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1、高考生物实验专题复习一 观察实验姜万录 吉林梨树县第一高级中学 136500观察实验是指凭借人的感官直接对客观事物进行感知和描述，或者利用科学仪器和其他技术手段对客观事物进行考察。后者在观察过程中由于使用了显微镜等仪器和测量工具大大扩展了观察的范围，提高了对细小事物的分辨能力。在实验中，人们通过观察实验对象“是什么”，或在一定条件下发生了“怎么样”的变化，来感知生物体的成分和结构的存在，揭示生物体生命活动的规律。因此，观察实验是生物研究中必不可少的重要手段，是学生必须掌握的一类重要的实验。1明确实验的要求和内容，奠定实验基础观察实验要求选择适当的生物材料，确定合适的观察对象，采用恰当的观察手段
2、和观察程序进行观察，最后明确观察结果。观察时从方位上看，一般采取先整体后局部，从外到内，由表及里，从左到右，从上到下的顺序进行观察；从方式上看，一般先用肉眼，再用放大镜，最后用显微镜。用显微镜观察需先用低倍镜后用高倍镜。总之，观察时要善于从事物和现象之中注意到各种不显著但却非常重要的属性和特征。高中教材中观察实验包括以下6个实验，其中“自生固氮菌分离”为选做实验，高考考试大纲不作要求。具体内容如下表：实验名称观察方式观察手段生物材料观察对象染色剂观察结果实验二：用高倍显微镜观察叶绿体和细胞质流动微观观察原色观察显微镜（装片）观察藓叶黑藻叶绿体无叶片细胞中绿色、扁平的椭球形或球形的叶绿体且围绕液
3、泡进行流动实验四：观察植物细胞的质壁分离和复原显微镜（装片）观察洋葱鳞片叶表皮紫色液泡无液泡体积缩小，颜色加深（质壁分离）；液泡体积增大，颜色变浅（质壁分离复原）；实验三：观察植物细胞的有丝分裂染色观察显微镜（压片）观察洋葱根尖染色体碱性染料（龙胆紫和洋红）染色体形态和位置实验三(选修)：自生固氮菌分离（选做）显微镜（涂片）观察土壤微生物固氮菌结晶紫培养基稀泥浆出现黏液（无色透明乳白色褐色）镜检可见紫色自生固氮菌实验一：生物组织中脂肪鉴定显微镜（切片）观察花生种子脂肪苏丹或细胞中染成橘黄色或红色圆形小颗粒实验十二：观察SO2对植物的影响宏观观察直接观察肉眼观察黄瓜幼苗植物叶片无叶片褪绿，变成黄
4、白色，叶脉间出现黄白色点状“烟斑”表12掌握实验技术，培养实验技能在观察实验中常综合运用显微镜观察技术、玻片标本制作技术、染色技术和微生物培养和分离技术等。21显微镜观察技术显微镜是生物学实验中经常使用的一种工具，适用于观察生物的微观结构。具体内容包括：211显微镜的构造：中学生物实验使用的是普通光学显微镜，其构造由光学系统和机械系统两大部分组成（如图所示）。光学系统包括物镜、目镜、反光镜（照明装置）；机械系统包括镜座、镜柱、镜臂、载物台、压片夹、遮光器（聚光器）、镜筒、物镜转换器和调焦装置（粗准焦螺旋和细准焦螺旋）等。机械系统主要是保证光学系统的准确配置和灵活调控。212显微镜的成像原理及主
5、要性能2121成像原理光源（天然光或人工光源）反光镜光圈物体物镜（凸透镜）在镜筒内形成一个倒立放大的实像目镜把经物镜形成的实像进一步放大形成一个虚像。所以眼睛看到的是经2次放大的一个倒立的虚像。2122分辨率分辨率是指分辨被检物体细微结构的能力。通常用能分辨的两个物点间的最小距离来表示（分辨距离0.61入/N.A,入：光波长，N.A：物镜镜口率）。辨距离越小，分辨率越高，物象越清晰；分辨距离越大，分辨率越小，物象越模糊。对任何显微镜来说最重要的是他的分辨率，而不是放大倍数。2123放大倍数亦称放大率。物象的大小对物体大小的比例叫做显微镜的放大倍数。显微镜的总的倍数目镜的放大倍数物镜的放大倍数。
