《不同PH条件的发酵》由会员分享，可在线阅读，更多相关《不同PH条件的发酵（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、不同pH条件下对灰色链霉菌产链霉素的影响关秀颖李欢王新然许小马摘要：微生物的代谢调控都需要在酶的催化下进行，而酶的活性受多种因素的 影响，而pH值是其中较重要的因素之一，因此我们对灰色链霉菌在不同pH下 的生长情况以及对次级代谢产物链霉素的合成进行了研究。本实验设置了 4个不同的pH值梯度，分别在培养后24h、72h、120、168h时对生物量、培养 基中还原糖浓度、和链霉素浓度进行了测定。根据所得数据分析得出灰色链霉 菌生长和代谢产生链霉素的最适pH。关键词：灰色链霉菌；链霉素；最适pH链霉素(streptomycin) 是- -种氨基葡萄糖型抗生素，分子式C21H39N7O12。1943年
2、美国S.A.瓦克斯曼从链霉菌中析离得到，是继青霉素 后第二个生产并用于临床的抗生素。硫酸链霉素为一种氨基糖苷类抗生素。链 霉素对结核分枝杆菌有强大抗菌作用，其最低抑菌浓度一般为0.5mg/m 1。非结 核分枝杆菌对该品大多耐药。链霉素对许多革兰阴性杆菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、肠杆菌 属、沙门菌属、志贺菌属、布鲁菌属、巴斯德杆菌属等也具抗菌作用；脑膜炎 奈瑟菌和淋病奈瑟菌亦对该品敏感。链霉素对葡萄球菌属及其他革兰阳性球菌 的作用差。各组链球菌、铜绿假单胞菌和厌氧菌对该品耐药。链霉素主要与细 菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成。细菌与链霉素接触后极易 产生耐药性。链霉素和
3、其他抗菌药物或抗结核药物联合应用可减少或延缓耐药 性的产生。用于兔热症、鼠疫、严重布氏杆菌病和鼻疽的治疗(常与四环素或 氯霉素合用)。也用于结核病的二线治疗，多与其它抗结核药合用。链霉素由灰色链霉菌发酵生产。本实验研究灰色链霉菌分别在pH6.6、 pH6.8、pH7.2、pH7.5条件下培养，利用紫外分光光度法定量测定链霉素的产 量。1材料和方法：1.1实验材料灰色链霉菌；链霉素标准品。1.2培养基种子培养基：牛肉膏lg、蛋白胨lg、酵母膏0.5g、葡萄糖2g、乙酸钠0.5g、 磷酸氢二钾0.2g、柠檬酸氢二铵0.2g、硫酸镁0.02g、硫酸锰0.025g、吐温80 O.lg、亚油酸30ul,
4、搅拌混合并加蒸馏水至100ml，调节pH值至6.8, 121 C灭菌 20min。增值诱导培养基：牛肉膏lg、蛋白胨lg、酵母膏0.5g、葡萄糖2g、乙酸钠 0.5g、磷酸氢二钾0.2g、柠檬酸氢二铵0.2g、硫酸镁0.02g、硫酸锰0.025g、吐温 80 0.lg、亚油酸30ul,搅拌混合并加蒸馏水至100ml，调节pH值至6.8, l2lC灭 菌 20min。发酵培养基：牛肉膏lg、蛋白胨lg、酵母膏0.5g、葡萄糖2g、乙酸钠0.5g、 磷酸氢二钾0.2g、柠檬酸氢二铵0.2g、硫酸镁0.02g、硫酸锰0.025g、吐温80 0.3g、亚油酸200ul，搅拌混合并加蒸馏水至100ml,
5、调节pH值至6.8, 121C灭 菌 20min。2实验方法2.1还原糖标准曲线制作方法取2.5mgCLA标准品以正己烷为溶剂定容于25m 1容量瓶中，分别吸取50 ml, 0.1ml, 0.15ml, 0.2ml, 0.25ml, 0.3ml, 0.35ml, 0.4ml, 0.45ml, 0.5ml, 0.55ml, 0.6ml, 0.65ml, 0.7ml, 0.75ml, 0.8ml装入容量瓶定容至 10ml。将 CLA标样配成不同浓度的溶液，以正己烷为参比，在波长233mn处测定其吸收 值，以CLA浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。2.2链霉素标准曲线制作方法称取10mg2
