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1、正交试验法优选复方三七活血颗粒中药材的提取工艺研究张述耀1（汕头大学医学院附属肿瘤医院药剂科，汕头市 515041）摘要 目的:优选复方三七活血颗粒中药材的最佳提取工艺。方法: 采用正交试验法，以提取液中三七总皂苷的含量以及总固体得率为指标，综合评分优选药材的提取工艺。结果:药材较优的提取工艺为加水12倍，提取3次，每次2h。结论: 优选的提取工艺各活性部位提取率高，操作简便，适用于生产。关键词：复方三七活血颗粒；正交试验法；提取工艺；三七总皂苷Study on the Extraction Process of Herbs in Compound Sanqi Huoxue Granules
2、by Orthogonal DesignZHANG Shu-yao（pharmaceutical preparation section of Affiliated Cancer hospital of Medical College of Shantou University, Shantou, Guangdong 515041）Abstract Objective: The technology of optimal extraction for compound sanqi huoxue granules is investigated in this study. Methods: O
3、rthogonal test was employed for selecting the optimum of extraction technology by colligation score and the indexes of the contents of panax notoginseng saponins, total solid matters in water extraction. Results:Twelve volumes of water, extracting 3 times with two hours for each time was considered
4、the optimum extraction technology of herbs. Conclusion: The considerable extraction rate of active components in the drugs is achieved by applying the selected technology, and the simple method is fit for production.Key words: compound sanqi huoxue granules; orthogonal design; extraction technology;
5、 panax notoginseng saponins复方三七活血颗粒由三七、骨碎补、红花、续断等13味药材组方而成，原处方收载于部颁标准三七活血丸中，具有活血、通络、散瘀的功效，临床上广泛用于铁打损伤、骨折初期肿胀严重者的治疗，具有疗效可靠、不良反应少、无须联合用药的优点。本处方药味多，成分复杂，原制剂工艺简单，在剂型方面，以每丸重9g的大蜜丸用药，不仅服药量大，病人耐受性差，而且挥发性成分易损失、质量难以控制。本实验以最大限度地提取药材中的有效成分，避免有效成分的分解流失和无效成分的溶出为原则，根据处方中有效成分的理化性质和药理作用，以三七的有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷
6、R1的含量之和（以下简称）及总固体得率为指标，采用正交试验法，进行三七活血颗粒中药材提取工艺的研究，以减小剂量、创新剂型、提高临床疗效、改善病人服药顺应性，并为生产提供依据。1仪器与试药WATERS2695/2996型高效液相色谱仪（美国）；所有药材均购自中山市中智药业有限公司。人参皂苷Rb1（批号:110704-200318)、人参皂苷Rg1（批号:110706-200319)、三七皂苷R1（批号:110736200321)（均购自中国药品生物制品检定所）。乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 含量测定方法的建立2.1.1 色谱条件色谱柱Kromasil C18(25
7、0 mm 4.6 mm，5m)；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算不低于4000。表1 流动相的比例Tab.1 proportion to mobile phase时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）01518821560183582652.1.2 线性关系考察精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg11.112mg、人参皂苷Rb11.214 mg、三七皂苷R10.601 mg的混合溶液，即得对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液5l、10l、15l 、20l、
8、25l，注入液相色谱仪。按上述色谱条件测定峰面积，以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1进样量微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为人参皂苷Rg1：y=274124.43x-81798.17(r=0.9991)，线性范围：5.56g27.8g；人参皂苷Rb1：y=216225.26x-125245.55(r=0.9993)，线性范围：6.07g30.35g；三七皂苷R1：y=239769.46x-38788.28(r=0.9998)，线性范围：3.005g15.025g。2.1.3 供试品溶液的制备按处方量称取药材提取，提取液浓缩定容至2000ml容量瓶中。精
9、密移取提取液5ml，加用水饱和的正下醇溶液10ml振摇15分钟，取上清液，加3倍量以正丁醉饱和的水溶液，摇匀，放置使分层，取正丁醇层，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至5ml，作为供试品溶液。2.1.4 空白溶液的制备按处方量称取除三七外的其余药材进行提取，按“2.1.3”项下制备空白供试品溶液。2.1.5 含量测定照中国药典2005年版一部附录VI项高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20l，注人液相色谱仪，测定，即得。见图1。 A B C图1 高效液相色谱图A 对照品；B 样品；C 阴性样品；Fig 1 HPLCA. Reference substance; B.
10、 Sample; C. Negative Sample; 2.2 正交试验设计与结果2.2.1正交试验设计根据方中药物的性质、现代药理学研究结果和中国药典中三七药材的质量控制指标1 2，以测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量和总固体得率为指标，用正交试验优选处方中药材的提取工艺条件。根据预试验结果，选取影响提取效果的因素和水平，试验方案见表2：表2 实验因素水平表Tab. 2 Factors and levels of experiments水平 因 素加水量 提取时间 提取次数(倍) A （h）B (次)C1 6 1 12 9 1.5 23 12 2 3 2.2.2 样品溶
11、液的制备：按处方量称取三七等13味药材，按L9（34）试验列号各条件分别回流提取、滤过，并浓缩定容到2000ml，放置备用。2.2.3 总固体得率的测定：精密量取各提取液100ml置已恒重的蒸发皿内，水浴蒸干，置105烘箱中，干燥3h，取出置干燥器中冷却0.5h，称重，置105烘箱中，干燥1h，至恒重，计算总固体得率。2.2.4 含量测定：按“2.1”项下测定供试品溶液中三七总皂苷（I）的含量。2.2.5 试验数据见表3，方差分析见表4。表 3 正交试验结果Tab.3 Results of orthogonal design试验号 列号 试验结果1 2 3 4 因 素 总固体 I的含 综合得分
12、 量（g） A B C D 得率(%) 1 1 1 1 1 10.48 0.74 42.92 1 2 2 2 16.54 0.90 59.13 1 3 3 3 20.77 1.58 88.64 2 1 2 3 17.46 1.04 64.65 2 2 3 1 21.73 1.74 95.56 2 3 1 2 12.79 1.37 67.27 3 1 3 2 18.16 1.88 93.48 3 2 1 3 12.62 1.57 73.39 3 3 2 1 20.31 1.62 89.1j 63.533 66.967 61.133 75.833j 75.767 75.967 70.933 73.233 673.7j 85.267 81.633 92.500 75.500 CT=50430.19Rj 21.734 14.666 31.367 2.600注：综合评分（总固体得率/最大总固体得率）1000.4+（的含量/最大的含量）1000.6表4 方差分析结果Tab.4 Results of analysis of variance方差来源 离均差平方和 自由度 F值 F临界值 显著性检验A 712.242 2 59.309 19.000 P0.05B 328.222 2 27.331