6、该放大倍数指的是长度或宽度，而不是面积和体积。2124视野及镜像亮度视野是指一次所能观察到的被检标本的范围。视野的大小与放大倍数成反比，即放大倍数越大视野越小，看到的标本范围就越小；反之就越大。镜像亮度是指视野里所看到的像的亮暗程度。他与放大倍数成反比，即在光源一定的情况下，放大倍数越大，视野越暗。所以，在用高倍镜后用油镜观察标本时，必须移动标本才能看清楚其他部位，并使用凹面镜、大光圈或增强光源，以改善视野亮度，而使物象明亮清晰。213显微镜的使用方法2131取镜和安放：取镜时，一手握镜臂，一手托住镜座，将其轻轻地放在实验台的前方稍偏左的位置上。2132对光：适的目镜和物镜。转动物镜转换器，使
7、低倍镜对准载物台中央的通光孔。左眼从目镜中观察，同时调节反光镜直至视野明亮，均匀为止。2133低倍镜观察：把所要观察的玻片标本放在载物台上（盖玻片一侧朝上），用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心，转动粗准焦螺旋，下降镜筒（或是升高载物台），从侧面观察，使物镜接近标本（但不能碰到玻片）；左眼看目镜内，同时反向缓缓转动粗准焦螺旋，使镜筒上升（或是下降载物台），直到看到物象为止，再调节细准焦螺旋，至物象清晰。任何需要观察的标本都要先用低倍镜观察，原因是：低倍镜视野相对大，便于找到目标不；易调节，防止镜头与装片相碰。2134高倍镜观察：在低倍镜下找到需高倍镜观察的部位并移到视野中央（因为低倍镜下看到的
8、物象放大倍数小，但看到的标本的实际面积大，容易找到目标；与低倍镜相比，高倍镜下看到的物象大，同样的视野面积看到的标本的实际面积小，在玻片不动的情况下，高倍镜看到的只是低倍镜视野的中心部分）。移动装片时向预示相反方向移动；转动物镜转换器，移走低倍镜，换上高倍镜，稍微调节细准焦螺旋使物象清晰，调节光圈和反光镜，使视野亮度适宜。2135观察后处理：用绸布或擦镜纸清洁显微镜上的污物。擦完后使物镜转离光轴，把反光镜转到载物台垂直的方向，罩上镜套，小心地放回镜箱内。214低倍镜和高倍镜的主要差异（见下表）比较项目目镜镜头长度物镜镜头长度物象大小视野大小观察细胞数目多少视野亮度物象清晰度高倍镜短长大小少暗模
9、糊低倍镜长短小大多亮清晰表222玻片标本的制作技术显微镜观察的对象是薄而透明的。因此，生物材料必须制成玻片标本才能通过光学显微镜观察。玻片标本有临时玻片标本和永久玻片标本。在使用显微镜的中学实验中，观察的对象主要是临时玻片标本。根据制片方法的不同可分为以下几种：221切片法切片法是将欲观察的材料切成极薄的薄片，再制成装片的一种制片方法。其制作过程：首先选用软硬适度的植物根茎叶等如材料太软，可用马铃薯块茎、胡萝卜根或肥皂将欲切取的材料夹住。一起进行切片。欲切的材料应先截成适当的段块，一般面积大小不超过35平方毫米为宜，长度以23厘米较便于手持并进行切片。接着用手的三个指头拿住材料，并使其稍突出在
10、手指之上，右手持刀，切前先将材料和刀口蘸上些水（润滑），切去材料上端不整齐一段，刀身放平，由左前向右后方（即向着自己迅速拉切，切时手臂用力才能平稳）拉切。最后选取厚薄均匀的材料，用毛笔取出放在在玻片上制成临时玻片。222装片法装片法是将新鲜、少量的生物材料直接放在载玻片的水滴中，再盖上盖玻片，做成玻片标本的方法。其制作过程：擦净载玻片和盖玻片，将载玻片持平或放在平台上，用滴管吸水或其他液体滴一滴在在玻片中央（量要适度，以恰好被盖玻片盖满为度），将材料用解剖针或镊子平展于载玻片的液滴中，加盖玻片（为避免气泡产生，先将盖玻片一侧接触液体边缘，在慢慢向下落，放平盖玻片），制成玻片标本。223涂片法涂
