《头孢西丁与苯唑西林检测耐甲氧西林金葡菌的比较》由会员分享，可在线阅读，更多相关《头孢西丁与苯唑西林检测耐甲氧西林金葡菌的比较（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、头孢西丁与苯唑西林检测耐甲氧西林金葡菌的比较目的 比较头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金葡菌( MRSA) 的可靠 性。方法 分别采用头孢西丁与苯唑西林纸片扩散法检测临床分离的 132 种金黄 色葡萄菌株，采用mecA基因方法为检测标准，比较两种方法的准确性。结果 头 孢西丁纸片扩散法与 mecA 基因检测高度一致为 100%，苯唑西林检测的敏感性 和特异性分别明显低于头孢西丁。结论 头孢西丁纸片扩散法是筛选和確认 MRSA 的一种可靠的试验方法。标签：耐甲氧西林金葡菌；头孢西丁；纸片扩散法耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( meticillin-resistantStaphylococcus aur
2、eus， MRSA) 是医院感染和社区感染的主要病原菌， 其有效的治疗和预防有赖于快 速准确的实验诊断，本研究以mecA基因为标准，对头抱西丁和苯唑西林纸片扩 散法检测 MRSA 的结果进行了比较。1 资料与方法1.1 一般资料 129 株临床分离金黄色葡萄球菌株，耐甲氧西林敏感金黄色葡 萄球菌ATCC25923,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC25923, 30 pg头抱西丁 药敏纸片、1 pg苯唑西林药敏纸片、M-H琼脂，mecA基因扩增引物：引物序列 上游 F : 5- AAAATCGATGGTAAAGGTTGGG3引物序列下游 R : 5- AGTTCTGCAGTACCGGATTT G
3、C-3。1.2 方法1.2.1纸片扩散法将临床分离得到的金黄色葡萄球菌取经35C孵育1824 h的单个菌落，用无菌生理盐水配制成0.5麦氏单位的菌悬液，分别涂布含有4% NaCl 的 M-H 琼脂表面上，将苯唑西林和头抱西丁药敏纸片放在琼脂表面， 35C 孵育 24 h 后阅读结果，执行 NCCLS 20041最新的标准：头抱西丁纸片扩散法 抑菌圈直径口9 mm为耐药、N20 mm为敏感;苯唑西林纸片扩散法抑菌圈直径10 mm为耐药、1112 mm为中介、13 mm为敏感。1.2.2 PCR 反应检测 mecA 基因 制备 DNA 模板 挑取平板上的的单个菌 落,混悬于0.5 mL pH 8.
4、0的T E中煮沸10 min，以7 000 r/min的速度离心10 min 后取上清液。PCR扩增PCR反应总体积为50 pL其中引物1 pL, PCR缓冲液 5 pL，dNTP (200 pmol/pL) 1 pL，Mg2+0.5 mmol/L，Taq 酶 2.5 U，DNA 模板 2 pL,双蒸水35.5 pL。扩增条件为94C初变性4 min，然后94C变性30 s，退 火温度为52C，时间为30 s，72C延伸45 s，进行30个循环最后延伸10 min， PCR 产物在0.7% 的琼脂糖凝胶中进行电泳后，用凝胶成像系统观察结果2。2结果129株金黄色葡萄球菌中，mecA基因阳性有8
5、5株，阴性有47株。以mecA 基因检测为标准方法，头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性为100%和 100%， 苯唑西林纸片扩散法的敏感性和特异性为 98.4%和 95.7%。头孢西丁纸片扩散法 检测 MRSA 的敏感性和特异性明显高于苯唑西林纸片扩散法。3 讨论MRSA产生的一个原因是金黄色葡萄球菌获得了 mecA基因，能够编码产生 低亲和力的青霉素结合蛋白PBP2a3mecA或PBP2a因此被认为是检测MRSA 的金标准。2004 年 NCCLS 增加了一种检测和确认 MRSA 的新方法即头孢西丁纸片扩 散法，根据这一标准，我们对临床分离的 132株金黄色葡萄球菌进行了分析发现， 有3株m
6、ecA阳性的菌株，对苯唑西林表现为敏感，证明苯唑西林纸片法较难检 侧出耐药表现不均一的菌株，而使用30 头抱西丁纸片法检测甲氧西林金黄色 葡萄球菌，其特异性和敏感性均达到 100%，且敏感株抑菌圈直径较大，易于判 断，研究推侧可能是头孢西丁比苯唑西林能更好诱导 mecA 基因的表达。头孢西丁纸片扩散法操作简便，敏感性和特异性高，结果与 mecA 基因检测 一致，可作为临床确证MRSA的可靠方法。参考文献：1 National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial
7、susceptibility testingS.Fourteenth inform ational supplement. NCCLS documentM100- S14.Wayne ， Pennsylvania ： NCCLS ， 2004.1-159.2 Louie L ， Goodfellow J ， Mathieu P ， et al. Rapid detection of methicillin-resistant Staphy lococci from blood culture bottles by using a multiplex PCR assayJ.Clin Microb
8、iol， 2002， 40：2786-2790.3 Annie F， Bernadette G， Philippe HL， et al. Evaluation of three techniques for detection of low-level methicillin-resistant Staphy lococcus aureus （MRSA）：a diffusion method with cefox itin and moxalactam， the Vitek2 system， and the MRSA-screen latex agglutinat iontestJ.J Clin Microbiol， 2002， 40：2766-2771.编 辑/肖慧
