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1、乳酸菌数量测定1、目的通过试验，测定乳酸菌的含量，看乳酸菌的是否符合工厂出厂标准（1.5X108）。2、试验材料2.1、菌种：发酵罐、待出货样品2.2、试剂配置生理盐水：陈总办公室饮水机温水500ml+4.5gNaCl（实验室的电子天平的精确度为0.01g,所以称4.50g、4.51g都行）225ml生理盐水：用250mL的量筒量取225mL生理盐水稀释用的生理盐水：2个样品X7个稀释度=14根试管，用10mL的移液管移取9mL生理盐水MRS培养基：2个样品X3个稀释度X2个平行X15ml培养基=180ml培养基200ml培养基；陈总办公室饮水机温水200ml+12.86gMRS培养基（由于琼
2、脂的凝固效果不太好，所以要多加培养基，培养基的量为13.40g-13.60g）2.3实验器材：培养皿：2个样品X3个稀释度X2个平行=12个对扣培养皿“L”型涂布棒：2个样品X3个稀释度=6根“L”型涂布棒10mL移液管：2个样品=两根移液管3个500mL的三角瓶、1000uL枪头一盒、100uL的枪头一盒、移液枪、2个饭盒、两个蜡烛、两个瓶盖、两个易拉罐罩子、75%酒精棉、试管架、“L”型涂布棒3、实验步骤1、计算实验要用的基本培养基、培养基。2、配试剂，NaCl可以用白纸来称，MRS培养基直接用三角瓶来称，调MRS培养基至6.土3、用报纸把实验器材（3个500mL的三角瓶、1000uL枪头
3、一盒、100uL的枪头一盒、10mL的移液管、20个对扣培养皿、2组的7根试管、“L”型涂布棒）包好，然后灭菌（121C、20min），这个过程大概花费1h1.5h左右。4、当高压蒸汽灭菌锅鸣声，显示“END”的时候，把高压蒸汽灭菌锅的电源开关关了，然后打开单人无菌操作台的紫外灯对单人无菌操作台进行杀菌消毒，然后把门依次关好，然后到实验室把无菌室的紫外灯打开，对无菌室进行杀菌消毒。紫外杀菌过程一定要30min以上。5、当高压蒸汽灭菌锅的压力指数为“0”时，然后打开高压蒸汽灭菌锅，用毛巾把里面的篮子提出来，把里面的东西捡出来，把东西均匀的分开，一遍冷却。对于2个225mL的生理盐水、200mL的
4、MRS培养基，可以放到水里进行冷却，放在水里大概15min左右。6、用lOOmL的三角瓶取样品，然后测定PH、和温度。7、冷却好了，把东西（灭菌篮（3个500mL的三角瓶、lOOOuL枪头一盒、100uL的枪头一盒、10mL的移液管、20个对扣培养皿、2组的7根试管、“L”型涂布棒）、待测样品、lOOOmL大烧杯）放到传送窗里，然后人从无菌室的门进去，在第一个无菌室进行换鞋换衣，然后把传送窗的东西捡到推车上。8、对手、无菌操作台进行酒精消毒，然后点燃酒精灯。把一大包培养皿拿到无菌操作台里面，拆开培养皿，如果培养皿里面有水，可以甩干，表面有水可以在报纸上搽干。把试管倾斜拿进无菌操作台里面，拆开报
5、纸，按编号把试管放入试管架里面。把大烧杯拿进无菌操作台里面。熄灭酒精灯，打开排风机，把里面的热气排干静，然后关闭排风机。9、打开酒精灯，把MRS培养基拿进无菌操作台里面，拆开报纸，拔开瓶塞丢到大烧杯里面。倒培养基，瓶口一直放在火焰上面，培养皿开口也一定要放在火焰上面，每一个培养基尽可能的均匀，而且平板必须放平，防止平板倾斜，一边厚一边薄，尽可能的做到均匀点，倒完培养基，清理操作台。如果平板过热，可以把平板拿到手推车上面冷却，但是注意大的培养皿一定要盖住小的培养皿，防止空气中的细菌掉落到小培养皿的MRS培养基上面。熄灭酒精灯，打开排风机，把三角瓶拿到手推车上面，等气体变冷，关闭排风机。9、稀释：
