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1、氯化汞与家兔急性肾功能不全摘要：【目的】 复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对肾功能指标的检测及肾脏形态学改变的观 察，了解中毒家兔肾功能的改变。判断、分析致病因素及导致急性肾衰的可能发病机制 【方法】 取家兔两只，分为实验组（急性肾功能不全）和对照组，分别对家兔行心脏采血 和膀胱取尿，分别测定并比较两兔的血清肌酐和尿肌酐含量以及酚红排泄率，比较肾衰家兔 和正常家兔的肾脏排泄功能，最后取两兔肾脏观察比较。【结果】 与正常家兔相比，急性肾衰家兔尿肌酐、尿/血肌酐比值（10:1）、酚红排泄率 均明显下降，血肌酐含量也有所下降，肾比重减小，肾脏外观苍白肿大，切面苍白，皮髓质 分界不清。【结论】 氯化汞
2、可直接损伤肾小球和肾小管引起器质性肾功能衰竭，引起肾小管上皮细胞 变性坏死，肾血管收缩，肾血流减少，肾灌注压下降，肾小管排泌功能、肾小管上皮细胞重 吸收功能障碍。【关键词】氯化汞；急性肾功能不全；血肌酐；尿肌酐；尿肌酐/血肌酐；酚红排泄率【引言】肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾 小球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。当肾血 流量减少，肾小球滤过率下降或肾小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功能受到影响，从 而导致肾功能不全。11、实验材料和方法1.实验材料1.1实验对象：家兔1.2药品和试剂：氨基甲酸乙酯、生理盐水、葡萄糖
3、、酚红、NaOH、醋酸、碱性苦味酸、肌 酐标准应用液1.3实验器材：手术器械一套、试管、分光光度计、水浴锅、离心机2. 实验方法2.1 复制肾功能衰竭模型：于实验前一天，取两只家兔，称重，一只皮下或肌肉注射 1HgCl2（o. 81. Oml/kg）造成急性肾功能衰竭，为实验组兔；另一只皮下或肌肉注射等量 的生理盐水（1. 0ml / kg）作为对照组兔。2.2麻醉手术：家兔称重，按5 ml/kg体重剂量于耳缘静脉缓慢注射200 g/L氨基甲酸乙酯 麻醉。2.3心脏采血：在心尖搏动最剧烈的地方用干燥针管，垂直进针进行取血。放置10min后， 3000r/min离心15min,小心吸取血清置于另
4、一干燥管中，备测血肌酐。2.4 腹部手术：将麻醉的兔子仰卧位固定于手术台上，下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1. 5cm处做切口，长约4cm,暴露膀胱，用注射器收集2ml尿液于试管中，做尿肌酐检查。 随后在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离之。在近膀胱端结扎输尿管，稍等片刻，待其 略充盈后，用眼科剪剪一小口，向肾脏方向插入一细塑料管（塑料管事先用肝素冲洗或充满 肝素），结扎并固定，用于收集尿液。2.5血清和尿液肌酐含量测定苦味酸沉定蛋白法： （1）血清肌酐含量测定取硬质试管3只编号，分别为空白管、标准管及测定管。按表1加样，混匀，37C水浴30min,用分光光度计以波长510nm，空白管调零，读0
5、D值。然后，各 管加50%乙酸溶液两滴，放置6min后，再测定0D值。按式计算血清肌酐(Cr)：p表1血清卿测定单位丿血标准管;测定管空日管肌酎标准应用液;0. 2一血清0.2一一0. 2碱性苦味酸Q. 20.30. 2Cr (mg %)=pOD - OD测测 x 0.01/0.2 xlOOOD - ODCr (mg %) = OD x 0.05mg x 100ml / 0.1ml u测标标单位/nd标淮管测定管空白管尿液0.1肌酎标隹应F冃液侦1./ml)0.1莖谣水一a. 1碱性苦味酸222：125g/LNaOH0.50. 50. 5(2)尿肌酐测定：按表2加样，混匀，放1 Omin后加蒸
