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1、泌尿系细菌L型感染及其对常用抗生素的耐药性检测【摘要】 目的 探讨泌尿系细菌L型感染情况及其对常用抗生素的耐药性，为临床诊治提供科学依据。方法 用改良Kagan培养基对临床疑为泌尿系感染者的尿液分离培养，并对分离获得的细菌L型进行药物敏感试验。结果 泌尿系L型细菌感染率为%(35/83)，其中大肠埃希氏菌L型占%(13/35)。分离出的细菌L型对丁胺卡那霉素、庆大霉素、诺氟沙星、环丙沙星、青霉素G等耐药性较高。结论 临床对疑为泌尿系感染者应同时检测细菌及其L型，并根据药敏试验结果联合用药，以杀菌并阻止其变为L型。【关键词】 泌尿系感染 细菌L型 药物敏感试验 细菌L型只有在高渗环境中才能存活和
2、增殖，在普通培养基上不能生长或生长不良；临床对疑为泌尿系感染的患者采用普通培养基不能分离L型病原菌，导致漏诊或误诊13。此外，由于L型细菌的细胞壁缺陷，因而对作用于细胞壁的抗生素呈现不同程度的耐药，给临床合理用药造成困难。本文对我院83例泌尿系感染患者进行细菌L型分离鉴定，并测定其对常用抗生素的耐药性。 1 材料与方法 菌株来源 2005年11月至2006年5月我院住院及门诊患者尿培养为阴性，但有尿频、尿急、尿痛等刺激症状，且伴发低热、乏力、腰痛，临床疑为泌尿系感染者83例，其中男37例，女46例。试剂 用L型平板，改良Kagan培养基：蛋白胨20g、牛肉膏6g、氯化钠45g、琼脂10g、蒸馏
3、水800mL，加热溶解，调整pH至，/cm2 15min灭菌后冷至56，加入灭活人血浆200mL，混匀倾注平板。检验方法 嘱患者清洗外阴，取中段尿约5mL送检，2000r/min离心5min，倒掉上清液，将沉渣接种于血平板和L型平板各一个，血平板置37、5%(体积分数)CO2培养箱中培养，低倍显微镜观察。若在培养基上观察到油煎蛋或G型菌落时，即将培养物作直接涂片，革兰氏染色，细胞壁染色。有完整细胞壁的细菌胞浆不着色，周边呈紫色；细胞壁缺陷菌体的胞浆有不同程度的浓染，后者用L型平板传代，并用药物纸片扩散法(KB法)对10种常用抗生素的最低抑菌浓度进行分析。抗生素纸片包括丁胺卡那霉素、庆大霉素、诺
4、氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、头孢唑啉、头孢三嗪、头孢哌酮、红霉素、青霉素G。采用铜绿假单胞菌ATCC27853、金黄色葡萄球菌ATCC29212进行质控，结果判断参照美国临床标准委员会(NCCLS)标准进行。 2 结 果 泌尿系感染细菌L型分离鉴定结果 从83例泌尿系感染患者尿液中分离培养出细菌46例，检出率为%；其中细菌型11例，L型13例，细菌和L型混合存在22例，故泌尿系L型细菌感染率为%(35/83)(表1)。表1 35例L型细菌种类分布(株数)泌尿系感染细菌L型的药敏结果 分离出的L型细菌对丁胺卡那霉素、庆大霉素、诺氟沙星、环丙沙星、青霉素G等耐药率较高；对头孢唑啉、头孢三嗪、头孢哌
5、酮及红霉素等耐药率偏低，多数菌株敏感(表2)。3 讨 论 细菌、真菌、放线菌、螺旋体、立克次体和衣原体等病原微生物进入机体后，在抗生素、抗体、补体和溶菌酶等体内外因素的作用下可被诱导为L型。细菌成为L型后，由于细胞壁缺失使抗原结构变化，致使由细菌型诱导的体液或细胞免疫不能有效地作用于L型，逃避机体免疫系统的攻击，形成免疫耐受状态而在宿主体内存活，此时泌尿生殖道感染的症状可暂时缓解或消失。一旦阻止细胞壁合成的因素消除，如停止用药，其仍可返祖为原菌，重新对人体致病，引起临床症状。因此，细菌L型的存在是泌尿生殖道感染反复发作、迁延不愈的重要原因13。 细菌L型表面抗原成分丢失，使生化反应能力减弱，在
6、普通等渗培养基上生长不良或不生长，是泌尿系感染者细菌检出率低的主要原因。本文收集83例疑为泌尿系感染者的中段尿标本，用普通培养基和L型平板同时培养，结果细菌的检出率为%，其中L型的检出率为%。如不使用L型平板，其检出率仅为%。因此，临床上非常有必要对疑为泌尿系感染者进行L型细菌培养。本组35例患者尿液中分离出L型细菌，其中大肠杆菌13例，占%，居于首位。关于大肠杆菌对泌尿系的致病，以往文献报道其侵入尿道上皮可导致菌尿症，侵入膀胱或肾脏黏膜可引起细胞死亡，也可致膀胱炎或肾盂肾炎。表2 泌尿系感染L型细菌耐药结 抗生素的广泛应用是诱导细菌L型形成的重要因素，患者有可能开始仅为普通细菌感染，经抗生素
7、治疗后形成L型，导致细菌型和L型混合存在。如本组资料46例患者尿培养分离出细菌，其中细菌和L型混合存在者22例，占%。由于L型细菌的细胞壁存在不同程度的缺陷，其药物敏感性与原菌多存在差异，因此临床治疗用药，不仅要考虑原细菌的药敏，也要考虑L型的药敏。我们采用KB法对分离获得的L型菌株进行药敏试验，发现其对作用于细胞壁的头孢唑啉、头孢三嗪、头孢哌酮等以及作用于核酸和蛋白质合成的红霉素等较为敏感，而对抑制肽聚糖合成的青霉素、内酰胺抗生素等耐药性较高。有学者认为头孢菌素除可影响细胞壁的合成外，对细胞膜也有一定作用；也有学者认为头孢菌素对L型的内酰胺酶较为稳定，所以不易遭受破坏。 综上，临床对疑为泌尿
8、系感染者应同时采用普通培养基和高渗培养基分离细菌，并同时考虑二者的药物敏感情况，根据所分离到的细菌及L型药物敏感试验结果决定用药，可以联合使用作用于细胞壁和细胞质的抗生素，以达到杀菌并阻止其变为L型的目的。 【参考文献】 “1“陈梅，张启英，李杰，等. 泌尿系统感染细菌L型检查的临床意义 “J“. 蚌埠医学院学报, 1999, 24(4):281282. “2“苑广盈. 泌尿系感染患者细菌L型检查的临床意义 “J“. 中国实用内科杂志, 1996, 16(2):107.“3“苗迎秋，滕英霞，王辉，等. 细菌L型在泌尿系感染中的作用 “J“. 大连大学学报, 2002, 23(2):9597.“4“罗海波，张福森，何新生，等. 现代医学细菌学 “M“. 北京：人民卫生出版社, 1995:261266.“5“李力，刘海水. L型细菌的耐药性与医院感染 “J“. 上海医学检验杂志, 2001, 16(增刊):6061.
