中药及其制剂中丹皮酚的含量测定

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1、中药及其制剂中丹皮酚的含量测定摘 要 ：丹皮 酚 的 含 量 是 衡 量 牡 丹 皮、徐长 卿 等 中 药 材 及 以 其 组方 的 制 剂 六 味 地 黄丸等质量控制的重要指标。本文综述了近年含丹皮酚的中药材及中药制剂测定 时的前处理条件和各种测定方法。关键词：丹皮酚;牡丹皮;徐长卿;药物分析牡 丹 皮 为 毛 茛 科 芍 药 属 牡 丹 (PaeoniasuffruticosaAndr.)的 干 燥 根 皮 ， 徐 长 卿为 摩 萝 科 植 物 徐 长 卿 (Cynanchumpaniculatum(Bge.)kitag.)的 根 及 全 草 。 两 者 均 是具有抗菌消炎作用的常用中草药

2、，其主要有效成分均是丹皮酚(patpnol)。在常见 的中药制剂六味地黄丸、金匮肾气丸、麦味地黄丸、当归养血丸等十余种中成药 处方中均有配伍使用。丹皮酚含量是评价这些中成药质量的重要定量指标。中国 药典(一九九五年版)规定六味地黄丸中丹皮酚含量是其定量指标之一1。由于中 药材及其制剂成分十分复杂，若需要测定其中某一成分，样品的前处理是关键的 一步，而处理方法又必须与选定的分析方法相适应。现将含丹皮酚的中药材及其 制剂的样品处理和含量测定方法综述如下。1、光谱法1.1 紫外-可见分光光度法(Ultravioet-VisibleSpectrophotometry ， UV)紫外-可见分光光度法具有

3、操作简单、费用较低等优点。 但由于该法基本上 没有分离能力，样品处理要求严格，故常被用于一般要求不很严格的测定以及中 药材炮制方法、处理条件的比较、制剂工艺选择等方面。丹皮酚具有一定的挥发 性，光谱法中样品处理一般都用水蒸气蒸馏或直接蒸馏法提取，以减少混入杂质， 通常蒸馏液稀释后于 274nm 处测定吸收度。 周玉生等2用该法测定了牡丹皮中 丹皮酚含量，比较了不同加工方法的丹皮酚的含量：取已加工的牡丹皮样品适量， 置蒸馏瓶中，加水约120mL，蒸馏后得馏出液约有95mL，稀释后在274nm测定 吸收度。结果发现，水洗50 C烘干损失率最高，为34.96%;白酒喷淋晾干，损失 率最低， 为 11

4、.19% 。 毛黎明等3用水蒸汽蒸馏法测定了六味地黄的浓缩丸、口 服液、胶囊三类制剂中丹皮酚含量，将试样蒸馏后，收集馏液约 450mL ，加水稀 释， 定容后， 在 270nm 处测定吸收度。 结果发现不同制剂含量有明显差别。 周 海梅等4将样品置烧瓶中， 加水后直接蒸馏， 收集蒸馏液， 稀释后用 UV 测定 结果与水蒸气蒸馏提取测定无明显差异。 陈文斗5利用丹皮酚能与对硝基氯化 重氮苯在碳酸钠溶液(pH10.511.5)中偶合呈色的原理，测定了制剂中丹皮酚含 量。 其方法是将牡丹皮样品在 P2O5 真空干燥器中干燥至恒重， 取粉末 100mg 加 0.2%NaOH 溶液振摇，静置过滤，取续滤

5、液适量，加入乙酸钠缓冲液和偶合试 剂， 反应 2min， 再加入碳酸钠溶液， 反应 3min， 定容， 以溶剂加试剂同样处理 后为空白，在480nm处测定吸收度，结果丹皮酚在6.0230.1“mol/L范围成良 好线性关系， 丹皮酚回收率达(99.97 0.97)% 。1.2 胶束荧光法(MicellarFluorimetry ， MCF)胶束荧光法常用十二烷基硫酸钠（SDS）作为胶束试剂，SDS在水溶液中能形 成一种亲水基团向外、疏水基团向内的有序排列。当浓度该试剂的临界胶束浓 度时，在溶液中形成胶束。在胶束的胶核里有一个疏水环境，有利于极性较小的 丹皮酚的溶解，提高了微环境里丹皮酚的浓度，

