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1、齐齐哈尔医学院本科学位论文 香菇多糖的小肠吸收 学士学位论文香菇多糖的小肠吸收学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名： 日期： 年 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权 大学可以将本学位论文的全部或部分
2、内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。涉密论文按学校规定处理。作者签名：日期： 年 月 日导师签名： 日期： 年 月 日摘 要 目的：本文以香菇多糖为模型药，初步预测香菇多糖的小肠吸收特征。为香菇多糖的剂型设计提供理论基础，并为研究其他多糖类药物提供参考。方法：实验对所购买的香菇多糖粗品采用Sevage法去蛋白，双氧水脱色；采用蒽酮-硫酸法测定香菇多糖含量；采用大鼠外翻肠囊法，考察了吸收部位给药时间、给药浓度对香菇多糖小肠吸收的影响。结果：实验过程采用蒽酮-硫酸法测定香菇多糖含量，这些方法线性范围良好，回收率较高，方法准确可行；不同肠段部位（十二指
3、肠空肠回肠）间药物吸收无显著差异（p0.05），单位时间吸收的药量随浓度的增加趋于增加，吸收无饱和现象，给药浓度越低药物的吸收率越大。结论：推测香菇多糖是顺浓度梯度转运的，属于被动转运，但香菇多糖不是通过单纯扩散透过小肠上皮。关键词：香菇多糖；外翻肠囊法；蒽酮-硫酸法；吸收机制 Abstract Objective: this paper is about the study of lentinan,preliminary prediction the intestinal absorption characteristics of mushroom polysaccharides. The
4、design for the lentinan formulations, and provides the theoretical foundation for the research of other polysaccharides provide references.Methods: Sevage method for deproteinization procedure,and H2O2 method for decolorization procedure;The experiment use anthrone-sulfuric acid method for determina
5、tion of anthraquinone content of lentinan;In this paper,Rat evered gut sac system of different intestinal section (jejunum,ileum and duodenum)was used for the study on absorption characteristics and the absorption mechanism of LNT.Results:The linearity,the revovery and the accuracy of the method wer
6、e all good for the anthrone-sulfuric acid method.The data showed that LNT absorption rate was the same for all sections of the intestine(p0.05). The absorption rate show a linear relationship with the increment of dose or concentration. the lower of the concentration of drug , the increaser of the a
7、bsorption rate.There is no significant phenomenon of saturation.Conclusion: that is the lentinan concentration gradient transfer, belong to passive transport,but not by simple diffusion mushroom polysaccharides by intestinal epithelium. Keywords：Lentinan polysaccharide(LNT),everted gut sac, anthrone
8、-sulfuric acid colorimetry, absorption mechanism学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名： 日期： 年 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权 大学可以将本学