6、馏水6.0ml,摇匀，用分光光度计 以波长530nm，空白管调零，读0D值。按式计算尿肌酐(Cr)：u表2尿刖酹测定2.6酚红排泄率测定：1)两组家兔分别耳缘静脉注射o. 6%酚红溶液(1ml/kg),接着从颈 外静脉插管处注射20%葡萄糖溶液(30ml / kg)。收集从开始注射酚红起15min或30min的 尿液，换算成单位时间的尿量(ml / min) o 2)将收集的尿液倒入500ml量筒内，加10% NaOH lOml，用自来水补充至500ml处，混匀后，取出适当量放入与比色管口径相同的试管 中与标准比色管比较，得出15min或30min内肾脏酚红排泄率。2、实验结果1.对照组(正常
7、)与实验组(肾衰)家兔血清肌酐、尿肌酐及酚红排泄率测定值如下：表3对照组实验组家兔各项生化扌旨标对照组 实验组血ffiWCrpCmg%)1541. 7尿肌ST Cru(mg%)15. 512.25尿肌肝他肌肝1. 030. 29酚红排泄率0050%础肾比董(g/mg)3. 573. 25实验组与对照组相比，尿肌酐/血肌酐值降低，酚红排泄率下降，肾比重减小。2. 对照组与实验组家兔肾脏形态比较：正常肾脏颜色为红褐色，正常肾脏的切面色泽鲜艳，皮髓质分界清晰；急性肾衰竭家兔肾脏重量增加，中毒肾脏表面颜色苍白，体积增大，表面肿胀。中毒肾脏切 面为苍白色，皮髓质分界不清，偶有淤血。正常肾肾衰竭3、分析与
8、讨论1.氯化汞引起家兔急性肾功能不全的机制：氯化汞是一种有毒的重金属化合物，在肾内蓄积 量最高，主要贮存于近曲小管。由于汞是许多活性酶的非特异性抑制剂，胞膜是汞的首要作 用点，故汞对肾小管细胞具有明显的毒害作用，造成肾小管坏死。坏死的肾小管上皮细胞及 脱落上皮细胞和微绒毛碎屑、细胞管型或血红蛋白、肌红蛋白等阻塞肾小管，使原尿不易通 过，引起少尿。同时，管腔内压升高，继而使肾小球囊内压力升高，当后者压力与胶体渗透 压之和接近或等于肾小球毛细管内压时，遂引起肾小球滤过停止。有效滤过压降低，导致肾 小球滤过率下降，近曲小管重吸收水钠减少，致密斑分泌肾素，激活肾素-血管紧张素系统， 促进水钠潴留。且毛
9、细血管内皮损伤、肿胀，致滤过膜通透性降低也引起肾小球率过滤下降。 2急性肾功能衰竭时的功能代谢变化：（本实验中毒家兔处于少尿期）尿变化：少尿或无尿；低比重尿；尿钠高；血尿、蛋白尿、管型尿。水中毒：ARF时，因少尿、分解代谢所致内生水增多、摄入水过多等原因，导致体内水 潴留、稀释性低钠血症和细胞水肿。严重时可出现心功能不全、肺水肿和脑水肿。高钾血症：尿量减少使钾随尿排出减少；组织损伤和分解代谢增强，使钾大量释放到 细胞外液；酸中毒时，细胞内钾离子外溢；低钠血症，使远端小管的钾钠交换减少。 代谢性酸中毒：GFR降低，使酸性代谢产物在体内蓄积；肾小管分泌H+和NH3能力 降低，使NaHCO3重吸收减
10、少；分解代谢增强，固定酸产生增多。氮质血症：血中尿素、肌酐、尿酸等非蛋白氮含量显著增高，称氮质血症，其发生主要是 由于肾脏排泄功能障碍和体内蛋白质分解增加所致，少尿期，氮质血症进行性加重，严重时 可出现尿毒症2。3. 肌酐的代谢与清除：肌酐是肌酸代谢的最终产物，体内的肌酸大部分与磷酸结合生成磷 酸肌酸，磷酸肌酸与能量代谢有关。在体外肌酐与肌酸可以互变，在酸性溶液中，肌酸及易 脱水而变成肌酐，在碱性溶液中，肌酐则可变回肌酸。但是，在体内肌酸脱水生成肌酐是一 种不可逆反应。本实验中，氯化汞中毒所致家兔急性肾功能衰竭为器质性肾衰，因此造成血 中肌酐排泄障碍，尿肌酐含量明显下降，而肾衰组血肌酐较对照组
11、有所下降，可能是实验操 作过程中的测量误差引起。4. 氯化汞中毒导致肾小管上皮细胞损伤，尿量减少，酚红排泄率降低。酚红排泄率是反映 肾血流量与肾小管排泌功能的指标。在实验中注射大量的葡萄糖溶液是为了造成渗透性利 尿，利于排除酚红。酚红是一种对人体无害的红色染料，经静脉注射后，大部分与血浆蛋白 结合，除20%为肝脏清除，经胆道排出外，其余则由肾脏排出。在肾脏的排泌过程中，94% 由近曲小管上皮细胞主动排泌，小部分不与白蛋白结合者可从肾小球滤过，尿中排出4%左右， 2%通胆汁到大肠由粪便排出，因为酚红大部分通过近曲小管分泌、排出，所以其尿中排出量， 可作为判断近曲小管排泌功能的指标。4、实验结论 氯化汞可直接损伤肾小球和肾小管引起器质性肾功能衰竭，引起肾小管上皮细胞变性坏死， 肾血管收缩，肾血流减少，肾灌注压下降，肾小管排泌功能、肾小管上皮细胞重吸收功能障 碍。【参考文献】1 陆源，林国华，杨午鸣主编. 机能学实验教程，第二版.一北京：科学出版社，20052 金惠铭，王建枝主编.病理生理学，第七版北京：人民卫生出版社，2008.1