6、特别是由于胶束的稳定作用，能 提高荧光量子产率， 使该方法的灵敏度得到提高。 庞志功等6用该法测定了牡 丹皮和徐长卿中的丹皮酚含量。样品用lmol/L的HC1-甲醇溶液浸泡1h后，氯 仿提取，提取液浓缩至干，用V（氯仿）:V（甲醇）=1 : 1溶解定容，取20吐,硅 胶薄板点样，展开，刮取丹皮酚斑点，用申=95%乙醇浸泡洗脱后，取适量，加 2mLSDS溶液（1.5%）和水，快速混匀器上振荡5min，再用水定容，于EX275nm , EM550nm处测定荧光强度，丹皮酚在20pg/mL800ng/mL浓度范围内成线性， r=0.9934 ， 平均回收率 94.2%（n=4） ， 最低检出限 5.

7、7pg 。 该方法操作简便， 灵敏 度高， 适用于微量丹皮酚的测定。2、色谱法（chromatography）用于分析丹皮酚的色谱法有GC法、HPLC法、TLC法等，由于色谱法具有 较高的分离能力和灵敏的检测能力，最适合于中药材及其制剂中有效成分的定性 定量测定。2.1 气相色谱法（Gaschromatography ， GC）气相色谱法具有很强的分离能力和很高的灵敏度，只需很少量的样品即可得 到满意的结果。因此是分析成分复杂的中药中痕量成分的有效手段。为了增加检 测灵敏度和选择性，并出于对色谱柱和检测器的保护，GC以及HPLC对中药样 品的处理要求也较严格，除水蒸气蒸馏法外，还有多种其它有效

8、的提取方法。杨 昌金等将六味地黄丸粉末1g用V（氯仿）:V（丙酮）=2 : 14mL，室温浸泡1h， 超声20min，再加内标溶液（十八烷，2mg/mL丙酮液）1mL，摇匀，静置，取上清 液lL进样。色谱条件:2m长玻璃柱，填充剂用5%E-301涂布chromasorbw 担 体（80100目）而成，柱温185 C,检测器及进样口温度220 C, N2为载气。结 果，丹皮酚含量在 4200ng 内线性良好， r=0.9998 ，平均回收率99.6%，检测下 限浓度 20ng/mL 。 殷霞等8用高分辨气相色谱法测定了六味地黄丸中丹皮酚含 量，将样品碾碎，置索氏提取器中用乙酸乙酯提取4h，提取液

9、过滤，浓缩至干， 残渣用含内标正十六烷的甲醇溶液2mL溶解，离心，取上清液1吐进样。色谱 条件：28mx 0.28mmFSOT 柱，固定液SE-30，柱温180 C,检测室、气化室温度 均320 C,N2为载气，分流进样，分流比1 : 93 , FID检测。结果，在2.512.5卩g/mL 内，线性相关系数 r=0.9995 ，平均回收率 100.3% ，RSD=1.38% 。 郭丽冰等9用 直接蒸馏-大孔树脂-气相色谱法，测定了徐长卿中丹皮酚含量。样品粉末经水蒸 气蒸馏后，取蒸馏液上大孔树脂DA-201柱，用乙醇洗脱，定容后吸取0.5mL洗 脱液，加0.5mL内标（正十七烷乙醇液）,混匀后，

10、取1卩L进样。色谱条件， Hp-1710mx 0.53mmI.D.弹性交联石英毛细管柱，程序升温，分离检测，检测器FID, 温度 220C， N2 为载气， 分流进样， 分流比 1: 5， 在 380ng 内， 线性相关系 数r=0.9997，平均加样回收率99.42% , RSD=2.28%。段玲等10用毛细管气相色 谱 法 ， 以 正 十 五 烷 为 内 标 ， 测 定 了 牡 丹 皮 中 丹 皮 酚 含 量 ， 样 品 置 100mL 恒 压 滴 液漏斗中，用无水乙醇回流提取4h,取提取液ImL加内标50yL ,混匀，进样 0.1吐。色谱条件，石英毛细管柱(10mx 0.25mmI.D.

