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1、最新考纲1微生物的分离与培养2某种微生物数量的测定3培养基对微生物的选择作用4利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用考纲解读1培养基的种类、营养要求及配制原则2无菌技术的具体操作及应用3运用相关技术解决微生物的分离与培养等实际问题知识点一微生物的培养议一议：高温灭菌的原理是什么？想一想：接种过程为什么要在酒精灯的火焰旁进行？查一查：什么是菌落？它有什么用途？知识点二微生物的利用 分解纤维素的微生物的分离纤维素分解菌的筛选想一想：什么叫选择培养基？看一看：纤维素分解菌筛选的原理是什么？1培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。
2、(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需pH不同。2培养基的营养构成(1)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐；(2)不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。3配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项(1)倒平板的适宜温度是50 左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固；(2)平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点适用范
3、围平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌小贴士自我校对：营养物质生长繁殖水碳源氮源无机盐特殊营养物质氧气温和有害的微生物芽孢孢子煮沸消毒法巴氏消毒法所有的微生物灼烧干热高压蒸汽接种环、涂布器平板划线稀释涂布平板酒精灯火焰固体斜面菌落4 不长污染甘油管藏20 选择培养基尿素稀释涂布平板法显微镜直接计数M被测试的条件非测试因素纤维素CMCNa微生物倒平板发酵产纤维素酶葡萄糖议一议：高温可以使菌体细胞内的蛋白质、核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。想一想：因为这里是
4、一个无菌区，可以避免杂菌污染。查一查：菌落是单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。不同细菌的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面的特征不同，它可以作为鉴别菌种的重要依据。想一想：选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。目的是培养、分离出特定微生物。看一看：刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，从而使菌落周围形成透明圈。,微生物的培养与应用1微生物的实验室培养(1)培养基概念：人们
5、按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。分类和应用划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类、鉴定固体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐)鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养
6、基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)培养基配方及营养要素基本营养要素：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。营养要素来源功能碳源无机氮源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物构成细胞中的物质和一些代谢产物；既是碳源又是能源有机碳源糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等氮源无机氮源无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等将无机氮合成含氮的代谢产物有机碳源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产
7、物生长因子维生素、氨基酸、碱基酶和核酸的组成成分；参与代谢过程中的酶促反应提醒微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素，作为特殊营养物质。制备：计算称量溶化灭菌倒平板。(2)微生物培养的无菌技术进行无菌操作主要是为了防止外来杂菌的入侵，重点是消毒和灭菌。消毒和灭菌的区别使用方法结 果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒
8、法、紫外线消毒法等灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌三种常用灭菌方法的比较灭菌方法适用材料或用具灭菌条件灭菌时间灼烧灭菌接种环、接种针或其他金属工具酒精灯火焰的充分燃烧层直至烧红干热灭菌玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等干热灭菌箱内，160 170 1 h2 h高压蒸汽灭菌培养基等高压蒸汽灭菌锅内100 kPa，121 15 min30 min2.微生物的纯化培养及菌种的保藏(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。(2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。方法平板划线法稀释涂布
9、平板法注意事项(1)接种环的灼烧第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者(2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连(4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破(1)稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1 cm2 cm处(2)涂布平板时涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃不要将过热的涂布器
10、放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体目的在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体菌落培养平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染本考点内容常以环境污染为背景考查微生物的生存条件及分离、纯化和培养条件等，复习中引起关注。【典例1】(2011新课标全国)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。请回答下面的问题。(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)纯化菌
11、种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。解析(1)欲筛选出能降解原油的菌株，则培养基中应只含有原油而无其他碳源，不能降解原油的细菌则在此培养基上不能生存，这类培养基为选择培养基。(2)分离纯化菌种时，接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落，以便于纯化菌种。(3)降解原油能力越强
12、的菌株，在菌落周围形成的分解圈就越大。答案(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰知识拓展(1)高温加热灭菌，其原理就是使细菌体内蛋白质变性，而达到杀灭细菌的作用。(2)化学药剂的灭菌消毒方法，其作用原理是使细菌体内蛋白质变性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。(3)体积分数为70%的乙醇杀菌效果最强。浓度过低，杀菌力弱；浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，杀菌效果受影响。对刚洗刷后未干的器皿，则可选择75%的酒精进行消毒。【训练1】(2007江苏生物，22)不同的微生物
13、对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是()。A氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水是该微生物的营养要素之一解析以CO2为唯一碳源可知该微生物为自养型微生物，可以利用CO2合成有机物，该无机碳源不能为微生物提供能量，其能源来自于光能或分解有机物释放出的化学能。答案B【训练2】如右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列操作方法正确的是()。A操作前要将接种环放在火焰旁灭菌B划线操作须在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在1、2、3、4、5区域中划
14、线前后都要对接种环灭菌解析在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰旁进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。答案D,特定微生物的数量的测定1测定微生物数量的方法(1)直接计数法：常用的是显微镜直接计数法。(2)间接计数法：常用的是稀释平板计数法。2测定微生物数量方法的实际应用(1)土壤中好氧型细菌的计数制备土壤稀释液：取土壤表层35 cm处的土样；制备系列稀释液。取样及倒平板：该实验的接种方法是稀释涂布平板法。培养。观察记录结果：每克土壤样品菌数某稀释倍数的菌落平均数。(2)检测天然水源中细菌总数和大肠杆菌菌落数细菌总数通常是指1 g或1 mL检测样品中所含细菌菌落的总数。大肠杆菌菌落数通常是指每100 g或100 mL检测样品中所含细菌的实际数值。(3)检测某种食品中的细菌总数和大肠杆菌菌落数一般说来，大肠杆菌菌落总数越多，说明食品的卫生质量越差。(4)土壤中分解尿素细菌的计数