11、片法是将材料均匀涂布在载玻片上的一种制片方法。其制作过程：取洁净的载玻片，将涂抹的液滴滴于载玻片的中央或偏右约14处，左手持载玻片或放在平台上，右手持另一载玻片作推片。先慢慢向右移动，让短边接触溶液，两载玻片的夹角约为3045度，再向左迅速推载玻片，即可涂成一均匀的薄片。也可用解剖针、牙签、火柴杆等涂成薄片，盖上盖玻片即可。224压片法压片法是将生物材料置于载玻片和盖玻片之间，施加一定压力，将组织压散的一种方法。其制作过程：取洁净的载玻片，先将解离好的或疏松的材料放在载玻片中央，加一滴清水或染液，再进行压片，压片时，可用针尖或刀尖直接轻压材料，或把盖玻片盖上，用刀柄或手指轻压盖片，或盖玻片上再
12、加一片载玻片，用手指轻压载玻片，压片时应注意不能移动盖玻片。23染色技术除少数特殊结构含有带染色的物质外，多数生物材料是无色的，为了增大反差，突出主要观察对象，在观察前对材料要经染色剂染色，才能观察清楚。中学常用染色剂的制法、性质和适用范围如下表： 名称制法性质适用范围天然染料苏木精取1克苏木精溶解在6毫升无水乙醇成甲液。另配铵明矾饱和水溶液成乙液。取4毫升甲液，同150毫升乙液混合，用纸遮盖，放光亮处约一周，经氧化（成熟），过滤，加入25毫升甲醇，玻瓶密存备用。碱性染料。又名苏木色精、苏木紫，是从南美苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸渍出来的，淡黄色到锈紫色结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油
13、。动植物组织、纤维素、细胞壁、细胞核洋红取5克明矾溶解在95毫升蒸馏水里，再加0.5克洋红，煮沸。冷却，过滤可加入少许碳酸防霉。碱性染料。又叫胭脂红、虫红、卡红。又热带雌性胭脂虫体干粉提取制成，溶于水。细胞核、整体标本如水螅、血吸虫人工染料龙胆紫取龙胆紫溶解在2乙酸溶液中，直到溶液变成深紫色为止。碱性染料。是甲基紫同结晶紫的混合物细胞核、染色体结晶紫取2克结晶紫溶解在20毫升95乙醇里研磨成甲液。另取0.8克草酸铵溶解在80毫升蒸馏水里成乙液。甲乙液混合使用。碱性染料。甲基紫龙胆紫的纯品能溶于水和乙醇。细菌、细胞核、染色体、中心体、淀粉、神经胶质、纤毛苏丹苏丹将0.1克苏丹干粉溶于100毫升体
14、积分数为95%的酒精中，待全部溶解后再使用。将0.1克苏丹干粉溶于50毫升丙酮中，再加入体积分数为70的酒精50毫升，充分混合后即可使用。弱酸性染料弱酸性染料，红色粉末，易溶于脂肪和乙醇脂肪、木栓、角质层伊红取1克伊红溶液溶解在99毫升蒸馏水或99毫升70乙醇里。碱性染料（红色）。种类多，常用的如伊红Y红色带蓝色小结晶或棕色粉末，溶于水，不溶于乙醇。细胞质亚甲基蓝（美蓝）取0.5克亚甲基蓝溶解在30毫升95%乙醇里，再加入100毫升001氢氧化钾溶液。碱性染料（深蓝色）。细胞核、细菌、血、活体神经表324微生物的培养和分离技术中学生物学实验中涉及微生物培养的实验有“自生固氮菌的分离”、“学习细
15、菌培养的基本技术”，通过这些实验要求学生掌握微生物，主要是细菌培养的基本技术。包括（1）培养基的制作制作培养基是微生物实验的基础。在制作培养基前，首先应准备好合乎要求的清洁玻璃器皿。一般用肥皂液煮沸30min，或浸入用重铬酸钾和浓硫酸配制的洗液数十分钟，然后用清水冲洗，晾干后保存备用。培养基的制作有以下几个环节：培养基的配制：按培养基配方称量各种成分的原料。将称量好的原料放入烧杯中，加入所需水量，用玻璃棒搅拌均匀后，加热溶化即成液体培养基。如需制成固体培养基的，再加凝固材料（琼脂），加入后继续微火加热使之溶化，即成固体培养基。加热后，补足因加热所蒸发的水分。调pH。配好培养基后用PH试纸测试，用HCl或NaOH调到所需的PH。分装。将培养基趋势用
