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1、安捷伦高效液相色谱仪把持说明之马矢奏春创作创作时间：二零二一年六月三十日一、校枪及样品处置1. 校枪仪器：两个小烧杯、分析天平、移液枪1000 L、100 u L步伐：翻开分析天平预热, 一只烧杯放到称量盘上调零, 一只装 入纯水.将移液枪1000 uL、100uL调至950 uL、50uL,分别吸 取纯水称质量, 如偏年夜或偏小, 调节移液枪直至准确到 0.001g （如枪使用过久或气密性欠好, 可以准备一个小烧杯装入纯水, 每次先轻轻沾湿枪口, 甩失落水或在用卫生纸吸取口上的水, 再 插上枪头使用.）注意慢吸慢放, 不要挂珠.2. 样品处置：用1.5mL离心管取0.5mL发酵液，取出样品后
2、，首 现在离心机上离心（13000rap/min 3min）.然后将样品稀释20 倍，取950 uL纯水、50uL发酵液于离心管中.混匀后在离心机 上离心（13000rap/min 3min）.准备自动进样瓶（瓶中放上内衬 管），取200 uL待测液盖紧盖子.按顺序放到自动进样盘中.二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵：四元、进样器：自动进样器（六通 阀）、柱温箱、检测器：示差折光检测器开关翻开.翻开计算机，进入Windows XP画面,并运行CAC Server法式, 翻开色谱仪各组件电源，待显示已联上各组件的信息及各模块自 创作时间：二零二一年六月三十日检完成后，双击Instrument
3、 1 Online ,图标翻开工作站.化学 工作站自动与1200LC通讯.流动相:将流动相（一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相）放 入溶剂瓶中，翻开冲刷阀，设流速为2ml/min,单击确定，再依 次单击泵f控制，选中启动，单击确定，则系统开始冲刷，至管 路无气泡为止，切换管路反复把持至所需管路均无气泡.在“控 制”选项中选“关闭”，关闭泵，关闭冲刷阀.单击泵下面瓶图标, 输入溶剂的实际体积和瓶体积.每次四元泵开始前，要翻开冲刷阀阀门以5ml/min的流速冲 刷10分钟，使脱气机与泵之间的流动相从冲刷阀流出，以免隔夜 的流动相损伤色谱柱.每次进样检测前，要用流动相冲刷色谱柱30分钟，到达柱温 前2
4、0min流速设为0.2ml/min，达柱温后再改为0.6ml/min.待1 1.5h检测器的基线稳定方可进行进样检测；检测结束后，色谱 柱要先用水冲刷20分钟，然后用甲醇或乙腈冲刷至少20分钟， 以延长色谱柱的使用寿命.绝对禁止偏酸、偏碱的流动相以及缓冲 液在色谱柱中过夜.三、编纂分析方法新方法建立：法式菜单显示绿色，即可进行参数设置及把持 泵参数设定：设定流速、比例、运行时间、平衡时间、泵辅助设 定（梯度）等.点击确定进入下一画面自动进样器参数设定：设定进样量（5L）、抽取位置（调节针高度3.0mm ）、进样方式等.“序列” f序列参数f子目录（日期：年月日时间）“序列表”：拔出/批量输入向
5、导f “追加”、“拔出” f “样品位置”、“开始位置”、“增量”、“拔出行数”标准进样：只能输入进样体积，此方式无洗针功能.洗针进样：可以输入进样体积和洗瓶位置此方式针从样品瓶抽完 样品后会在洗瓶中洗针.柱温箱参数设定：测按时75C,反冲时80C.（在”温度”下面 的方框内输入所需温度，并选中它，点击”更多”键，选中“与左 侧相同”使柱温箱的温度左右一致，点击“确定”进入下一界面. 检测器参数设定一示差参比池冲刷：10min （校零）.不需要每次都冲刷.温度设置50C（不要设很高，与检测器温度相立即可）选中点击确定进入下一画面方法保管单击方法另存为输入一一方法名，如test单击确认选择已有方
6、法：点击【Met hod】，点击【Load met hod】选项，选 取已存的各种把持方法.四、样品分析与收集数据将样品放于样品盘中相应位置，所有的样品均需廓清.“序列” f “序列参数”：依照自动进样盘上的样品瓶的顺序编 写参数（样品瓶位置、名称、方法）.待仪器显示Ready,基线平稳，从【Run control】菜单中选择【Run Met hod】,开始进样分析.或点击“开始”开始进样分析. 数据处置：单击【View】菜单，单击【Data analysis】选项，进 行数据分析.单击【View】菜单，单击【Method and Run con trol】选项，回到样品分析界面.数据分析方法
7、编纂从File菜单选择Load signal选中您的数据文件名，单击Ok 积分：从“积分”中选择“积分”，如积分结果不理想，再从菜单 中选择“积分事件”选项选择合适的斜率灵敏度、峰宽、最小 峰面积、最小峰高从积分菜单中选择积分选项则数据被积分如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止单击左边图标将积分参数存入方法五、标准曲线的绘制1. 称取葡萄糖、果糖、蔗糖（恒重）各lg准确到，稀释到 1000mL容量瓶中.2. 将标准溶液摇匀， 用离心管取糖标液， 准备自动进样瓶（瓶 中放上内衬管），取200 UL待测液盖紧盖子.3. 设置：将样品放于样品盘中相应位置，所有的样品均需廓清. “序列”
