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1、新疆葡萄根癌病的初步研究陈润 尹乐 蒋萍 彭晓凤 丁雪（新疆农业大学 林学与园艺学院 乌鲁木齐 830052） 摘要：本文对吐鲁番、林科院实习基地、安宁渠实习基地、武警医院葡萄园根癌病的发生及其危害情况进行了调查，初步了解不同葡萄品种对根癌病的抗病性，并对病害进行了防治试验，取得了较好的防治效果。同时从吐鲁番、呼图壁、乌市等地采集了癌瘤组织，在实验室内进行分离培养、鉴定和致病性试验，并利用细菌鉴定仪进一步鉴定该致病菌，最后确定该菌为根癌土壤杆菌（Agrobacterium tumefaciens）。同时也确定了引起葡萄根癌病的病原菌为根癌土壤杆菌生物型、生物型和生物型，其中以生物型为主，分离率
2、达90。关键词：葡萄根癌病； 发生危害； 防治; 病原菌; 分离鉴定； 生物型The preliminary study on grape crown gall in XinjiangCHEN Run , YIN Le , JIANG Ping , PENG Xiao-feng , DING Xue(College of Forestry and Horticulture , Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052 , China)Abstract: The occurrence and harm of grape crown gall
3、was researched at Turpan ,Forestry Scientific Institution practice base, An Ning Qu practice base and Armed Police Hospital vineyards, primarily understanding disease resistance of grape crown gall from various grape, and the controling experiment was made for grape crown gall, achieveing a better e
4、ffect of disease control. Meanwhile the tissue of grape crown gall was collected from Tulufan, Hutubi,Urumqi,etc, it was insolated, cultivated, identified and pathogenicity experiments in laboratory, the bacteria was observed in further identification by bacteria-defining instrument, finally the bac
5、teria was defined as agrobacterium tumefaciens. Also identified that the each biovar of Agrobacterium tumefaciens caused crown galls disease of grape was biovar, biovar and biovar , which biovar , separating rate reached 90.Keyword: Grape crown gall; Occurrence; Prevention; Pathogen； Insolation iden
6、tification； Biovar葡萄根癌病（冠瘿病）是葡萄的一种重要的传染性病害，由根癌土壤杆菌（Agrobacterium tumefaciens）通过伤口侵染引起。病菌寄主范围多达93科331属643种植物1。该病世界各地均有发生，在我国已普遍发生，有的发病率高达1002。新疆是世界上最适宜种植葡萄的地区之一，是我国葡萄种植面积最大、产量最高、品种最多的地区，且有着悠久的种植葡萄的历史。随着葡萄产业的发展，葡萄上的病害也日趋严重，而葡萄根癌病就是其中之一。该病害在某些葡萄种植区严重发生3，4 ，如 1998年在吐鲁番市亚尔乡牙尔乃沟3队16年生葡萄根癌病发病率高达95%5。果农对该病害
7、缺乏足够认识，加上根部病害容易被忽视及有效的检疫、防治措施不到位，造成该病有传播蔓延之势，有关部门应予以高度重视。虽然国内外对该病的研究报道较多，但从未见有关新疆葡萄根癌病的研究报道。本研究初步调查了新疆葡萄根癌病发生危害的情况及不同品种的抗病性，对病原菌进行了分离培养鉴定和生物型的初步测定，并对该病进行了药剂防治试验，从而为我区葡萄根癌病的防治提供更多的参考。1 材料与方法1.1葡萄根癌病发生危害调查1.1.1调查地点和时间：吐鲁番、武警医院葡萄园、林科院实习基地、安宁渠实习基地、武警医院 2009年6月12日2010年5月23日1.1.2调查方法：对武警医院葡萄园、安宁渠实习基地葡萄园中所
