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1、栀子苷的提取2.txt20如果你努力去发现美好，美好会发现你；如果你努力去尊重他人，你也会获得别人尊重；如果你努力去帮助他人，你也会得到他人的帮助。生命就像一种回音，你送出什么它就送回什么，你播种什么就收获什么，你给予什么就得到什么。中药栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，主要药理作用为：抗炎、治疗软组织损伤、利胆、抑菌、消肿止痛、抗惊厥等，其主要有效成分为栀子苷类等1，2，3。曾有不同的提取方法对栀子中栀子苷含量影响的报道4，但未见同时考察提取时间、提取次数、乙醇浓度、乙醇用量、栀子生药粒度5个因素对栀子苷提取效率影响的报道，本实验采取均匀
2、设计安排实验，实验结果使用UROS软件系统处理，优选出栀子苷的合理提取工艺，为生产工艺参数的选择提供实验数据。1 仪器与材料11仪器 HPLC-6A型液相色谱仪 (Shimazu 公司生产) ；UV-3000 型双光束双波长紫外分光光度计(Shimazu 公司生产)；色谱柱：LC-18 (SUPELCOSIL公司生产)12 材料 对照品:栀子苷（批号：0749-9606 规格：含量测定），中国药品生物检定所提供；药材：栀子购于北京市药材公司，经中日友好医院药学部药检室检验为合格品；所用试剂均为分析纯。2 含量测定21.测定波长的选择 栀子苷对照品甲醇溶液与栀子的甲醇提取液在237 nm处均有最
3、大吸收，故选择237nm为检测波长。2.1.1色谱分析条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6mm250 mm）5 m）；流动相：乙氰:水(15:85)；流速：1 ml/min；柱温：室温；理论板数按栀子苷峰计算，应不低于1500 ；灵敏度0.02AUFS；进样量10l。（含量测定条件参照中国药典2000版一部 202页栀子含量测定项下）2.1. 2对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇溶解栀子苷，得对照品溶液（0.0260mg/ml）。2 . 1.3 线性关系考察 分别精密吸取栀子苷对照品溶液（0.0230mg/ml），2、4、6、8ml，各置10 ml 容量瓶中，用甲
4、醇稀释至刻度，各进样10ul，以测得的色谱峰面积为纵坐标，对照品量为横坐标绘制标准曲线，结果为栀子苷在0.0460 0.2300g范围内具良好的线性。回归方程：栀子苷Y =14459.7+2563041.304 X r=0.9996。采用外标一点法测定含量。2.1.4含量测定取栀子生药10.0g，按表3安排的实验进行实验，合并提取液，过滤，将其定容至一定体积，取其中部分稀释至每1ml含生药1mg，用HPLC法进行测定，采用外标法计算栀子苷含量，将计算结果记入表3中。2.2 提取工艺优选 2.2.1因素与水平根据文献及预试验结果，考察的因素及其范围确定如下：X1.乙醇回流时间0.53.5h,X2
5、.乙醇回流次数14次，X3.乙醇浓度095%，X4.乙醇用量413倍，X5.栀子粒度0.53.0mm,将以上因素分成10个水平，见表2。2.2.2 实验安排及结果（见表2）选择U11(1110)表，将对应的各因素的水平数填入表中。将表中的数据，利用UROS系统软件回归处理，得回归方程为：Y=2.7710-1.1256X2+0.0409X5+0.2550X2X2+0.0000X3X3-0.0733X5X5+0.0509X2X5+0.0020X3X4+0.0025X4X5Q=0.0000,S=0.0003,RR=1.000,F=999999.9999,查表得F(8,1)0.01=598,而该组数据
6、的F=999999.9999 F(8,1)0.01，F检验通过。根据上述方程，选择优化条件为：回流时间为3小时;次数为3次;乙醇浓度为95%;乙醇用量为13倍;栀子生药粒度为0.6mm。考虑到大生产成本问题，将乙醇浓度改为90%;用13倍量回流提取2次; 每次2小时;粒度为0.6mm。为了考察是否合理，进行对比试验。结果两组栀子苷含量相近。结果见表4。2.2.3验证试验取栀子生药10.0g按表4中的第2组实验条件进行实验，测定含量。结果见表5。3 讨论 栀子苷的提取工艺优选，以栀子苷含量为指标，考察不同条件下，对栀子苷提取率的影响。由于实验条件不同，某些提取液不澄明，当采用分光光度法，其测定结
7、果不准确。本实验采用HPLC法测定含量,结果可靠。4 参考文献1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).化学工业出版社.2000:2012 姚全胜，等.栀子抗炎、治疗软组织损伤有效部位的筛选研究.中国中药杂志1991,16(2):489-493.3 谢学建，张俊慧马爱华.中药栀子研究进展.时针国医国药.2000，11(10):943-945.4 王振华，杜勤，徐晓峰，等.栀子提取工艺研究.中药材.2000,23(4):224-226.表1 栀子苷线性关系的考察进样量(ug) 0.046 0.092 0.138 0.184 0.230 峰面积 126898 252045 375847 48
8、7174 598833 表2 均匀设计因素与水平表 X1 X2 X3 X4 X5水 平 回流时间 回流次数 乙醇浓度 乙醇用量 栀子粒度 h 次 % 倍 mm 1 0.5 1.0 0 4.0 0.5 2 1.0 2.0 25.0 5.0 1.0 3 1.5 3.0 50.0 6.0 2.0 4 2.0 4.0 75.0 7.0 3.0 5 2.5 1.0 95.0 8.0 0.5 6 3.0 2.0 0 9.0 1.0 7 3.5 3.0 25.0 10.0 2.0 8 1.0 4.0 50.0 11.0 3.0 9 2.0 1.0 75.0 12.0 0.5 10 3.0 3.0 95.0
9、13.0 2.0 表3 U11(1110)实验安排与结果编 回流时间 回流次数 乙醇浓度 乙醇用量 栀子粒度 栀子苷号 h 次 % 倍 mm 含量/% 1 0.5 2.0 50.0 8.0 2.0 2.47 2 1.0 4.0 0 13.0 2.0 2.61 3 1.5 2.0 75.0 7.0 2.0 2.85 4 2.0 4.0 0 12.0 1.0 2.55 5 2.5 3.0 75.0 6.0 1.0 2.96 6 3.0 1.0 25.0 11.0 0.5 2.51 7 3.5 3.0 95.0 5.0 0.5 3.11 8 1.0 1.0 25.0 10.0 0.5 2.46 9 2.0 3.0 95.0 4.0 3.0 2.7910 3.0 1.0 50.0 9.0 3.0 2.58 表4 不同提取条件比较实验结果 组 回流时间 回流次数 乙醇浓度 乙醇用量 栀子粒度 栀子苷 号 h 次 % 倍 mm 含量/% 1 3.0 3 95 13.0 0.6 3.582 2.0 2 90 13.0 0.6 3.47 表5 验证实验及结果编 号 栀子苷的含量 （%） 1 3.47 2 3.38 3 3.34 平均值 3.397RSD（%） 1.960
