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1、基因工程复习题一、名词解释：（1020%）基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶的Star活性 PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交：将细胞或组织的核酸固定保持在原来的位置上，然后用探针与之杂交的一种核酸分子杂交技术，该方法可较好地反映目的基因在细胞或组织中的分布和表达变化。粘性末端：双链DNA被限制性内切酶切割后，形成的两条链错开几个碱基，而不是平齐的末端。Northern印迹杂交：将RNA进行变性电泳后，再转移到固相支持物上与探针杂交的一种核酸分子杂交技术，可用于检测目的基因的转录水平。转位：一个或一组基因片段从基因组的一个位置转移到
2、另一个位置的现象。基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源的DNA与载体DNA连接成为重组DNA，继而通过转化和筛选得到含有目的基因的宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子的过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA克隆和重组DNA等。目的基因：基因工程中，那些被感兴趣的、被选作研究对象的基因就叫作目的基因。连接器：人工合成的一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段，连接到目的基因的两端，便于基因重组中的切割和连接。转化：受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。停滞效应：PCR中后期，随着目的DNA扩展产物逐渐积累，酶的催化反应趋于饱和，DNA扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即
3、为停滞效应，又称平台期。逆转录PCR：以mRNA为原始模板进行的PCR反应。PCR: 即聚合酶链式反应。在模板，引物，4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。-互补（-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中，插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸的核苷酸序列（又称-肽），该序列不能产生有活性的-半乳糖苷酶。感染（infection）特指以噬菌体、粘粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细
4、胞内扩增。其中，由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移过程又称为转导（transduction）。47、转染（transformation）指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。二、填空题（20%）1、DNA片段重组连接的方法主要有 平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接 。2、感受态细胞是指 具有摄取外源DNA分子能力的细胞。3、噬菌体蛋白对重组DNA体外包装时，包装长度为野生型DNA的75105%。5、PCR反应体系含有耐热的TaqDNA聚合酶，化学合成的寡核苷酸引物，四种dNTP，合适的缓冲液体系。6、核酸探针包括： cDNA探针；基因组DNA探针；寡核苷酸
5、探针和RNA探针。7、部分酶切可采取的措施有：(1)_(2)_ (3)_等。(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积8、DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性： (1)_； (2)_的活性。枯草杆菌蛋白酶；(1)5-3合成酶的活性；(2)3-5外切核酸酶9、为了防止DNA的自身环化，可用_去双链DNA_。碱性磷酸酶；5端的磷酸基团10、基因工程中有3种主要类型的载体： _、_、_。质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体11、pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 ，它的四环素抗性基因来自于 ，它
6、的氨苄青霉素抗性基因来自于 。pMBl； pSCl01；pSF2124(R质粒)13、DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_(2)_ (3) _(4)_ _。(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法14、差示杂交(differential hybridization)技术需要_。两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因16、将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个_，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_。基因组DNA克隆； 基因组DNA文库17、根据Northern杂交的结
7、果可以说明：_。外源基因是否进行了转录18、在_技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。Southern印迹19、可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有_和_的活性。53合成酶；3 5外切核酸酶20、根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)_ (2)_(3)_。(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子21、放射免疫筛选的原理基于以下三点：(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记22、黏粒(cosmid)
8、是质粒噬菌体杂合载体，它的复制子来自 、COS位点序列来自 ，最大的克隆片段达到 kb。质粒；l噬菌体； 4523、限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_，第二、三两个字母取自_，第四个字母则用_表示。属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名24、第一个分离的限制性内切核酸酶是_；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_。EcoK；EcoRl25、切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_的_和_的作用。DNA聚合酶I：5一3外切核酸酶；5一3合成酶26、就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：
9、_、_、_。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源DNA的插入27、pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ，Amp 抗性基因则是来自 。pBR322和M13；pMBl；转座子28、噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是 ； 二是 。它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如l噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽29、Northern印迹和Southern印迹有两点根本的
10、区别： (1)_ (2)_。(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件30、限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的 限制 和对自身DNA的 修饰 来实现的。31、II型限制酶既具有 识别位点 的专一性，也具有 切割位点 的专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。32、个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称 限制性片段长度多态性（RFLP）。33、人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为_时吸附DNA, _时摄人DNA。0C；42C34、野生型的l噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1)
11、(2) (3) 。(1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记35、形成平末端的方法有： 用产生平末端的限制酶切，用S1核酸酶切除粘末端 ，用DNA聚合酶填平粘末端。36、回收DNA片段时，在确定DNA条带位置时，应使用 长 波长紫外灯，以最大限度减少对DNA的照射损伤。37、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-, r-表示 限制缺陷型， m-表示 修饰缺陷型 ，rec-表示 重组缺陷型。38、CaCl2法制备感受态细胞转化DNA时，DNA以 DNA-Ca2+ 复合物形式吸附于细胞表面。39、TaqDNA聚合酶具有 ，缺乏 因此无 。53聚合酶活性， 35外切酶活性，校正功能40、
12、PCR循环次数一般设定为 ，过多的循环次数会导致 的出现。2530次， PCR反应“平台效应”。41、如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5突出的黏性末端，则可以用_进行3末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3突出的黏性末端，可以用_进行3末端标记。Klenow酶填补的方法；T4DNA聚合酶42、限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链DNA。43、需要部分酶切时可采取的方法有：减少酶的用量；缩短反应时间；增大反应体积。45、重组DNA技术的基本过程：目的基因的制备；载体的选择和制备；DNA分子的体外连接；将重组DNA导入宿主细胞；重组体的筛选和鉴定；重组体的扩增、表达和其他研究。46、在分离质粒DNA的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处：可以扩增质粒DNA；抑制了菌体的数量，有利于裂解。48、II型限制酶既具有 识别位点 的专一性，也具有 切割位点 的专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。50、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-, r-表示 限制缺陷型， m-表示 修饰缺陷型 ，rec-表示 重组缺陷型。52、核酸的体外标记法分为 和 。化学法；酶法53、核酸的体外标记法中的酶法最常用的是 和 标
