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1、3H-TdR掺入法检测淋巴细胞转化率液体闪烁滤膜测量法【目的】1. 掌握示踪法的原理及其在机体免疫功能检测上的应用。2. 初步掌握液认计数滤膜测量的基本技术。【原理】胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA合成的前身物。人外周血T淋巴细胞在PHA刺激下发生母细胞转化而增殖，处于S期的细胞不断地摄取TdR用以合成DNA。与此同时，3H-TdR也不断地被摄入细胞内而被放射性标记。通过液体闪烁计数测量方法，便可了解淋巴细胞增殖活动的情况，籍以了解机体的细胞免疫功能。【材料和方法】1、主要材料：消毒肝素抗凝管（内含肝素1020单位）、注射器、微量加样器、微量细胞培养板、49型玻璃纤维滤膜、离心机、细胞培养箱、干
2、燥箱、多头细胞收集器FJ-2107液体闪烁计数仪。2、主要试剂完全RPMI-1640培养液（内含15%FCS,25mMHepes,5X10-2mM=基乙醇），植物血凝素（PHA,用完全RPMI1640配成浓度为30ug/ml）；3H-TdR工作液18.5KBq/20ul（中国原子能研究院同位素所）。闪烁液（二甲苯1000ml,ppo7g,popop0.5g）。3、主要步骤 静脉采血肝素抗凝，充分摇匀后加入细胞微量培养板内（20ul/孔）。每个样品设自发转化孔和分裂原刺激孔，均为三个复孔。 自发转化孔每孔内加完全RPMI1640液0.2ml,分裂原刺激孔每孔内加PHA液0.1ml,RPMI1640液0.1ml。加样后，轻轻震荡混匀，置37CCO2培养箱内培养。 细胞培养至56h，每孔内加入3H-TdR工作液各20ul。轻轻震荡混匀后置37C,CO2培养箱内继续培养至72h终止培养。 终止培养时，用多头细胞收集器将细胞收集在49型玻璃纤维滤膜上，将滤膜置烤箱内烘干。 滤膜冷却后移入存有5ml闪烁液的闪烁杯中，避光放置一段时间后，用FJ-2107液闪计数器测量放射性，结果用刺激指数（SI）表示。刺激指数（SI）=刺激孔cpm-本底cpm自发转化孔cpm-本底cpm