6、.3菌种活化将保藏的菌种转接到种子培养基中，18h后扩大培养，37C下厌氧静置培 养 18h。24菌体的培养将活化的菌种转接到不同pH的发酵培养基中，每个pH做三个平行，在28 C 摇床（4000r/h）下培养。25生物量、还原糖、效价的测定在培养24h、72h、120h、168h时分别对培养基中微生物的菌量、还原糖、 链霉素浓度进行测定。2.6.1生物量测定方法在超净工作台上从不同pH值的培养基中吸取10ml菌液至已称量好重量的离 心管中，在10000r/mi n下离心10min。小心移取上清液至试管中，将离心管在 80C下烘干过夜，再次称量离心管的重量，并记录。2.6.2还原糖的测定吸取上
7、步离心后的上清液1ml，稀释20倍。取稀释后的上清液2ml，加 2mlDNS,然后沸水浴5min。添加蒸馏水定容至10ml,然后利用紫外分光光度 计在530nm处测量吸光值，并记录数据。根据还原糖标准曲线对照，计算出培 养基中还原糖的量。263链霉素的测定吸取第一次离心后的上清液5ml，加2mol/L的NaOH1ml，沸水浴3min,然 后冷水浴3min。加入4ml硫酸铁铵，用蒸馏水定容至10ml，静置10min。用紫外 分光光度计在550nm处测量吸光值，并记录数据。根据链霉素标准曲线对照， 计算出培养基中链霉素的量。3结果与讨论3.1不同pH对灰色链霉菌生长情况的影响表1不同pH对灰色链霉
8、菌生长情况的影响培养时间生物量（mg）pH6.66.87.27.524h0.0240.0290.0290.02572h0.0480.0470.0540.051120h0.0550.0540.0650.064168h0.0560.0570.0680.068不同pH下生物量的变化0. 08 l+ pH6. 6亠 pH6. 8 pH7. 2pH7. 5由表1得出，在培养100h左右细菌的生长达到稳定期，生物量基本不增长， 在pH7.2条件下，灰色链霉菌的生物量比其他pH条件下高，菌体长势较好。由 此分析得，pH为7.2是灰色链霉菌的最适生长pH。3.2不同pH对灰色链霉菌培养基中还原糖消耗的影响表2
9、不同pH对灰色链霉菌培养基中还原糖消耗的影响培养时间还原糖(mg)pH6.66.87.27.524h14.32010.76312.57711.24372h8.8928.5116.8468.456120h1.2481.4021.0243.298168h0.5190.6270.6470.639不同pH下培养基中还原糖浓度5. 0000. 0005. 0000. 000+ pH6. 68 pH7. 2 pH7. 5050100培养时间（h ）50_ 亠根据表2得出，细菌在培养50h到120h时还原糖消耗最快，此时细菌生长处 于对数期，大量消耗还原糖，而在pH7.2下，消耗的还原糖最多，这与在pH7.
10、2 下链霉菌生长最快相对应。3.3不同pH对灰色链霉菌产链霉素的影响表3不同pH对灰色链霉菌产链霉素的影响培养链霉素量(mg)pH6.66.87.27.524h0.9841.020.9910.99172h0.9950.9870.9380.951120h0.4620.4360.390.447168h0.50.5230.4550.467不同pH下效价时间(h )4结论由上述实验数据可得出以下结论1、pH为7.2是灰色链霉菌的最适生长pH；2、pH7.2下消耗的还原糖最快；3、参考文献1 储炬，李友荣.现代生物工艺学M.上海:华东理工大学出版社.2007.2 杨汝德，吴虹.现代工业微生物学实验技术M.科学出版社.2008.
