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1、实训十 土壤速效磷含量的测定（0.5mol/LNaHCO3浸提-钼锑抗比色法）一、目的要求土壤速效磷也称土壤有效磷，包括水溶性磷和弱酸溶性磷，其含量是判断土壤供磷能力的一项重要指标。测定土壤速效磷的含量，可为合理分配和施用磷肥提供理论依据。实验要求了解测定土壤速效磷的基本原理，掌握其测定方法。二、方法原理用pH8.5的0.5mol/L的NaHCO3作浸提剂处理土壤，由于碳酸根的存在抑制了土壤中的碳酸钙的溶解，降低了溶液中Ca2+浓度，乡音的提高了磷酸钙的溶解度。由于浸提剂的pH较高，抑制了Fe3+和Al3+的活性，有利于磷酸铁和磷酸铝的提取。此外，溶液中存在着OH-、HCO3-、CO32-等阴
2、离子，也有利于吸附态磷的置换。用NaHCO3作浸提剂提取的有效磷与作物吸收磷有良好的相关性，其适应范围也广泛。浸出液中的磷，在一定的酸度下，用硫酸钼锑抗还原显色成磷钼蓝，蓝色的深浅在一定浓度范围内与磷的含量成正比，因此，可以用比色法测定其含量。三、主要仪器震荡机、分光光度计或光电比色计、天平（0.01g）、三角瓶（250ml）、容量瓶（50ml）、漏斗、无磷滤纸、移液管（10ml）。四、试剂配制1.0.5mol/L的NaHCO3 （pH8.5）浸提液 称取化学纯NaHCO342.0g溶于800ml蒸馏水中，以4mol/L NaOH溶液调节pH至8.5（用pH计测定），然后稀释至1000ml，保
3、存在试剂瓶中。如果贮存期超过1个月，是用时应重新调整pH。2.无磷活性炭 将会活性炭先用1：1（V/V）的盐酸浸泡过夜，在布氏漏斗上抽滤，用蒸馏水冲洗多次至无Cl-为止，在用0.5mol/L NaHCO3溶液浸泡过夜，在布氏漏斗上抽滤，用蒸馏水洗尽NaHCO3，检查至无磷为止，烘干备用。3.7.5mol/L硫酸钼锑抗贮存液 在1000ml烧杯中加入400ml蒸馏水，蒋烧杯浸在冷水中，然后缓慢注入208.3ml浓硫酸（分析纯），并不断搅拌，冷却至室温。另称取分析纯钼酸铵20g溶于60的150ml蒸馏水中，冷却。再将硫酸溶液慢慢倒入钼酸铵溶液中，不断搅拌，最后加入1000ml0.5%酒石酸锑钾溶液
4、，用蒸馏水稀释至1000ml，摇匀，贮存于棕色试剂瓶中，避光保存。4.钼锑抗混合显色剂 称取1.50g抗坏血酸（左旋，旋光度+12+22，分析纯）溶于100ml钼锑抗贮存液中，混匀。此试剂有效期为24h，宜用前配制，随配随用。5.磷标准液 准确称取在105烘箱中烘干2h的分析纯KH2PO40.2195g，溶于400ml蒸馏水中。加浓硫酸5ml，转入1000ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，此溶液为50mg/L磷标准液，此溶液不易久贮。6.磷标准曲线绘制 分别吸取50mg/L磷标准液0、1、2、3、4、5（ml）于50ml容量瓶中，各加入0.5mol/L的NaHCO3浸提液1ml和钼锑抗显
5、色剂5ml，除尽气泡后定容，充分摇匀，即为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol/L的磷的系列标准液。30min后与待测液同时进行比色，读取吸光度值。再方格坐标纸上以吸光度值为纵坐标，磷mol/L为横坐标便绘制成磷标准曲线。五、操作步骤1.待测液的制备 称取通过1mm筛孔的风干土样5.00g置于250ml三角瓶中，加入一小勺无磷活性炭和0.5mol/L的NaHCO3浸提液100ml，塞紧瓶塞，在震荡机上震荡30min，取出后立即用干燥漏斗和无磷滤纸过滤，滤液用另一只三角瓶盛接。同时作空白试验。2. 测定 吸取滤液10ml（对含P2O51%以下的样品吸取10ml，含磷高的可改为5ml或
6、2ml，但必须用0.5mol/L的NaHCO3补足至10ml），于50ml容量瓶中，加钼锑抗混合显色剂5ml，小心摇动。30min后，在721或722型分光光度计上用波长660nm（光电比色计用红色滤光片）比色，以空白液的吸收值为0，读出待测的吸光度值。六、结果计算土壤速效磷（mg/L）=式中：待测液mg/L从标准曲线上查得待测液浓度；待测液体积50ml；分取倍数浸提液总体积（ml）为吸取浸出液体积（ml）的倍数（100/10）；烘干土重风干土重乘以水分系数。七、注意事项（1）钼锑抗混合显色剂的加入量要准确。（2）加入混合显色剂后，即产生大量的CO2气体，由于容量瓶口小，CO2气体不易逸出，在混匀的过程中易造成试液外溢，造成测定误差，因此必须小心慢慢加入，同时充分摇动排出CO2，以避免CO2的存在影响比色结果。（3）活性炭一定要洗至无Cl-反应，否则不能使用。（4）此法温度影响很大，一般测定应在2025的温度下进行。如室温低于20，可将容量瓶放在3040的热水中保温20min，取出冷却后进行比色。（5）0.5mol/L的NaHCO3测土壤有效磷分级可参考下列指示土壤速效磷的含量（mg/kg）10102020土壤供磷水平低中等高八、复习思考题1.为什么报告有效磷测定结果时，必须同时说明所用的测定方法？2.测定过程中，如要获得比较准确的结果，应注意哪些问题？
