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1、HE 染色1烤片机60-70C，烤片20min2. 脱蜡至水。二甲苯I、II、III每缸10min,梯度酒精（无水、无水、90%、80%）每缸 5min， tap water or dH2O 流水冲洗，擦净玻片。3苏木素滴染5-10min, tap water or dH2O流水冲洗。4. 浸入95%酒精30-60S后取出勿擦，滴染伊红3-5min。5. 脱水。 75%酒精-90%酒精-95%酒精-无水酒精-无水酒精依次涮一涮，最后一个无水酒精3min。二甲苯I、II每缸5min6. 封片。待残余二甲苯挥发，中性树胶封片。分析方法：1拍照。40x物镜下选取含有圆形或近似圆形细胞的视野拍照，拍照
2、张数依组织 大小和HE染色结果而定，但应确保含有足够的细胞数。2定标。在同一显微镜下拍测微尺，算得40x物镜下90 pixels=10um。打开 Image JOpenAnalySeSet ScaleSet MeaSurementFreehand selections一圈目标细胞一 Analyse一Measure一AnalyseLabel一保存带标记 的图片。3. 测量。选择含有细胞核的、圆形或近似圆形的细胞，用Image J测量细胞大小。 每块组织至少选取60个细胞。最后求Area的平均值。S-el ScaleClickto kemove Scale IP Global” Set Measu
3、rements17 Area厂:Mean gray valuej厂 Standard deviation厂 Modal gravcilueI- Min A max gray value厂 CentroidF Center uf massPerimislcr厂 BDundllng re dangle厂 FitQlliA厂 Shape descriptors厂 Ferets diameterI- Integrated!densih厂 MedanF SkewnessP Kurt旳isAreafradionr Slack position Limit to thresh a Id厂 invert Y
4、coordinates厂 AdU io dwb刖厂 Display label 厂 Sdentmcno-laflonScale: 9 pi?eIs/umOK 0测臨1 | H邯|Redirect to:Decimal places (0-9):NoneFile Edit Image Process Analyze Plugins Window Help口 Qm小1小|如口|七 1Freehand selectionsMasson 染色1烤片机60-70C，烤片20min2. 脱蜡至水。二甲苯I、II、III每缸10min,梯度酒精（无水、无水、90%、80%）每缸 5min， tap wate
5、r or dH2O 流水冲洗。3. Bouin液固定。用事先60C预热15min的Bouin液固定1h, dH2O冲洗5min。 4含铁苏木素A、B各20ml （等体积混合），5min，dH2O冲洗5min，再用去离 子水冲洗数次。5滴染碱性品红5min，去离子水冲洗数次。6.Mix磷钨酸10ml、磷钼酸10ml、去离子水20ml，5min。切勿冲洗。7滴染苯胺蓝5min，去离子水冲洗数次。8脱水。75%酒精-90%酒精-95%酒精-无水酒精-无水酒精依次涮一涮，最后一个 无水酒精3min。二甲苯I、II每缸5min。9.封片。待残余二甲苯挥发，中性树胶封片。分析方法：1拍照。20x物镜下地毯
6、式拍照，使照片全部覆盖组织块。2.测量 Area%。打开 Image JOpenAnalyseSet MeasurementsImage TypeRGB StackImageAdjustThreshold参考原始图片调节第二条使 蓝染部分充分显现 AnalyseMeasure。3所有照片测量完毕后，求Area%的平均值。拍照和分析同一人完成，确保所有 照片背景色相同，减小测量误差。Set MeaELiremeitsn17 Area厂 Standard deviation厂 Min A max gray value 厂 Center of mass厂迪亜亟回厂 Medal gray value厂
7、 CentroidI Pen meter厂 Boondling厂 Shape descriphrs厂 Integrated densityL Skewness厂 Ht ellipse厂 Ferefs diarneter-Median厂 KurtosisI* .iVeafradlan厂 stact posrticnThreshold Li mil 1a threshold厂 Invert coordnales厂 Display labelL Saemmcnotaticn厂.Add 1c cwerlayRedirect to:NoneDecimal places (0-9):OKCanrelHelp（注：举例图片为HE染色）
