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1、六味地黄丸（浓缩丸）含量测定方法研究【摘要】 目的建立六味地黄丸中测定丹皮酚、马钱苷含量的高效液相色谱方法。方法丹皮酚：色谱柱：C18柱，流动相：甲醇-水，流速 mlmin-1，柱温30，检测波长为274 nm。马钱苷：C18柱，乙腈-水，流速 mlmin-1，柱温25，检测波长为236 nm。结果丹皮酚在 ng范围内呈线性关系，r= 6；平均加样回收率为%，RSD=%。马钱苷在 g范围内呈线性关系，r= 6；平均加样回收率为%，RSD=%。结论该方法简便，重现性好，可用于六味地黄丸中丹皮酚、马钱苷的含量测定。【关键词】 六味地黄丸 丹皮酚 马钱苷 高效液相色谱Determination of
2、 Liuwei Dihuang Pill(concentrated pill)Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC for determination of paeonol and loganin in Liuwei Dihang Pills(concentrated pills).MethodsPaeonol :HPLC column wasmobile phase was methanol-water(64) and the flow rate wasml column temperature was at 30 and the detection
3、wavelength was at 274 :HPLC column wasmobile phase was acetonitrile-water (1585)and the flow rate wasml column temperature was at 25 and the detection wavelength was at 236linear range was fromtong(r= 6) for paeonol and fromg tog(r= 6) formethod is convenient and reproducible for determination of pa
4、eonol and loganin in Liuwei Dihuang Pills(concentrated pills)Key words：Liuwei Dihuang Pills; Paeonol; Loganin; HPLC 六味地黄丸质量标准收载于部颁标准第11册。该方出于宋代钱乙小儿药证直诀卷下，系中医补肾的经典方，为滋阴补肾之着名方剂。笔者参考中国药典对该产品进行研究，在原部颁标准的基础上，对质量标准进行整理提高，用HPLC法测定牡丹皮中丹皮酚及山茱萸中马钱苷的含量，并进行了方法学考察。现将结果报道如下。 1 仪器与材料仪器Waters液相色谱仪，Waters2487双波长紫外检测
5、器，515泵，7715 i进样器，Empower色谱工作站，C18色谱柱。试剂甲醇、乙腈为色谱纯，乙醚、乙醇、磷酸、四氢呋喃等均为分析醇，水为高纯水。对照品丹皮酚对照品，马钱苷对照品样品六味地黄丸为苏州长甲药业有限公司生产。2 方法与结果牡丹皮的含量测定色谱条件C18柱，流动相：甲醇-水，流速 mlmin-1，柱温30，检测波长为274 nm1。供试品溶液的制备取本品适量，研细，精密称取 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30 min，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取对照品适量，加甲醇制
6、成每毫升含16 g的溶液，作为对照品溶液。空白对照实验按处方去牡丹皮制成空白制剂，取空白对照样品 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，与供试品制备相同方法制得缺牡丹皮空白溶液。分别取出对照品溶液、样品供试液、空白对照溶液依法进样检验。结果显示空白对照无干扰。线性关系的考察精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇稀释至 g/ml，摇匀。分别精密吸取丹皮酚对照品溶液1，2，3，4，5 ml，加甲醇稀释至10 ml，摇匀，分别得浓度为， g/ml的丹皮酚溶液。照高效液相色谱法，进样10 l，测定其峰面积。以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行回归处理，结果显示：丹皮酚溶液在 ng的范围
7、内线性关系良好。其回归方程为Y=9 。相关系数r= 6。精密度实验精密称取供试品 g，按方法制成供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 l，测定峰面积。RSD=%，表明精密度良好。稳定性实验取精密度供试液，分别在0，2，4，6，8，12 h进样，测定峰面积，RSD=%，结果表明丹皮酚溶液在12 h内稳定。重复性实验精密称取供试品6份，分别按供试液制备项下的方法制备供试品溶液，依法进行含量测定。RSD=%。加样回收率实验精密称取已知含量的供试品 g各6份，分别加入一定量的丹皮酚对照品溶液，按供试品制备项下的方法制备。依法测定，计算回收率。结果见表1。山茱萸的含量测定色谱条件C18柱，乙腈-水，流速
8、mlmin-1，柱温25，检测波长为236 nm1。供试品溶液的制备1取本品约 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%的甲醇100 ml，称定重量，超声处理10 min，放冷，再称定重量，用50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液40 ml过5 cm柱高中性氧化铝柱，再以50%甲醇50 ml洗脱，合并流出液和洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇溶解，并转移至10 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。表1 加样回收率实验结果对照品溶液的制备精密称取马钱苷对照品适量，加50%甲醇制成每毫升含20 g的溶液，即得。线性关系考察精密吸取 mg/ml的马钱苷对照品溶液1，
9、2，4，8，16，20 l分别注入高效液相色谱仪测定峰面积，以马钱苷的进样量为横坐标，峰面积的积分值为纵坐标进行回归，r=。结果表明，马钱苷在 g范围内呈良好的线性关系。空白对照实验按处方去山茱萸制成空白制剂，取空白对照样品 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，与供试品制备相同方法制得缺山茱萸空白溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各20 l，注入色谱仪，结果表明空白对照无干扰。精密度实验取稳定性试验项下的供试液，连续重复进样6次，测定峰面积，RSD=%。稳定性实验取本品约 g，精密称定，照供试品制备项下的方法制备成供试液。分别于配制后0，1，2，4，8 h依法测定
10、，马钱苷峰面积RSD=%。结果表明，供试品溶液在8 h内稳定。重复性实验取本品平行称取6份，按供试品制备方法制得6份供试品溶液进行测定，分别依次进行测定，RSD=%。加样回收率实验精密称取已知含量的供试品约 g6份，再分别精密加入 mg/ml马钱苷对照品溶液9，6，4 ml，置具塞锥形瓶中，分别按供试品制备方法项下制备供试液，并依法测定。结果见表2。实验结果表明，本法有良好的回收率。表2 回收率实验结果样品含量测定取本品5批，依法进行马钱苷和丹皮酚的含量测定，同时按原部颁标准用紫外分光光度法测定样品中丹皮酚的含量。结果见表3。表3 含量测定结果3 讨论 比较了丹皮酚的样品处理方法，以水蒸气蒸馏
11、，甲醇超声、回流，乙醇超声、回流，以甲醇超声操作简便，提取率高且杂质干扰少。对超声时间进行考察，超声30 min后，样品含量即无明显变化。用本方法测定的样品含量略高于原部颁标准中的紫外分分光度法。 参考中国药典实验中考察了马钱苷的样品处理方法，包括提取方法、提取时间及甲醇脱浓度的选择。直接超声、超声后回流、索氏提取，样品含量无明显变化，因此选择超声提取。比较超声10，20，30 min，含量无明显变化，因此选择超声10 min。比较甲醇洗脱浓度40%，50%，70%甲醇，50%提取效果最好。 本实验比较了马钱含量测定流动相乙腈-水、四氢呋喃-乙腈-甲醇%磷酸溶液，前者理论板数、分离度、对称度均较好，而后者峰形对称度稍差，因此选择前者。 【参考文献】 1国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005：402.