8、有葡萄植株逐株检查，对每一棵病株进行分级（见表1-1）。对于农科院葡萄园、吐鲁番葡萄园采用“五点抽样”的方法，随机抽取四个果园，求得每个果园的发病率和发病指数，最后计算四个果园平均的发病率和发病指数。公式如下：发病率（%）= 病情指数=表 1-1 葡萄根癌病分级标准Table 1-1 Standard of grape crown gall classification级别分级标准代表数值级健康 0级有15个冠瘿瘤,植株生长基本正常1级瘤子在5个以上,根、颈部均着生冠瘿瘤,且颈部着生冠瘿占颈周某一段周面积的1/32级根、颈部冠瘿瘤多,并愈合成片,占颈部一段周面积1/2以上,树势明显衰弱,新梢减
9、少31.2品种抗病性调查 1.2.1品种鉴定：对武警医院葡萄园中的每个品种拍照、采样（包括枝条、叶子、和果实），鉴定品种。1.2.2品种抗病性调查：在全园普查的基础上，对园中的每个品种的感病情况进行调查，分别计算出各个品种的发病率和病情指数，用于评价品种间抗病性的差异。1.3防治试验 1.3.1防治时间：2009年7月23日， 2009年8月23日，2009年9月23日，共三次。 1.3.2防治处理：防治药剂：农用链霉素（浓度75%）。浓 度：1g农用链霉素：4000 ml水，在采取药剂防治前，必须将病瘤刮除干净集中销毁。处理1：涂抹链霉素，试验株数为25株，对照株数为25株。 处理2：涂抹油
10、漆，试验株数、对照株数同上。处理3：涂抹链霉素和油漆，试验株数、对照株数同上。处理4：涂抹链霉素、油漆，再灌根处理，试验株数、对照株数同上。计算相对防治效果，公式如下：相对防治效果（）=1Ta/TbCb/Ca100Ta为处理区防治后的病情指数；Tb为处理区防治前的病情指数；Ca为对照区防治后的病情指数；Cb为对照区防治前的病情指数；1.4病原菌的分离培养 采用稀释分离法，培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，表面消毒液为0.1的升汞，消毒时间设置了5min、3min、1min三个处理，菌悬液浓度为原液及10倍、100倍、1000倍稀释液，每个处理3个重复。28恒温培养，每天进行观察，72h后进行菌落计数
11、。并将不同的菌株在NA培养基上划线纯化并斜面保存6。1.5致病性测定实验地点为新疆农业大学林园学院实验室与温室。指示植物为番茄，采用了直播和催芽播种的方法进行育苗。从分离出的菌株中，选取15个菌株。采用浸种、针刺、刀伤、浸苗4种方法接种，苗子长至7-10cm时用后三种方法接种，每株接种4个点，每个处理接种30株。伤口保湿三天。以无菌水接种处理为对照。3d观察记录一次，735d统计癌瘤发生情况，然后取病瘤，进行再分离，分离物与原接种菌相对比。1.6病原菌的鉴定 通过症状观察、菌落培养特征、革兰氏染色7、菌体特征及番茄接种快速诱导根颈产生肿瘤等一系列的实验，并结合出入境动植物检验检疫局细菌鉴定仪的
12、鉴定结果，最终确定葡萄根癌病的病原菌到种。1.7病原菌生物型的初步测定进行3NaCl生长，石蕊牛奶的生理生化测验，并结合出入境动植物检验检疫局细菌鉴定仪的鉴定结果，确定病原菌的生物型。2结果与分析2.1病害发生危害调查结果2.1.1根癌病发生危害调查结果表2-1武警葡萄园根癌病危害调查结果Table 2-1 Survey of harmness grape crown gall调查总数（株）各级别调查结果发病率（%）发病指数549 488 40 16 511.115.28表2-1农科院根癌病危害调查结果Table 2-2 Survey of harmness grape crown gall果
13、园号调查总数（株）平均发病率（%）平均发病指数果园一1600.000.00果园二1600.000.00果园三1602.501.09果园四1600.000.00表2-7安宁渠葡萄园根癌病危害调查结果Table 2-3 Survey of harmness grape crown gall调查总数（株）各级别调查结果发病率（%）发病指数864 858 6 0 00.0070.002表2-12吐鲁番根癌病危害调查结果Table 2-4 Survey of harmness grape crown gall果园号调查总数（株）平均发病率（%）平均发病指数果园一3237.5024.99果园二325.00
14、2.50果园三322.501.09果园四320.000.00由表2-1可以看出，武警医院葡萄园中根癌病的发病率最高，其次是吐鲁番葡萄园、农科院葡萄园、安宁渠葡萄园，而发病程度最严重的是吐鲁番葡萄园，其次是武警医院葡萄园、农科院葡萄园、安宁渠葡萄园。造成以上原因主要与当地的管理水平和环境条件有关。表 2-5 葡萄根癌病发生危害调查结果Table 2-5 Survey of harmness grape crown gall 地点平均发病率（%）平均发病指数武警医院葡萄园吐鲁番葡萄园安宁渠葡萄园农科院葡萄园11.1110.630.0070.635.286.880.00230.272.2品种抗病性调查结果经过调查，发现园中总共有八种不同的品种，分别是无核白、红地球、美人指、玫瑰香、巨峰、玻璃翠、秋黑、赤霞珠。由表2-6中各品种的发病率和病情指数可以明显看出无核白、美人指、玫瑰香的抗病性较差，与洪燕萍、赖钟雄的研究结果相符8，而抗病较好的品种有红地球、玻璃翠、赤霞珠、巨峰、秋黑，其中巨峰在郭修武、王克、傅望衡的研究中为感病品种9，原因可能与调查的范围和数量有关。表2-6葡萄品种抗病性调查结果 Table 2-6 Research of disease-resistance in various kinds of grapes品种发病株数总株数发病率（%）发病指数无核白红地