8、f “序列参数”：依照自动进样盘上的样品瓶的顺序编写参数（样品瓶位置、名称、方法、进样量:相应成梯度的量）.用浓度和峰面积回归，就获得了标准曲线7、关机冲刷系统：反相柱用10%的甲醇水冲刷系统30分钟，再用 100甲醇冲刷系统 20 分钟， 然后关泵， 正相柱先用合适溶剂冲 刷， 后用柱保管液冲刷.退收工作站， 关闭计算机.关闭 10%异丙醇溶液控制阀.关闭仪器各组件关失落电源开关8、注意事项、色谱柱使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围, 如pH值范围、流动相类型等；必需使用呵护柱；色谱柱长时间不 用时，柱内应布满溶剂，两端封死保管.、流动相使用前必需过滤，不要使用多日寄存的蒸馏水（
9、易长 菌）.、仪器运行时，泵头必需用10%异丙醇水溶液虹吸冲刷，不能 干涸.、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低 限会自动停泵.、对手动进样器当使用缓冲溶液时要用水冲刷进样口同时挪动 转移进样阀数次每次数毫升、若使用含盐流动相，开机时必需先用10%甲醇水溶液冲刷20 分钟以上再换上含盐流动相.、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意呵护, 当发现过滤头变脏或长菌时，不成用超声洗涤，可用35%稀硝酸 溶液浸泡后再洗涤.、检测器的灯有使用寿命限制，一般在正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，分析结束，立即关灯.、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有
10、含盐流 动相，则A、D （进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C （进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相.9、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的梗塞及其处置请严格执行溶剂过滤请勿使用多日寄存的蒸馏水及磷酸盐缓冲液如果应用许可可在溶剂中加入0.0001-0.001M的叠氮化钠.在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气，以隔绝空气防止使溶剂瓶流露在直射阳光下尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水 溶液或磷酸盐缓冲液梗塞后的处置法方法：将过滤头从组件中取下在35%硝酸液中浸泡1h,然后用二次蒸馏 水冲刷干净.不能超生清洗.10、泵的维护、流动相使用前必需脱气过滤、使用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项、关机
11、前反相色谱柱用10%的甲醇水冲刷系统20分钟，然后用 有机溶剂冲刷系统10分钟，然后关泵.正相色谱柱用适当的溶剂 冲刷.、及时更换Purge Valve内的过滤芯，当翻开Purge Valve时 压力高于10bar标明过滤芯已堵、使用合适的密圭寸圈：标准密圭寸圈能适合于年夜大都应用.但使 用正相溶剂最好使用聚四氟乙烯密封圈，泵的压力限制最年夜压 力设为200bar.、使用梯度比例时的注意事项：当盐溶液与有机溶剂溶液混合时盐溶液能与有机溶剂溶液完全混 溶而不会呈现沉淀.由于在比例阀的混合点重力作用使盐颗粒沉淀下来通常阀A接水 相/盐溶液D接有机溶剂此法连接可有效使盐回落到盐溶液中并被 溶解若倒置
12、过来盐可能落在有机溶剂中呈现问题当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时推荐将缓冲盐通道接在A通道上 有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上按期用水冲刷所有 的通道以除去阀口上可能呈现的盐沉淀11、自动进样器使用注意使用自动洗针功能自动洗针功能可以把法式设置为“带有洗针的进样”，或将自动洗 针功能包含在进样器法式中.当使用自动洗针功能时，进样针在 取样后会转移到洗针步伐.造成携留效应的主要原因是残留在进 样针外的少量样品.通过进样后的洗针功能可以立即洗去针外概 况上残留的样品.当进样阀转回到主流路 时，定量管和针内所有 的样品都被冲刷到色谱柱中.这种结合洗针和冲刷管路的设计可 以把携留效应减低到最小的水平.去失落洗涤瓶盖：为了获得最佳的分析结果，装有溶剂的洗涤瓶 是不加盖的，而且洗涤瓶中的溶剂对样品组分有较好的溶解作用. 如果洗涤瓶有盖将会有少量样品留在密 封垫上，这样会把残留的 样品带到下一个样品中.创作时间：二零二一年六月三十日
