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1、甜蜜素测定方法1 实验原理气象色谱法测定甜蜜素是国标中的第一法，测定原理，是用亚硝酸钠分解食品中的甜蜜 素，产生的环己醇在硫酸的介质中与亚硝酸钠作用，生成环己醇亚硝酸酯，该物质在氢火焰 中有良好的响应值，以保留时间定性，峰面积定量。2 实验步骤取样品2克左右，需要提取打碎成粉末或者最大程度的剪碎，加入蒸馏水25ml在30 摄氏度水浴中超声提取甜蜜素45mins，同时做空白实验、对照实验（加入甜蜜素标准品） 和回收率实验（炒货样品最好每个都做回收，蜜饯样品可使用一个回收率进行计算）， 45mins 结束后，加入5ml浓度为100g/L的硫酸在30中稳定10mins,取出置于4摄氏度冰水浴中 5m
2、ins，随后加入5ml正己烷（4C）封住液面，防止而后产生的衍生物环己基氨基磺酸酯挥 发，再加入 5ml 浓度为 50g/L 的亚硝酸钠，封管，缓慢摇动，放入冰水浴中，反应开始前 10mins 内不要剧烈摇动，后 20mins 内，每 5mins 左右漩涡震荡一次，冰水浴的时间总共 30mins，从冰水浴中取出后，加入氯化钠饱和溶液2.5ml，离心，取上清，上机分析。3 工作曲线制作分别加入取配置好的实验室级别标准溶液于50ml离心管中，加入量参考表1,定溶到同 一刻度，标准溶液浓度为5mg/ml，按上述方法进行操作，得到工作曲线。由于平时日检的 产品的甜蜜素含量基本在1mg/g到5mg/g这
3、个区间，尤其在1mg/g到2mg/g的产品居多， 所以，我们有针对性的将这两个区间的点加入的相对密集，以便于准确的得到产品的甜蜜素 含量。如表1所示，标准溶液配制时间为20140505，标准溶液浓度为5.2340mg/ml。表 1 2014 年 5 月 5 日标准工作曲线No.标准溶液加入量（ml）甜蜜素（mg）Area(L)20.84.18723961.05.23405111.26.28086201.57.85107661.89.421292510.468010352.513.0850129415.70201552103.518.31901842此工作曲线定期校正，由于色谱柱的柱效会一直下降
4、，因此每次做出的标准曲线的斜率会有所差异。4 结果和计算上机分析后，得到色谱峰面积，带入工作曲线，得到甜蜜素含量M,单位mg,带入以 下公式计算：X：为样品中甜蜜素含量；单位：g/kgM：由工作曲线得出的甜蜜素含量；单位：mgm：样品的质量；单位：g；P：为加标回收率；F：为计算换算系数0.8908；注：加标回收率主要使用生产级别的甜蜜素，浓度5mg/ml，向样品中加入2ml，计算回 收率；计算换算系数，主要是用于将环己基氨基磺酸钠换算为环己基氨基磺酸。实验要素：1、样品尽量打碎，超声提取时间不宜超过45mins；2、硫酸、正己烷和亚硝酸钠的添加顺序有严格要求，不可混乱顺序；3、添加正己烷的移液枪要精确，至少系统误差是一样的；4、冰浴时间不宜超过30mins，冰浴后应尽快上机；5、计算回收率时，参考标准品的峰面积变化，前后两次实验标准品的峰面积之比应为0.901.10，否则说明标准品已经降解，不宜用作计算回收率。6、定期校准标准工作曲线。
