吨茶籽饼粕3-6。茶籽饼粕中含有蛋白质10%20%、粗脂肪0.5%7%、粗纤维15%25%、糖类物质30%60%，是一种营养价值较高的榨油工业副产品。油茶枯饼通过微生物发酵，可将其糖类、纤维素等主要成分高效转化成蛋白质，成为高蛋白饲料的优质原料，可有效缓解油茶枯饼被废弃掉或廉价出口到国外等问题，可提高油茶副产物的综合利用率7-8。本试验以油茶饼粕为原料，利用生物发酵技术制备茶籽粕蛋白饲料，首先采用单菌种发酵法筛选培养基配方，再通过混合菌种试验确定最佳的枯草芽孢杆菌，酵母菌和黑曲霉配比，在此条件下，研究接
11、种量、发酵温度和发酵时间等因素对茶籽粕蛋白饲料蛋白质含量的影响，并进一步经正交试验优化考察范围，确定生物发酵制备茶籽粕蛋白饲料的最佳工艺，以期得到蛋白质含量高，动物适口性好的高品质饲料。目前中国在利用油茶枯饼发酵方面做得较多的专家为钟海雁、 邓桂兰。邓桂兰等9-12开展了利用茶粕生产菌体蛋白饲料的研究， 研究结果表明酵母菌能较好利用茶粕中的营养物质， 并可获得较多的茵体干重。钟海雁等13开展了油茶枯饼固态发酵技术的研究， 研究结果表明黑曲霉、 毛霉、 117产朊假丝酵母、 平菇和紫木耳均能在脱皂油茶枯饼上正常生长， 发酵后，其蛋白质含量有一定程度的提高。单一菌种发酵油茶枯饼可提高蛋白产量， 但
12、比混合菌种发酵效果差， 因混合菌种发酵可多个菌种之间互相补偿缺陷， 进行协同发酵14-16。通过指示菌以及配伍菌种的筛选， 优化出蛋白产量高的混合菌种， 达到提高发酵油茶枯饼蛋白产量的目的。1 实验部分1.1 实验仪器和药品1.1.1 实验仪器ZNJ-80型小型不锈钢粗碎机（北京兴时利和科技发展有限公司）；XA-1固体样品粉碎机（江苏金坛市亿通电子有限公司）；JA-5103N高精度电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）； 101-2AB型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；凯氏定氮装置（天津市泰斯特仪器有限公司。）；粗纤维测定仪、压力蒸汽灭菌器（常州国华电器有限公司）、恒温培养箱（常
13、州国华电器有限公司）、无菌工作台（常州国华电器有限公司），这些仪器你把公司和型号自己填上去。1.1.2 实验原料油茶籽，产于湖南浏阳；油茶饼粕，实验室自制；马铃薯，购自吉首阳光超市；黑曲霉、芽孢杆菌，均由吉首大学资环学院提供；酵母菌，购自吉首阳光超市。1.1.3 实验试剂PDA液体培养基、氢氧化钠、浓硫酸、盐酸、硫酸铵、葡萄糖、硼酸、还有指示剂等等，所用试剂均为分析纯。1.2 实验方法1.2.1 油茶饼粕的制备(1) 脱油：将去壳茶籽于50干燥4h后适当粉碎，称取10g左右茶籽置于滤纸包中，索氏抽提脱脂8h后干燥；(2) 脱毒：将脱油茶籽粕置于80100热水中浸提2h43h，期间不断搅拌，然后
14、用两层纱布过滤，重复上述操作2次3次，将滤渣于5060干燥4h8h，粉碎后过40目筛，即得到油茶饼粕；。1.2.2 固态发酵工艺(1) 菌种活化：将黑曲霉、酵母菌、芽孢杆菌接入营养琼脂斜面培养基中，于30下震荡培养3d进行活化；(2) 扩大培养：将活化后的菌种接种于PDA液体培养基震荡培养10h，备用；(3) 接种：按一定接种量和菌种比例将菌种接种至茶籽饼粕培养基中；(4) 固态发酵：将接种后的茶籽饼粕置于培养箱中在适当温度下发酵。1.2.3 单菌种发酵法初步筛选培养基配方以脱毒油茶粕为主，辅助添加外源氮源和营养因子设计发酵培养基配方，见表1。将黑曲霉在液体培养基上活化后，按10%接种量分别接
15、种到菌种筛选培养基中，30C条件下培养3d后，发酵产品在60C烘干24h，测定其蛋白质含量。表1 培养基配方设计Table 1 Medium formulation design编号配方1未脱毒油茶粕20g，蒸馏水20mL2脱毒油茶粕20g，蒸馏水20mL3脱毒油茶粕18g，硫酸铵2g，蒸馏水20mL4脱毒油茶粕16g，葡萄糖2g，硫酸铵2g，蒸馏水20mL5脱毒油茶粕15g，葡萄糖2g，硫酸铵2g，CaCl2 0.5g，KH2PO4 0.5g，蒸馏水20mL1.2.4 混合菌种配比试验在7个50ml锥形瓶内分别放入20g复合原料，按10%的接种量接种枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和黑曲霉的混合菌种，置于30条件下发
