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1、浅论原发性干燥综合征患者T细胞亚群及CD4+CD25+T细胞检测的意义【摘要】 目的探讨T淋巴细胞亚群及CD4+CD25+T细胞在原发性干燥综合征(PSS)患者中的检测意义。方法用流式细胞仪检测18例PSS患者以及20例健康体检者外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞(CD3-/CD16+56+)、CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞及CD4+CD25+调节T细胞水平。结果PSS患者与正常对照组比较，CD3+CD4+细胞亚群的百分率明显升高();CD4+/CD8+与对照组比较有明显升高();CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞及CD4+CD25+调节性T细胞的百分率明显降
2、低()，其它T细胞亚群无明显变化。结论PSS患者T淋巴细胞亚群的水平是异常的。T细胞亚群的比例异常与疾病的病程和临床表现相关联。CD3+CD4-CD8-和CD4+CD25+调节性T细胞水平降低导致机体自身免疫反应抑制功能减弱，免疫耐受状态被打破，可能是引发PSS发生发展的重要因素。【关键词】 干燥综合征;T淋巴细胞;CD4+CD25+;CD3+CD4-CD8-Abstract:ObjectiveTo investigate the significance of T lymphocyte subsets and CD4+CD25+ T cells detection in patientswi
3、th primary Sjogren syndrome (PSS).MethodsAflow cytometry was use to detect the levels of peripheral blood CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3-/CD16+56+ of NK cells, double negative T cellsof CD3+CD4-CD8- and CD4+CD25+ which regulate the levels of T cells in18 patients with PSS, and compared with 20 health
4、y subjects (as normal control group).ResultsCompared with normal control group, the percentage of PSS patients CD3+CD4+cell subsets were significantlyelevated (); CD4+/CD8+ was also significantly higher ();double negative T cells of CD3+CD4-CD8- and CD4+CD25+ which regulatethe levels of T cells decr
5、eased significantly (), other T cell subsetsremained thelevels of Tlymphocyte subsets in patients with PSS is abnormal. The proportion of T cell subsets abnormalities was associated with the course and clinical manifestations of the disease. The decreased CD3+CD4-CD8-and CD4+CD25+ which regulatethe
6、levels of T cells resulted in weakening self immune suppression, and immune tolerance has been broken, they may be important factors which induced the genesis and development of PSS.Key words:Sjogrens syndrome; T cell subsets; CD4+CD25+;CD3+CD4-CD8-干燥综合征(Sjogrens syndrome，SS)是一种抗原驱动、T细胞介导、B细胞活化的慢性自身
7、免疫性疾病，该病可分为原发性和继发性。原发性干燥综合征(PSS)的发病机制涉及遗传、免疫、环境等多种因素。近年来发现调节性T细胞(regulatory T cells,Treg细胞)在维持外周耐受和抑制自身免疫性方面发挥着重要的作用1。目前调节性T细胞在PSS的发病与免疫调节中的作用成为研究点，国内外有关这方面的文献报道不多。为此笔者用流式细胞仪检测18例PSS患者外周血T细胞亚群及CD4+CD25+调节性T细胞的水平，以探讨其细胞免疫功能状态和CD4+CD25+调节性T细胞在PSS发病中的意义。1对象与方法对象PSS组：选择研究对象为本院门诊或住院(2008年11月2010年3月)初发未经治
8、疗的PSS患者18例，均符合2002年制定的SS国际分类(诊断)标准，男4例，女14例，年龄3462岁，平均岁。正常对照组：20例，男8例，女12例，年龄2858岁，平均岁，均为医院健康体检和医务工作者。试剂和仪器实验中使用三标记单克隆抗体CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，双标记单克隆抗体CD3/CD16+CD56-PE，CD4-FITC，CD25-PE，均购自BECKMAN COULTER公司产品。流式细胞仪型号为美国BD公司FACSCalibur型。方法分别在两个试管中先加入拟标记抗体10l，再加入EDTA抗凝的外周静脉血50l(另设一管阴性对照)，轻微振荡混匀，室温避光放置
