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1、 植物组织培养实验设计及 常用设备的使用与维护一 实验目的 1.熟悉植物组织培养实验室的组成及设备 2.掌握植物组织培养实验室的设计要求 3.熟悉植物组织培养所需的仪器设备二 实验原理植物组织培养是通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。要达到无菌操作和无菌培养，就需要人为创造无菌的环境，使用无菌的器皿及器械，同时还需要人工控制的温度,光照，湿度等培养条件。无菌环境和培养条件的创造需要一定的设施及设备。三实验步骤1.实验室的设计要求 功能齐全、布局合理、环境清洁、易于灭菌2. 实验室的组成及功能实验室的组成： 洗涤室、药品室、称量室、培养基
2、配制室、灭菌室、接种室、培养室、观察记录室、储藏室、移苗室实验室的功能： 洗涤室用于玻璃器皿、实验用具的清洗、干燥、培养材料清洗、预处理也可在本室完成。室内应建造大型水槽和一个或几个浸泡池，水槽最好上一内衬白瓷片的水泥槽，为防止碰坏玻璃器皿，下面可铺一活动的橡胶板。备有晾瓶架，用于放置刷净的培养器皿，配备有一定数量的周转盘或小推车，用于运输培养器皿。地面要注意防滑，排水通畅，墙壁要有耐湿、防潮功能。 药品室用于存放各种药品试剂。室内要求干燥、通风，避免光照，配有药品柜、冰箱等设备。化学试剂物品分类存放于柜中，有毒物质如升汞需要专人密封保存。原药可室温下存放，配好的母液，宜置于4冰箱中保存。药品
3、室紧邻称量室较好，便于工作。 称量室进行化学药品的称量。要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。有固定的水磨石平台，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。房间较少时，可以与药品室合二为一。 培养基配制室主要进行母液的配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌前的暂时存放。在条件允许下，面积宜大不宜小，室内应有大型实验台。配有电炉、锅子、量具、培养基分装器具、吸管、培养容器、水浴锅和酸度计等。如规模较小，可与洗涤室、灭菌室合并在一起。 灭菌室主要用于培养基和器皿的灭菌以
4、及蒸馏水的制备。建筑上要求其墙壁耐湿、耐高温、墙壁上最好有排除蒸汽的排风扇。有用于灭菌锅的二相或三相电源、供水、排水设施齐全。配有干燥箱、高压蒸汽灭菌锅、蒸馏水器或纯水机以及摆放和存放器皿、培养基的架子和橱柜。灭菌室应邻近接种室，避免灭菌后的培养基长距离搬运，增加污染机会。 接种室主要进行植物材料的表面消毒、分离切割、转接，其无菌程度的高低对组织培养的成功与否起至关重要的作用。在工作方便的前提下，接种室面积宜小不宜大，一般小的无菌室57m2即可。平方易吸潮，容易引起污染，有条件的应选择楼房，最好在二层或二层以上，与其他区域隔离。接种室的天花板及四壁尽可能光滑平整，地面平坦无缝，便于清洗和消毒。
5、一般安装滑动门，以减少开关门时空气的流动，在适当位置安装12支紫外线灯，用以辐射灭菌。室内干爽安静，清洁明亮，门窗紧闭，减少与外界空气对流，不存放与接种无关的物品，以免形成 紫外线无法照射到的死角。室内配有超净工作台、小推车、接种器械、酒精灯、酒精等。为减少接种人员进出时带入的杂菌，接种室外应设有缓冲室，供操作人员更换工作服、帽、鞋之用。为便于观察和参观，中间最好用玻璃墙隔离，接种室的门和缓冲室的门要错开，灭菌以23m2为宜。缓冲室最好也安装1支紫外线灯，用于环境的灭菌。 培养室是植物材料生长的场所。培养室应保持清洁，有光照、控温设备和定时设备，温度一般保持在（252），光照强度1000500
