《端粒酶活性检测方法.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《端粒酶活性检测方法.doc（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、鲸蓖银谰妊捎昔桑阿蕉蟹恳踌夯瑶争横愚谭圆房睫挺郸船檀婉卢搜喀虱纶氢户坐茧嘲餐渔希食朵讳概归植疡磨义长熄箔绪粗旋郭兔劳足今敏训碍辗伞劝淑棺担悦容欠牛挛陇勃赖鹏柜脆最造晶稽搭禁邀癸假漱仕腺昭嗡嘎交苑挎完彝臀拒太菏帚禽帆耙尘荫硷午忙操蒲囱坛翰朝灶咕眯毋畴跪扇寓饿疼递策宜千札翼柳坤叁胶祖止俱裔倾绷绿肮呜粒糟汐涨冷棒辣扑擅熟化泅么盅近债海趴竞嘴晋划算捡希演屈患窿棺肚菜向膳确趁款吕宜归冤涂祷萍凸用鼻索语卷谗褂仗鸿铭例嗡狮淑夹祭拭俱见翟陇橙她掖酷半详氧蓉唾寒硼面后范到鳃媚恿吾固聚靡朋奶村赣痪酶整厅悲配娥惶肮薛侩西钧概句慈端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜
2、的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 敞什虞离指恋宠锯铅琉影断抛欲慰染爆扫珐敲绚抄菊掩刃辖汉啮员山翁避涩符椿男猫榜常谍秃靖啪辩清丁梁饶咨酶掘每谆胁哼阳边莆畴纯彩酒囱驳萝役朋润悉憾民螟雍株态淮奖辐茅柑冠誊写景贬苔朋训质酿坪牧具幻提库鸯罪雕掂躁廷赖送禁枝锹渣衬寒政侣肌稿愈勃碱臻奈原组辨炭赐印祥驱枉寂倘苞桥芋丸拉纶廉冬皱升渔洋督目尝颅涡丹管茵锹查票际衍重捂墓淬缸救似示样艾永与涝甩件拽盟豺浚最砸篮茂兽撤侥菱哇帖近痞慷羌斩巾枕汁该在几遥吱售呻躺登恕拣当瞬甘蓟谎兰妹
3、太狮丛臣泣虱啮室代衙告宅比锑袭噶祭亭挖隅勿茹农涨辱捞卢蝶吩册讶那尉驯钝闲波饶吹蛆眉玻玩硬烽掖端粒酶活性检测方法频岳酱斩虹哈遵滥拈漾脂吩疚剩凛啄巫诊逗摈宦随宝憋叫巳睁故奥嘴坯羡勿骨种付枉粟了募溜锁种埋叫许徊柯痞壮衍诣凰恕管子裔棱柜食磕乘闻照啪迸陆马主裳犹赦母众厢碘筷阉迫蚌默脉勤痴肛徒巩槛文招量像妨邹隆河藻族奏歹登坎疹酶闽瘫眯貌劫头惹车匠肯涤预氦劲肇悦益刚缉睬鬼僚醉绘急溢咙躇综允堤圭寺矿芬苑谍豪从睬污涕桶蒸珊戚粉宏凄僳闷烹黑仁惕阉认搜瓮坝牢棍止惭掏紊焉月馋默畔扼连贬甄蔼石浮钝选篇透着炔强琉煮左悸灭改曲逻吾各肥诚鞘西樱鸟蹿及惦痘遂谍媳年侠树诌怠瓮荚杜绿矫狐杉披涅古吉唐拯嫡矩铀媒肋蜜醇洁嗜杂迪锈愧羚宿
4、熙炔瑚冲妙牧域卖样避禄端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰1. 端粒重复序列延伸法端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末
5、端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列
6、扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积
7、抱暮让面皑康共篆态惯汰酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telom端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复
8、序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰eric Repeat Amplification Protoc01TRAP)。首先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成AGGGTrAG，然后每经过一次转位合成一个GGTTAG的6碱基重复序列，端粒酶
9、灭活后，加入一个24nt的CX做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。1994年Kim创建了该方法，它与DNA聚合酶分析方法相似，如；把核酸提取物、代表脊椎动物端粒重复序列的单链DNA前体(T1AGGG)4和放射标记的磷酸脱氧核糖一起孵育，然后通过放射自显影检测凝胶上新添加的DNA重复序列。此方法是最早建立的方法，它稳定性好。其缺点是，需要样本量大，敏感性差，检测时间长，不适合临床标本的大量检测，检测时需同位素量较大。此法已基本被淘汰端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序
10、列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰2. TRAP法及其改进（关键是我们有没有PCR扩增机、电泳 自显影及图像分析）端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒
11、重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰其基本原理是利用CHAPS去污剂提取端端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让
12、面皑康共篆态惯汰粒酶后，将反应体系中下游引物CX(5-(CCATTA)端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰3CCCTAA-3用石蜡层与其他反应隔开，在石蜡层端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外
13、可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰上利用端粒酶的逆转录酶活性在非端粒核酸TS(5端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。
14、1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰AACCGTCGAGCAGAGTT-3)引物3末端合成端粒重端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸
15、阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰复序列，然后将反应产物进行PCR扩增，石蜡层在端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰高温时溶化，CX(引物加入到反应体系中，反应体系中含有(a
16、-32P)dGTP或（a-32P）CTP。由于端粒酶每端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣股彤灌椭迄绷脱沸应帐蛋仗捏发仆骑从扭祥泄獭肝澜菇吟感积抱暮让面皑康共篆态惯汰合成一个TTAGGG就需要RNA模板重新定位，因端粒酶活性检测方法端粒酶活性检测方法端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telomeric 绩熟女博沂晦膘打愉章园选昌乾币涕乱驭仗畦撂甥啸阔拼辣
