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“敏筛”说明书.doc

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“敏筛”说明书.doc_第1页
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Instruction manual (说明书): AllergyScreen过敏原检测试剂盒1. 用途 AllergyScreen过敏原定量检测系统采用免疫印迹方法,定量检测人血清中过敏原特异性IgE抗体2. 概述 IgE免疫球蛋白发现始于1964年,它在I型变态反应发生机制中起重要作用免疫应答时B淋巴细胞分化成熟为浆细胞,并合成和分泌不同类型的抗体该过程由Th和Ts细胞调节,如果调节失控,通常不会造成损害的抗原也能激发免疫应答,刺激抗原特异性B细胞分化成熟为浆细胞,并产生IgE抗体, IgE抗体通过Fc段同嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面Fc受体结合当同一变应原再次进入机体,直接作用于IgE,并通过它的决定簇与IgE分子Fab段间的结合,形成IgE受体聚集成片,这些变化最终导致嗜碱性粒细胞和肥大细胞脱颗粒释放组胺等生物活性物质,从而产生如麻疹`荨麻疹、皮炎、关节炎,枯草热(过敏性鼻炎)`哮喘及过敏性休克等典型的I型变态反应症状3. 检测原理 特异性过敏原被吸附于硝酸纤维素膜表面,置于反应槽中用移液器加入病人血清,室温下孵育,标本中过敏原特异性的IgE抗体与过敏原发生反应,并连接在硝酸纤维素膜上。

将多余的抗体冲洗脱掉,再加入标记了生物素的抗人IgE抗体,室温下孵育,冲脱未结合上的抗抗体然后加入结合有碱性磷酸酶标记的链霉亲和素,室温下孵育,链霉亲和素和生物素结合将未结合上的酶标链霉亲和素冲洗干净当再加入BCIP/NBT酶作用底物并孵育后,碱性磷酸酶发生特定的酶显色反应,试剂条上出现沉淀颜色深浅与血清中sIgE抗体含量成正比待试剂条干燥后,CCD相机照相,读取检测结果4. 检测系统组成 每套检测系统包括:1×12 检测条:标记有20种过敏原的硝酸纤维素膜,置于塑料反应槽中(混合过敏原组,吸入组,食物组)1× 洗脱液:(TRIS/NaCl,包含0.1%NaN3)可稀释成1x500ml 的清洗液,pH=7.5 (20ml)1× 标记有生物素的 抗人IgE抗体(白盖,多抗 ),含 0.1%NaN3 1× 酶标链霉亲和素(红盖),连接有碱性磷酸酶的链霉亲和素1× 底物(蓝盖),BCIP/NBT12× 加样吸管(300微升)1× 使用说明书5. 未提供的实验所需的其他工具5.1 稀释液蒸馏水或去离子水5.2 其他搅拌器;量筒(500毫升),500毫升洗瓶,具10个不同板型的洗板机(也可无),避光的孵育箱(具体要求见MEDIWISS说明书);水平混匀器;电吹风(也可无);专用阅读仪(RAPID READER)和电脑(Windows98,Windows2000 ME或Windows2000 PROF 带USB接口)及打印机。

6. 注意事项 本系统用于检测人血清中sIgE,所有患者血清都可能有传染性,操作时应采取相关防范措施 由于抗抗体和洗脱液利用叠氮钠防腐,故应避免接触皮肤和粘膜还应避免与铜或铅的容器接触,以免发生爆炸 每次实验完毕,检测者应妥善处置各种废物 所有接触过具潜在传染性的标本的器具,必须经消毒处理或在120℃高温下处理一小时以上 不同批号的试剂组分不可互换使用包装损坏或出现漏液的试剂,不应再使用 7.储藏条件及有效期 检测条应置于阴凉,干燥,黑暗的塑料袋中于2-8℃下保存,在有效期内使用注意避免各种污染稀释过的洗脱液在2-8℃下至多保存八周 应避免底物受到链霉亲和素酶标物之污染而导致底物染色,结果错误此外,底物必须避免阳光照射,以防分解或自动氧化造成染色如果底物变色则不应再使用8.试剂稳定性 使用前若底物混浊变或呈紫色,说明试剂已变质,不能再使用9.标本采集和储存 本系统采用人血清为标本静脉采血待血清自然析出或离心(4000G/转)10分钟应避免使用反复冻融及被污染的标本使用经加热灭活,脂血,溶血,黄疸及脂浊的血标本会导致结果的不正确。

标本在2-8℃下保存一周若需保存更长时间,应置于-20℃以下储藏10.检测过程10.1 概述l 使用前所有试剂及反应槽都应先恢复到室温(20-22℃)试剂在使用前必须充分混匀结果的可重复性主要取决于准确的加样,严格地遵守孵育时间`温度和规范性地冲洗检测条通常底物显色反应时,温度每升高1℃,反应时间应相应减少30秒钟l 实验中应尽量避光,建议遮盖反应槽以避免蒸发损耗拿反应槽时应避免接触其表面,而握其手柄病人资料(如编号)可以贴在手柄上l 严格按说明书操作,否则孵育时间和温度的偏差会导致标本的结果错误l 底物孵育必须在暗箱中操作,以免底物自动显色l 严格按照检验室规程工作10.2 清洗液的制备 将洗脱液置于500ml的量筒内,加满蒸馏水,充分搅拌混匀,并转移到洗瓶中如果需要,可37℃水浴溶解洗脱液中的结晶10.3 初次孵育 将实验所需的检测条从包装内取出,用稀释过的洗脱液冲洗几秒钟,用加样器取250µl患者血清,注意每加一份血清就更换一个加样器头置于混匀器(120次振动/分钟)上室温(20-22℃)孵育45分钟10.4 冲洗 反应槽用洗脱液冲洗5秒钟,上下转动,使清洗液充分流过检测条。

