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1、基因工程复习题题型：名词解释（10 个）30 分；填空（每空 1 分） 20 分；选择题 （每题 1 分）10 分； 简答题 （4 个）20 分；论述题 （2 个）20 分。第一章 绪论1.名词解释：基因工程：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对遗传物质 DNA 直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。遗传工程广义：指以改变生物有机体性状为目标，采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作，以改良品质或创造新品种。包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。狭义：基因工
2、程。克隆：无性(繁殖)系或纯系。指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的 DNA 分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。2什么是基因克隆及基本要点?3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。A) 限制性切酶和 DNA 连接酶的发现（标志着 DNA 重组时代的开始）；B) 载体的使用；C) 1970 年，逆转录酶及抗性标记的发现。4.基因工程研究的主要容是什么？ 基础研究：基因工程克隆载体的研究 基因工程受体系统的研究目的基因的研究基因工程工具酶的研究基因工程新技术的研究应用研究：基因工程药物研究转基因动植物的研究在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究第二章 基因克隆的工具酶
3、1.名词解释：限制性核酸切酶：一类能识别双链 DNA 中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的脱氧核糖核酸酶。回文结构：双链 DNA 中的一段倒置重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构。同尾酶：来源不同、识别序列不同，但产生相同粘性末端的酶。同裂酶：不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列黏性末端：DNA 末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的 DNA 末端通过互补配对粘合，这样的 DNA 末端，称为粘性末端。平末端：DNA 片段的末端是平齐的。限制性核酸切酶的酶活性单位（U）：在酶的最适反应条件下，在 50l 容积中，60 分钟完全切割 1mg l
4、DNA 所需的酶量为 1 个酶活性单位（unit 或 U）限制性核酸切酶的星活性：指限制性切酶在非标准条件下，对与识别序列相似的其它序列也进行切割反应，导致出现非特异性的 DNA 片段的现象。连杆（linker）：化学合成的 812 个核苷酸组成的寡核苷酸片段。以中线为轴两边对称， 其上有一种或几种限制性核酸切酶的识别序列，酶切后可产生一定的粘性末端，便于与具 有相同粘性末端的另一 DNA 片段连接。衔接头（adaptor）：化学合成的寡核苷酸，含有一种以上的限制性核酸切酶识别序列。其一端或两端具有一种或两种切酶切割产生的黏性末端。底物位点优势效应：酶对同一个 DNA 底物上的不同酶切位点的切
5、割速率不同。激酶：对核酸末端羟基进行磷酸化的酶。2. 说明限制性切核酸酶的命名原则要点。用属名第一个字母和种名的头两个字母组成的 3 个字母斜体的略语表示寄主菌的物种名以及菌株（型）的代号命名。该菌株（种）中发现的不同的酶按照顺序以罗马字母编号 I, II, III 等。如：Escherichia coli 用 Eco 表示。第四个字母代表菌株或株型、变种名，若酶存在于质粒上，则需大写字母表示非染色体遗传因子。例：Hind III 从流感嗜血菌株（HaemophilusInfluenzue）d株中分离的第三个酶。EcoRI表示基因位于Escherichia coli 中的抗药性 R 质粒上。前
6、三个字母用斜体，其他用正体表示。如果酶存在于一种特殊菌株中，三个字母后加上菌株名称符号,名称最后部分往往包含罗马数字, 表示在该特殊菌株中发现这种酶的先后次序。3. 引起限制性核酸切酶星活性的可能因素有哪些？若使用 buffer 不当, 会有 star activity，而 star activity 是指限制酶对所作用的 DNA 及序列失去专一性,当酶辨认切割位置的能力降低，导致相似的序列或是错误的辨认序列长度也会作用，而产生错误的结果。所以当 DNA 同时以两种限制酶处理时，选择可使两种酶之活性反应均可达 75以上的 restriction buffer，若找不到适当的 buffer 则先
7、加低盐的 buffer 使其中一酶作用后，在加入高盐 buffer 使另一酶作用，若无法以盐的高低分别加入不同的 buffer，则先加入一种 buffer 作用后，加 3M NaOAc/95alcohol 沉淀 DNA，再加另一种 buffer 作用。4. DNA 片段之间的连接方式有哪些？具黏性末端的 DNA 片段之间的连接、具平末端 DNA 片段之间的连接、DNA 片段末端修饰后进行连接、DNA 片段加连杆（linker）后的连接。5. 什么是 Klenow 酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆
8、菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5-3 外切活性的肽段后的大片段肽段，而聚合活性和 3-5 外切活性不受影响。也称为 Klenow 片段（Klenow fragment），或 E.coli DNA 聚合酶 大片段。53聚合酶35外切酶无小亚基活性6. DNA 聚合酶、RNA 聚合酶、反转录酶、末端转移酶、多核苷酸激酶和碱性磷酸酯酶有哪些主要特性？它们在基因工程中的主要用途分别是什么？第三章 基因工程的载体1.名词解释：载体:指能够运载外源 DNA 片段（目的基因）进入受体细胞，具有自我复制能力，使外源DNA 片段在受体细胞中得到扩增和表达，不被受体细胞的酶系统所破坏的一类 DNA 分子。克隆载体
9、：用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。一般具有较低的分子量、较高的拷贝数和松弛型复制子。主要由细菌质粒或与其它质粒、噬菌体及真核生物病毒的 DNA 重组构建。表达载体：使目的基因在宿主细胞中得以表达的载体。可将重组体 DNA 导入适合的受体细胞，使所载的目的基因能够复制、转录和翻译。穿梭载体:称双功能载体(bifunctional vector)。能在两种不同的生物体复制的载体。质粒:指独立存在于宿主细胞染色体外、能够自我复制的 DNA 分子。松弛型质粒:拷贝数多于 10 个的质粒。严谨型质粒;拷贝数为 1 至几个的质粒。接合质粒；指质粒所携带的基因的功能是使细胞彼此有效地接触，以便将质粒
10、 DNA 从供体细胞转移至受体细胞。如：质粒上的 tra 基因使宿主细胞（大肠杆菌）产生菌毛，合成细胞表面物质，促使宿主细胞与受体细胞接合。质粒的不亲和性；显性质粒;隐性质粒；质粒的迁移作用； 多拷贝质粒；整合质粒；穿梭质粒；表达质粒；探针质粒；pUCl8 质粒；pBR322 质粒；溶菌生长;溶源生长；原噬菌体；烈性噬菌体；溶原化；柯斯载体或粘粒(cosmid)；cos 位点；人工染色体2. 作为工程载体必备哪些基本条件？3. 试述质粒载体、噬菌体载体、柯斯载体、M13 单链丝状噬菌体载体和酵母人工染色体载体各自的组成特点及其在基因工程中的应用。4简述质粒的生物学特性有哪些？5构建人工质粒的目
11、的？6理想质粒载体应具备的条件及构建需遵循的原则是什么？7-DNA 作为载体的优点是什么？8. 为什么野生型的l噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体?该如何改造？第四章目的基因的制备1.名词解释：目的基因；基因文库 cDNA 文库；2.常规分离目的基因的方法有哪些？其原理分别是什么？3克隆目的基因的方法有哪些?4什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库的原理，涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库、cDNA 文库有什么不同?第五章 目的基因的导入和重组子的筛选1.名词解释：受体细胞；感受态细胞；转化；转导；转染；体外装配；转换子；重组子； 转化率；负筛选；正筛选； a
12、互补筛选2. 试述几种常用的转化方法。3.试述根据载体的选择标记进行重组子筛选的方法和原理。4.试述根据插入序列的表型特征进行重组子筛选的方法和原理。5.DNA 片断之间的连接方式有哪些？各种连接方式的优缺点及 DNA 重组中需要注意什么问题？6受体细胞选择的原则？第六章 外源基因的表达1.名词解释：融合蛋白；分泌蛋白；包涵体；外源基因表达体系2. 大肠杆菌表达载体构成的重要元件有哪些？3.试比较大肠杆菌、酵母、植物和动物细胞基因表达载体各自组成的特点。4. 真核基因在大肠杆菌中表达存在的问题和高效表达的对策是什么？5.基因表达产物的检测方法有哪些？第七章 基因操作的基本技术1名词解释：分子杂
13、交；探针；PCR; 引物；随机引物；切口位移；热启动；缺口翻译；Northern 印迹；Southern 印迹2DNA 制备的基本步骤有哪些？3碱裂解法和 CTAB 法的原理。4凝胶电泳有哪几类？影响琼脂糖凝胶电泳的参数有哪些？5PCR 的基本原理是什么？PCR 反应体系的组成成份是什么？6试述 PCR 反应的程序及参数。7PCR 反应引物设计需遵循的原则有哪些？8试述核酸分子杂交的类型和基本步骤。9.探针标记的方法有哪些？10说明 Southern 杂交的原理和方法。11.Northern 印迹与 Southern 印迹有什么不同?第八章 植物基因工程及应用1植物遗传转化方法主要有？2基因枪
14、转化的优点？3天然的 Ti 质粒能作为表达载体使用吗？为什么？4理想杀虫剂应具备什么特性？第九章 动物基因工程及应用1.名词解释：转基因生物；共抑制效应；多效性胚胎干细胞2转基因共机制效应的特征？3导致转基因失活的原因可能有哪些？4试述动物基因工程的载体有？5如何筛选转基因多效性干细胞？第十章 医学基因工程及应用1.名词解释: 胰岛素;基因诊断;基因治疗;2.基因鉴定的作用？3.如何进行基因治疗？基因工程原理练习题及其答案一、填空题1基因工程是年代发展起来的遗传学的一个分支学科。2基因工程的两个基本特点是：(1)，(2)。3基因克隆中三个基本要点是：；和。4通过比较用不同组合的限制性切核酸酶处
15、理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性切核酸酶切点相互位置的。5限制性切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自 ，第二、三两个字母取自，第四个字母则用表示。6部分酶切可采取的措施有：(1)(2)(3)等。7第一个分离的限制性切核酸酶是；而第一个用于构建重组体的限制性切核酸酶是。8限制性切核酸酶 BsuRI 和 Hae的来源不同，但识别的序列都是，它们属于 。9DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用切割 DNA 聚合酶 I 得到的分子量为76kDa 的大片段，具有两种酶活性：(1)； (2)的活性。10为了防止 DNA 的自身环化，可用去双链 DNA。11EGTA 是离子螯合剂。12测序酶是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，它只有酶的活性，而没有酶的活性。13切口移位(nicktranslation)法标记 DNA 的