9、15min，每管加入溶血剂300l充分混匀，室温避光放置15min，待完全溶血后1 200r/min离心5min，弃去上清，加入1 000l鞘液混匀，1 200r/min离心5min，弃上清，加鞘液500l，充分混匀使细胞悬浮，流式细胞仪检测，每管获取细胞10 000个。T细胞亚群、NK细胞及CD4+CD25+T细胞的测定结果用CellQuest 软件分析。统计学分析计量数据以(s)表示，显着性检验用配对t检验。所有数据在SPSS 软件上进行统计。2结果与正常对照组相比，PSS患者组CD3+、CD3+CD4-CD8+、CD3-/CD16+56+所占T淋巴细胞的百分率无明显改变。CD3+CD4+
10、CD8-细胞亚群的百分率有所升高();CD4+/CD8+与对照组比较有明显升高();CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞及CD4+CD25+调节T细胞的百分率明显降低，两组比较差异有高度显着性()。结果见表1。图1为流式细胞仪检测CD4+CD25+T淋巴细胞水平的结果图，A为正常对照图，B为1例PSS患者外周血检测结果图。表1PSS患者T细胞亚群及调节性T细胞的水平分析图1外周血CD4+CD25+T细胞流式细胞图3讨论PSS是我国临床常见的弥漫型结缔组织病之一，其主要的病理损伤是淋巴细胞浸润，最常受累的是唾液腺和泪腺等外分泌腺，并可累及肺、肾脏、肝脏以及血管等多个脏器。国外有些研究表明3,4，
11、PSS的发病与T淋巴细胞亚群的变化相关。本观察通过对PSS患者外周血T细胞亚群和CD4+CD25+调节性T细胞的测定，提示患者组CD3+、CD3+CD8+、CD3-/CD16+56+所占T淋巴细胞的百分率无明显改变;CD3+CD4+细胞亚群的百分率有所升高();CD4+/CD8+与对照组比较有明显升高()。过多的CD4+T细胞局部浸润，CD4+/CD8+比值增高，有利于局部产生自身免疫性疾病的自身抗体，从而导致腺泡或腺管的损伤和破。本研究表明了患者免疫失调，细胞免疫功能增强，反映了机体整体的自身免疫调节功能处于紊乱状态。在研究结果中显示了CD4+CD25+调节性T细胞的比例明显低于正常对照组，
12、与厉小梅等研究的结果相一致。健康的个体中存在着少量具有潜在致病性的自身反应性T细胞，Treg细胞对自身反应T细胞激活和扩增起负调控作用。CD4+CD25+ Treg细胞可通过直接接触或分泌抑制性细胞因子(TGF-、IL-10等)抑制自身免疫性疾病的发生，维持外周自身耐受，该细胞减少则会导致各种自身免疫性疾病的发生。有研究发现，将CD4+CD25-脾细胞接种于无免疫活性动物后，可导致动物产生自身免疫性疾病，而将CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+T细胞后则可有效阻止动物自身免疫疾病的发生。本研究亦发现PSS患者DNTreg细胞明显低于正常对照组，从而表明PSS患者自身免疫耐受的功能受
13、到抑制。研究表明，CD3+CD4-CD8-双阴性调节性T细胞(DN Treg细胞)在体外被激活后，可产生IL-4和IL-10或通过与靶细胞直接接触后，DN T细胞表面FasL与靶细胞表面Fas相互作用，导致靶细胞凋亡，这就显示DN Treg细胞具有一定的抑制性免疫调节功能。这些Treg细胞具有免疫抑制功能，能够抑制CD4+、CD8+细胞的活化与增殖，是维持机体免疫耐受的重要组成部分，Treg细胞数量的下降可能在PSS发病中起到重要的作用。今后将增加标本量，进一步对DN Treg细胞和CD4+CD25+ Treg细胞进行研究，以便更深入全面地发现其在PSS疾病中的表达规律，探讨Treg细胞干预治
14、疗的可行性，寻找有效的调节免疫反应的治疗方法则是未来的研究方向。【参考文献】 1LanR Y, Ansari A, LianZ X, et al. Regulatory T cells development function and role in autoimmunity J. Autoimmun Rev,2005,4(6):351-363. 颜淑敏,曾小峰.原发性干燥综合征诊治进展J.实用医院临床杂志,2007,4(3):6-8.Manel T, Bredberg A, Jacobsson LT, et al. CD4+T lymphocytopenia-a frequent findi
15、ng in anti-SSA antibody serupositive patients with primary Sjogrens syndrome J. J Rheumatol,2004,31(4):726-728.Gottenberg JE, Lavie F, Abbed K, et al. CD4CD25 high regulatory Tcells are not impaired in patients with primary Sjogrens syndrome J. J Autoimmun,2005,24(3):235-242.厉小梅,李向培,钱龙,等.CD4+CD25+调节
16、性T细胞在干燥综合征患者外周血和唇腺组织的表达J.中华医学杂志,2007,87(15):1034-1036.Cheney KM, Kumar R, Purins A, et al. HIV type 1 persistence in CD4-/CD8- double negative T cells from patients on antiretro-viral therapy J. AIDS Res Hum Retroviruses,2006,22(1):66-75.李冬梅,厉小梅,李向培,等.原发性干燥综合征患者外周血CD4+CD25+CD127LOW/-T细胞的检测及意义J.安徽医科大学学报,2009,44(4):482-486.