轻轻晃动可以增强清洗效果如使用自动化洗板机此过程可简化10.5 二次孵育在每个反应槽中加入250µl的抗抗体,仍放在混匀器上室温孵育45分钟10.6 冲洗过程同10.410.7 第三次孵育加入250µl链霉亲和素酶标物,混匀器上室温孵育20分钟10.8 冲洗 过程同10.410.9 第四次孵育 加入250µl底物在反应槽内,混匀器上室温孵育20分钟后,流水冲洗试剂条,即发生酶变色反应空气干燥或用电吹风加快干燥,当蓝紫色的背景消失时说明试剂条已完全干燥,才能进行读数操作步骤总结:A. 系统恢复到室温(20-22℃)B .用蒸馏水 以1:25稀释洗脱液C. 用清洗液湿润硝酸纤维素膜,在检测板上加入250µl的血清标本,在混匀器(120振/分)上室温孵育45分钟D. 冲洗,手持反应槽上下翻转让清洗液充分流过,轻晃会增加效果E. 加入250ul抗抗体,在混匀器上室温孵育45分钟F. 冲洗(同D)G. 加250ul链霉亲和素标记物,在混匀器上室温孵育20分钟H. 冲洗(同D)I. 加入250ul底物,在混匀器上室温孵育20分钟J. 流水冲洗 终止底物酶反应K. 完全干燥后,专用阅读仪读数11. 分析11.1。

检测板组合 AllergyCreen Panel 1混合组过敏原检测条(Art.No.A001)包含以下20种过敏原:阳性对照,房尘螨1(屋尘螨), 房尘螨2(粉尘螨),桤木,桦木,榛木,杂草,黑麦,艾草,车前草,猫,马,狗毛发皮屑,交链孢霉菌,蛋白,牛奶,花生,榛果,胡萝卜,面粉,大豆 AllergyCreen Panel 2吸入组过敏原试剂条(Art.No.A002)包含以下20种过敏原:阳性对照,房尘螨1(屋尘螨),房尘螨2(粉尘螨),桤木,桦木,榛木,橡木,杂草,黑麦,艾草,车前草,猫,马,狗毛发皮屑,豚鼠,仓鼠,野兔,点青霉菌,芽枝霉菌,烟曲霉菌,交链孢霉菌AllergyCreen Panel 3食物组过敏原试剂条(Art.No.A003)包含以下20种过敏原:阳性对照,榛果,胡桃,杏仁,牛奶,蛋白,蛋黄,酪蛋白,土豆,鲟鱼,蟹肉,柑桔,苹果,面粉,黑麦面,蓖麻子,大豆阴性对照,未结合任何过敏原,位置在检测条最下方阳性对照,标记生物素的牛血清白蛋白,在每个检测条最上方11.2检测结果 本软件是由免疫印迹数字成像分析系统发展而来,通过CCD照相,软件评估条带颜色的深浅。

方法是通过计算显色条带的面积积分并与内标准曲线对比(以草花粉为标准),对之进行分级,分级与IgE的IU/ml浓度相对应,分析中曲线均经“平滑处理”,排除干扰 在测量后得到的结果报告单包括:检测条的相片和密度曲线,每种过敏原的分级和浓度数值(IU/ml)患者的数据都被保存在系统内,以备后查对于每种过敏原,试剂条上颜色的深浅同患者血清中的特异性IgE抗体含量成正比 将带检测条的反应槽插入专用阅读仪测量,连接计算机即可进行量化分析打印出定量结果,并分成0-6级,分级与浓度及含量间的换算关系可以查表Table111.3质控 每个检测板都设有阳性对照,用以质控如果阳性对照分类值<2.5,实验无效在这种情况下,请检查: 试剂是否过期 根据说明使用仪器 严格遵守实验步骤 正确在专用阅读仪内插入反应槽 观察试剂盒是否有污染,变质和泄漏 底物是否已发黑而不能继续使用 如果重复检测后,仍不能达到要求,请联系当地经销商11.4。

文件处理 在试剂条干燥和读取结果后,用镊子将它从反应槽移开并保存于文件夹内.实验数据(图像和量化分析结果)将被储存在计算机硬盘事先设定目录下.每个测试结果都能通过连接在计算机的打印机被打印出来.12.统计数据:重复性、敏感度、特异性和准确性. 重复性: 批内差:平均值6.2% 批间差:平均值3.1%. 为了确定灵敏度和特异性,临床对142例血清进行了与皮试的737样本的比较,结果为: 敏感度:95.1% 特异性:80.2% 准确性:88.3% 881样本与ELISA单项过敏原检测研究,结果为: 灵敏度:84.3% 特异性:95.0% 精准度:90.6%13.特异性IgE在临床诊断中的意义 过敏性疾病的诊断不能仅仅根据实验室检测结果,而应和即往病史及当前临床表现(体内和体外多种试验的结果)一起综合考虑 分级的测试结果可以用于判断患者对某一过敏原的过敏程度.测定血清特异性抗体与体内检测(如皮试)同样重要和可行. 需要强调的是,体外检测是唯一可频繁使用的确定I型变态反应敏感度的方法. 本系统以特定的过敏原条带显色,指示患者血清中有相关的IgE抗体,但这并不说明所有这些患者都会伴有相关的临床症状,因为他们可能只处于致敏状态,而尚未有相关临床表现。

制造商:德国MEDIWISS公司。

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