11、) ，SE-3O键合相，FID检测， 用三因素二水平正交设计-单纯形组合优化法对柱温、进样室温度、柱前压进行 试验，得出最佳条件：柱温130 C,柱前压0.55kg/cm2。丹皮酚在10900ng范 围内线性相关，r=0.9984，平均回收率99.28%，RSD2.6%，结果与药典法、HPLC 法一致。房杏春等11 用直接蒸发-高分辨气相色谱法测定了牡丹皮和六味地黄丸 中丹皮酚含量。取样品粉末(60目)1mg，精密称定，置裂解炉铂舟中，320 C， 停留1min，丹皮酚完全蒸出，进入分析柱分析，结果准确稳定，精密度RSD小 于4.0%。色谱条件:固定液SE-30，融熔石英毛细管柱(28mx 0

12、.28mmI.D.)，柱温 185 C，气化室温度250 C，N2为载气，FID检测。在2.510聘 范围内，线性 相关系数 r=0.9981 。该法操作简便、快速、重现性好、用量少，避免了其它前处 理时间长、操作繁琐、成分可能损失、会引进污染等缺点，特别有利于名贵中药 分析。但该法需特殊附属设备裂解炉。缪海均等12用超临界流体萃取法(SFE) 对牡丹皮及其成方制剂进行处理， 然后用大孔径毛细管柱分离测定丹皮酚含量。 其最佳提取条件是： 超临界流体为 CO2， 温度 90C， 压力 28mPa， 改性剂氯仿 0.5mL，动态萃取体积3mL，静态萃取时间5min，在超临界萃取器中萃取。萃取 物以

13、十六烷醇为内标，氯仿定容，取0.5此 进样分析。气相色谱条件，大孔径交 联石英毛细管柱(40mx 0.53mmI.D.)，固定液SE-30，程序升温分离分析，100 210C， 20C/min， 气化室温度 240C， FID 检测， 温度 280C， 载气 N2。 分析 结果，在0.050.8聘内，r=0.9999，药材和制剂的平均加样回收率分别是97.8% , 100.3%， RSD 分别是2.35%和1.89%。该法利用超临界流体提取中药成分具有一 定的选择性，提取效率高、混入杂质较少、可直接进样。并且大孔径毛细管气相 色谱法有较高的总柱效、理想的表面惰性、接近填充柱的负荷量、较长的柱寿

14、命 及较快的分析速度等突出优点， 非常适用于含复杂组分的中药分析。2.2 高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidchromatography ， HPLC)高效液相色谱法具有高分离能力、高灵敏度、应用广泛的特点。特别是反相 高效液相色谱法对于含有多组分混合物的中药及其制剂的分析测定更具特色。汪 海孙等14用外标法测定了桅柏地黄丸等九种含有牡丹皮的中成药中丹皮酚的 含量。将样品干燥粉末1g用甲醇浸渍24h，离心，取上清液5此进样分析。色 谱条件：日立胶3010柱(50cmx 2.1mmI.D.)，甲醇为流动相，流速1.5mL/min，UV 检测波长274nm。结果平均加样回收

15、率100.08%，RSD=0.36%，在0.21.0聘 内， 线性相关， r=0.99992 。丁安伟等14测定了丹皮炭中丹皮酚的含量。取干燥样品 粉末15mL，用甲醇10mL浸泡，超声波超声30min，离心，取上清液10吐 进样。 色谱条件：PE-PackC18 柱(150mmx 4.6mmI.D.)，流速 0.5mL/min ，274nmUV 检测。 结果在0.0250.38聘 范围内成良好线性，r=0.9999，平均加样回收率103.4%， RSD=1.31% 。 刘放等15用外标法测定了牡丹皮中丹皮酚含量。 取过60目筛的 样品粉末0.1g用30mL甲醇浸泡超声处理30min，甲醇定容

16、，静置，取上清液微 孔滤膜滤过，取10gL进样。色谱条件：ResolveODS 柱(150x 4.6mmI.D.)，V(甲 醇)：V(乙酸)：V(水)=58 : 2 : 40，流速 1mL/min , 274nmUV 检测。结果在 0.025 0.25聘 内线性良好，r=0.9997;平均加样回收率97.07% , RSD=1.12%。并用乙醚 萃取作对照， 结果无显著性差异， 但后者要求室温下挥去乙醚， 再用甲醇定容， 才能保证丹皮酚不会挥发损失。郭戎等16用外标两点法测定了加味逍遥颗粒中 丹皮酚含量。将颗粒碾细，取0.2g用流动相10mL浸泡，超声处理30min，提取 2次，离心，上清液稀释定容，微孔滤膜过滤，取5此进样。色谱条件：YWG-C18 柱（150x 4.6mmI.D.），流动相:V（甲醇）：V（水）：V（冰乙酸）=80 : 20 : 1，流速 0.5mL/min，柱温 30 C，274nmU