6、点燃酒精灯，把大的枪头的报纸拆开，把样品、225mL的稀释液拿进无菌操作台，拆开报纸，橡皮筋丢进大烧杯里面，报纸先放在里面，拔开瓶塞，用10mL的移液管移取25mL样品于225mL的生理盐水中，然后塞紧瓶塞，把移液管放入大烧杯里面，倾斜着拿出三角瓶，用手摇匀，把漩涡中心摇到瓶底，大概要23min左右，然后倾斜的在拿进无菌操作台里面。拔出瓶塞，用lOOOuL移液枪吸取1mL菌液，再塞上瓶塞，然后把菌液放入10-1的试管中，用摇匀机摇匀试管中的菌液；再拔出10-1试管塞，用1000uL移液枪吸取1mL菌液，再塞上试管塞，把菌液放入10-2的试管中，用摇匀机摇匀试管中的菌液；如此，直到摇匀机把10-
7、6试管摇匀好。用报纸把无菌操作台面搽干净，然后再西施另一个样品。做完以后，盖灭酒精灯，打开排风机，拿出三角瓶、样品，等气体变冷后关闭排风机。10、接种：点燃酒精灯，把培养皿按序号依次放好，拆开500uL的枪头（防止散架），用100uL的移液枪，插进枪头转两圈，然后拿出移液枪，将10-5试管倾斜放置，用枪头吸取0.1mL的菌液，放入培养皿中心，再用此lOOuL的移液枪，放入平行培养皿中心，换另一个枪头插进枪头转两圈，然后拿出移液枪，将IO-6试管倾斜放置，用枪头吸取O.lmL的菌液，放入培养皿中，再用此lOOuL的移液枪，放入平行培养皿中心，换另一个枪头插进枪头转两圈，然后拿出移液枪，将1O-6
8、试管倾斜放置，用枪头吸取O.lmL的菌液，放入培养皿中，再用此lOOuL的移液枪，放入平行培养皿中心。把“L”型涂布棒上的橡皮筋搓下来，拆“L”型涂布棒的报纸，注意不需要全部拆下来，一定让“L”型涂布棒放在报纸里面，上面也要盖着报纸，从报纸里面拿出“L”型涂布棒，然后手拿培养皿开口在火焰上面，用“L”型涂布棒把菌液均匀铺开，然后用此“L”型涂布棒涂布另一个平行培养皿，然后把此“L”型涂布棒放入大烧杯里面，换另一跟“L”型涂布棒依此操作，直到全部涂布均匀。盖灭酒精灯，打开排风机，把试管放入大烧杯，然后关闭排风机。11、清理：将东西清理好，报纸、移液管、三角瓶、“L”型涂布棒都放入灭菌篮里，然后放
9、入传送窗里，人换衣换鞋出来，把东西拿出来，把东西整理好，报纸丢进蛇皮袋里，酒精棉丢进垃圾篓里，其他的放入灭菌篮里。12、入盒：把2组的饭盒、易拉罐罩子、蜡烛、瓶盖、餐巾纸、75%的酒精放入传送窗里，然后人换衣换鞋进去，用卫生纸蘸75%的酒精对饭盒、易拉罐罩子、瓶盖、进行灭菌消毒，灭菌消毒后把东西放入无菌操作台。把样品分为两组放入饭盒，点燃蜡烛，用易拉罐罩子罩住，用饭盒盖住进行密封，等蜡烛熄灭，把饭盒、75%的酒精、垃圾放入传送窗，人换鞋换衣出来，把饭盒放如37C的恒温培养箱中培养。13、打扫：把实验器材洗干净，用拖把把无菌室、实验室拖干净。14、计数：培养48h后，对培养皿进行计数。4、实验数
10、据记录样品名称样品数量样品样品状态和特性接样日期检测日期检测项目乳酸菌检验依据使用仪器恒温培养箱：一一名称及编号超净工作台：压力蒸汽灭菌锅：一生化培养箱：光学显微镜：一酸度计：一电子天平：一测试方法()取样品加入无菌生理盐水中，混匀制成的稀释液，依此类推制成一的稀释液；()吸取一一稀释液各注入无菌平皿中，每个稀释度做个平行；()倾注已融化并冷却至C左右的改良琼脂培养基(配制日期：月日)于以上平皿中，待凝固后，倒置于土C培养，随机挑取个菌落做初步验证试验，并计数。、稀释度样品名称平均值平板菌落形态乳酸菌总数总结乳酸菌数量测定过程中会造成污染的原因有：1、培养基本身有霉菌，实验室试剂用水，在高温灭菌锅内形成了芽孢，没有彻底灭菌。2、实验器材在高温灭菌锅内没有彻底灭菌。3、实验器材和试剂在空气中冷却过程中，空气中的杂菌落在上面。4、无菌操作台上的细菌没有被紫外线彻底杀菌完成5、样品中也有杂菌6、在接种涂布过程中，要先用75%的酒精对手进行搽洗，把手上的细菌消除7、包裹的器材的报纸一律在操作台里面进行分拆8、操作台操作时，尽可能的点燃酒精灯，因为酒精灯灭菌最彻底9、在接种、涂布过程中，大的培养皿一定要罩着小的培养皿，防止空气中的杂菌掉落到MRS培养基里面10、培养过程中，把培养皿放入饭盒前一定要对饭盒进行酒精消毒，杀死杂菌。