6、0lx，光照时间826h/d，在实际工作中应根据不同的要求灵活掌握。培养室主要用电调节温度和补充光照，用电量大。为节省能源，降低成本，其设计以充分利用空间和节省能源为原则。培养室可选两面采光，加大窗户，尽量考虑到利用自然光。采用双层玻璃以利隔热和防尘，培养室高度以比培养架略高为宜，墙壁要求有隔热、防火的性能。室内应保持整洁，切忌堆放无关物品。室内配有培养架、空调、药床等设备。小的培养室容易控制温度、光照等环境条件，特别是培养材料较少时节能效果更为明显。培养室初次使用要用甲醛熏蒸消毒，培养期间要定期进行室内消毒工作。 观察记录室是对培养物的生长情况及实验结果进行观察、记录的场所。室内应有固定的水
7、磨石台面，放置显微镜、解剖镜、显微照相等仪器，最好还应有一套制片和细胞学染色设备，进行制片或染色观察。室内应安静、清洁、明亮、保证仪器不振动、不受潮。 储藏室用于暂时不用的器皿、用具等的存放。储藏室最好设在楼房低层背阴处，便于物品搬运和存放，房间有良好的通风条件。 移苗室用于试管苗炼苗和移栽。移苗室应具有一定的控温、保湿、遮荫条件，一般要求温度在1525，相对空气湿度在70%以上，避免强光。普通温室或塑料大棚经过适当的改造均可使用，室内配有弥雾装置、遮阳网、防虫网、移植床、营养钵及移栽基质等。3. 植物组织培养实验室基本仪器设备一常规设备1 天平使用方法及注意事项：1.要放置在水平的地方。游码
8、要归零。 2.调节平衡螺母(天平两端的螺母)调节零点直至指针对准中央刻度线。 3.左托盘放称量物，右托盘放砝码。根据称量物的性状应放在玻璃器皿或洁净的纸上，事先应在同一天平上称得玻璃器皿或纸片的质量，然后称量待称物质。 4.添加砝码从估计称量物的最大值加起，逐步减小。托盘天平只能称准到0.1克。加减砝码并移动标尺上的游码，直至指针再次对准中央刻度线。 5.过冷过热的物体不可放在天平上称量。应先在干燥器内放置至室温后再称。 6.物体的质量 =砝码+游码 7.取用砝码必须用镊子，取下的砝码应放在砝码盒中，称量完毕，应把游码移回零点。 8.称量干燥的固体药品时，应在两个托盘上各放一张相同质量的纸，然
9、后把药品放在纸上称量。 9.易潮解的药品，必须放在玻璃器皿上（如：小烧杯、表面皿）里称量。 10.砝码若生锈，测量结果偏小；砝码若磨损，测量结果偏大。11.称量完毕后，应当把游码拨回零刻度，把砝码放回砝码盒中。12.当天平不用时天平罩内应放硅胶或其他中性干燥机以保持干燥。2.冰箱3.酸度计使用方法：首先、安装 电源的电压与频率必须符合仪器铭牌上所指明的数据，同时必须接地良好，否则在测量时可能指针不稳。 仪器配有玻璃电极和甘汞电极。将玻璃电极的胶木帽夹在电极夹的小夹子上。将甘汞电极的金属帽夹在电极夹的大夹子上。可利用电极夹上的支头螺丝调节两个电极的高度。 玻璃电极在初次使用前，必须在蒸馏水中浸泡
10、24小时以上。平常不用时也应浸泡在蒸馏水中。 甘汞电极在初次使用前，应浸泡在饱和氯化钾溶液内，不要与玻璃电极同泡在蒸馏水中。不使用时也浸泡在饱和氯化钾溶液中或用橡胶帽套住甘汞电极的下端毛细孔。 其次、校整 将“pHmv”开关拨到pH位置。 打开电源开头指示灯亮，预热30分钟。 取下放蒸馏水的小烧杯，并用滤纸轻轻吸去玻璃电极上的多余水珠。在小烧杯内入选择好的，已知pH的标准缓冲溶液。将电极浸入。注意使玻璃电极端部小球和甘汞电极的毛细孔浸在溶液中。轻轻摇动小烧杯使电极所接触的溶液均匀。 根据标准缓冲液的pH，将量程开关拧到07或714处。 调节控温钮，使旋钮指示的温度与室温同。 调节零点，使指针指