9、位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。涉密论文按学校规定处理。作者签名：日期： 年 月 日导师签名： 日期： 年 月 日文献综述香菇(Lentinula edodes Pegle或Lentinula edodesS ing)，又名香覃、冬菇，是世界上著名的实用真菌之一。它不仅素以色、香、味俱佳而著称，而且营养丰富，能医治多种疾病。我国自古以来就把香菇说成是一种“肌里玉洁，芳香韵味，上至皇帝，下至百姓，无人不喜”的素食，有“素中之荤”、“菇中之王”、“蔬菜之魁”等多种美称，是食用菌家族中的宠儿。中医认为，香菇味甘、性平，具有补气健脾
10、、和胃益肾、滋味助食之功效9。香菇多糖系从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖。多糖以甘露糖为主，含少量的葡萄糖、微量的岩藻糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等，肽链由天冬氨酸、组氨酸、丝氨酸、赖氨酸、谷氨酸等18种氨基酸组成。LNT的化学结构是一种以-D-1-3葡萄糖残基为主链，侧链为1-6葡萄糖残基的葡聚糖。平均分子量约为50万道尔顿7。香菇多糖1969年在日本首先发现，自此，国内外学者对LNT作了许多深人的研究。近年来，LNT的药理作用研究取得了很大进展。尤其是香菇多糖是一种宿主免疫增强剂,具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能。传统香菇多糖的提取方法有
11、水提醇沉法、稀碱浸提法、稀酸浸提法和酶法等，随着对香菇研究的不断深入,又出现超滤法、微波辅助浸提法以及超声波法等。水提醇沉法为最经典的提取香菇多糖的方法，以工艺简单、易于推广等优点为人们所接受。用水提醇沉法提取香菇多糖,正交实验确定了最佳提取工艺为:温度：85，时间:5h，加水量：15倍水量，除蛋白的最优工艺条件：样液：氯仿-正丁醇(体积比)=3，氯仿:正丁醇(体积比)=513。香菇中的糖类主要由还原糖和香菇多糖组成，目前用的比较普遍的糖类分析方法是比色法，主要有3，5-二硝基水杨酸法苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。苯酚-硫酸法：苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起
12、显色反应，己糖在490 nm处（戊糖及糖醛酸在480 nm）有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。此方法简单、快速、灵敏，对每种糖仅需制作一条标准曲线，颜色持久，但有颜色的样品，易偏高，不理想。.蒽酮-硫酸法：糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于625 nm处有最大吸收，显色与多糖含量呈线性关系。本方法可用于多糖、单糖含量的测定。色氨酸含量较高的蛋白质对显色反应有一定干扰2。本研究拟采用蒽酮-硫酸法测定总糖的含量，蒽酮-硫酸法的原理是根据多糖在硫酸的作用下水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛酸衍生物，糖醛酸衍生物与蒽酮在强酸性条件下受热缩合成绿色化
13、合物，在适当波长下和一定浓度范围内，吸收度与糖浓度呈线性关系，从而可比色测定多糖含量2。蒽酮羟甲基糠醛糠醛衍生物（绿色）当前研究药物小肠吸收机制的方法有多种，主要分为在体法，离体法和细胞模型法，其中离体法中的外翻肠囊法具有操作简单，易于实现，受其它身体条件影响少等优点，因而被广泛的用于研究药物小肠吸收行为以及药物在吸收中的相互作用4。本文以香菇多糖为研究对象，在对其进行提纯以及定量分析研究的基础上，采用大鼠外翻肠囊法考察吸收部位、药物浓度、吸收时间对香菇多糖小肠吸收的影响，研究香菇多糖的小肠吸收特点，初步探讨香菇多糖的小肠吸收机制。随着现代社会生活节奏的加快以及人们工作压力的加大,使得人类免疫
14、系统功能降低，各种疾病的发病率呈上升趋势。其中，作为人类的最大杀手癌症，也日益引起各国学者的广泛关注。而香菇多糖具有抗肿瘤的作用，毒副作用小且安全有效。这无疑将成为今后药物的一个研究方向。前 言 中药胃肠转运研究是中药现代化基本问题之一。目前，中药有效成分的药代动力学研究已有报道，药品管理部门对新的中药有效成分也明确需要进行ADME研究，但更多的已经在临床上应用的中药有效成分或有效部位的ADME过程并不清楚，一些中药有效成分的吸收差、生物利用度低下的问题已经凸现，应用这些成分、部位制备的正在广泛使用的中药制剂缺乏生物药剂学基础。 从中药制剂中抽取出已经肯定药效作用的中药成分或部位进行胃肠吸收的
15、过程和机制的研究，有预见性地针对吸收性质不良的中药成分或其制剂提出新的口服剂型方案，将对中药口服剂型的现代化发展和走向世界起到重要作用。我国对多糖的研究始于上世纪70年代末，近年来发展迅速，1996年我国“糖生物学”列为国家重点课题。研究对象涉及真菌类、地衣类、植物、动物等；研究范围包括多糖的分离纯化，结构分析、理化性质、药理学及治疗应用等，对其免疫增强作用机理的研究已经深入到分子、受体水平，研究方法涉及化学、生物学、医药学等诸多领域。近年来，国内对大量中草药多糖及糖缀合物如天门冬、黄芪、山药、枸杞、灵芝、香菇、云芝、大枣、芦荟、山茱萸、刺五加、紫菜、茶叶、螺旋藻、当归等进行了深入的化学结构分析和广泛的生物活性研究，相继报道了这些多糖及糖复合物具有抗肿瘤、抗病毒、双向调节血糖、免疫调节、降血脂等多方面的药理作用。多糖因其独特的药理活性和低毒特征，在临床应用中已呈现出极大的潜力，成为中药
