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1、甜蜜素测定方法1 实验原理气象色谱法测定甜蜜素是国标中的第一法,测定原理,是用亚硝酸钠分解食品中的甜蜜 素,产生的环己醇在硫酸的介质中与亚硝酸钠作用,生成环己醇亚硝酸酯,该物质在氢火焰 中有良好的响应值,以保留时间定性,峰面积定量。2 实验步骤取样品2克左右,需要提取打碎成粉末或者最大程度的剪碎,加入蒸馏水25ml在30 摄氏度水浴中超声提取甜蜜素45mins,同时做空白实验、对照实验(加入甜蜜素标准品) 和回收率实验(炒货样品最好每个都做回收,蜜饯样品可使用一个回收率进行计算), 45mins 结束后,加入5ml浓度为100g/L的硫酸在30中稳定10mins,取出置于4摄氏度冰水浴中 5m
2、ins,随后加入5ml正己烷(4C)封住液面,防止而后产生的衍生物环己基氨基磺酸酯挥 发,再加入 5ml 浓度为 50g/L 的亚硝酸钠,封管,缓慢摇动,放入冰水浴中,反应开始前 10mins 内不要剧烈摇动,后 20mins 内,每 5mins 左右漩涡震荡一次,冰水浴的时间总共 30mins,从冰水浴中取出后,加入氯化钠饱和溶液2.5ml,离心,取上清,上机分析。3 工作曲线制作分别加入取配置好的实验室级别标准溶液于50ml离心管中,加入量参考表1,定溶到同 一刻度,标准溶液浓度为5mg/ml,按上述方法进行操作,得到工作曲线。由于平时日检的 产品的甜蜜素含量基本在1mg/g到5mg/g这
3、个区间,尤其在1mg/g到2mg/g的产品居多, 所以,我们有针对性的将这两个区间的点加入的相对密集,以便于准确的得到产品的甜蜜素 含量。如表1所示,标准溶液配制时间为20140505,标准溶液浓度为5.2340mg/ml。表 1 2014 年 5 月 5 日标准工作曲线No.标准溶液加入量(ml)甜蜜素(mg)Area(L)20.84.18723961.05.23405111.26.28086201.57.85107661.89.421292510.468010352.513.0850129415.70201552103.518.31901842此工作曲线定期校正,由于色谱柱的柱效会一直下降
4、,因此每次做出的标准曲线的斜率会有所差异。4 结果和计算上机分析后,得到色谱峰面积,带入工作曲线,得到甜蜜素含量M,单位mg,带入以 下公式计算:X:为样品中甜蜜素含量;单位:g/kgM:由工作曲线得出的甜蜜素含量;单位:mgm:样品的质量;单位:g;P:为加标回收率;F:为计算换算系数0.8908;注:加标回收率主要使用生产级别的甜蜜素,浓度5mg/ml,向样品中加入2ml,计算回 收率;计算换算系数,主要是用于将环己基氨基磺酸钠换算为环己基氨基磺酸。实验要素:1、样品尽量打碎,超声提取时间不宜超过45mins;2、硫酸、正己烷和亚硝酸钠的添加顺序有严格要求,不可混乱顺序;3、添加正己烷的移液枪要精确,至少系统误差是一样的;4、冰浴时间不宜超过30mins,冰浴后应尽快上机;5、计算回收率时,参考标准品的峰面积变化,前后两次实验标准品的峰面积之比应为0.901.10,否则说明标准品已经降解,不宜用作计算回收率。6、定期校准标准工作曲线。