11、在pH7处。 轻轻按下或稍许转动读数开关使开关卡住。调节定位旋钮，使指针恰好指在标准缓冲液的pH数值处。放开读数开关，重复操作，直至数值稳定为止。 校整后，切勿再旋动定位旋钮，否则需重新校整。取下标准液小烧杯，用蒸馏水冲洗电极。 最后、测量将电极上多余的水珠吸干或用被测溶液冲洗二次，然后将电极浸入被测溶液中，并轻轻转动或摇动小烧杯，使溶液均匀接触电极。 被测溶液的温度应与标准缓冲溶液的温度相同。 校整零位，按下读数开关，指针所指的数值即是待测液的pH。若在量程pH07范围内测量时指针读数超过刻度，则应将量程开关置于pH714处再测量。 测量完毕，放开读数开关后，指针必须指在pH7处，否则重新调
12、整。 关闭电源，冲洗电极，并按照前述方法浸泡。4.离心机使用方法：1)离心前用天平保证离心管的绝对平衡。(2)打开电源歼关，离心机自检后，开启盖门(3)选择所需转头，用扳手安装转头，松紧适当。(4)装载离心管后，拧好转头盖，按下离心机门盖。(5)设定好转速、时间和温度后，按下启动按钮开始离心。(6)离心结束后，开启门盖，拧开转头盖。(7)取出离心管后，卸下转头，关闭电源开关。(8)在离心机内仓恢复室温后，擦干内壁。二，灭菌设备高压蒸汽灭菌器使用方法：（1） 在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。 （2） 加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到 33.78kP
13、a时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。 （3） 继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物。 注意事项：（1） 待灭菌的物品放置不宜过紧。 （2） 必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。 （3） 灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。 （4） 装培养基的试管或瓶子的
14、棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。 （5） 为了确保灭菌效果，应定期检查灭菌效果，常用的方法是将硫磺粉末（熔点为115）或安息香酸（熔点为120）置于试管内，然后进行灭菌试验。如上述物质熔化，则说明高压蒸气灭菌器内的温度已达要求，灭菌的效果是可靠的。也可将检测灭菌器效果的胶纸（其上有温度敏感指示剂）贴于待灭菌的物品外包装上，如胶纸上指示剂变色，亦说明灭菌效果是可靠的。 （6） 现在已有微电脑自动控制的高压蒸气灭菌器，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。 三.无菌操作设备1.超净工作台规格价格及产地：产 品 名 称、型号规 格单 价产地经济
15、型PLT-ZDS650mm宽，单人单面，桌上型垂直、水平送风3400普朗特850mm宽，单人单面，桌上型垂直、水平送风3800普朗特水平标准型PLT-DDS9007501430mm，单人单面，水平送风 洁净度：100级送风风速：0.30.6m/s，高档不锈钢台面，带紫外线灯。无隔板，进口风机，冷轧板三道酸化工序精制烤漆。5600普朗特PLT-SDS15007001430mm，双人单面，水平送风，洁净度：100级送风风速：0.3-0.6m/s，高档不锈钢台面，带紫外线灯。无隔板，进口风机，冷轧板三道酸化工序精制烤漆。8700普朗特垂直标准型PLT-DDC9807201620mm，单人单面，垂直送风 洁净度：100级送风风速：0.3-0.6m/s，高档不锈钢台面，带紫外线灯。无隔板，进口风机，冷轧板三道酸化工序精制烤漆。6100普朗特
