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1、、实验环境观察仪器是否有外表明显损坏，如需开启空调，一般控制在25 度。拉上窗帘，避免标本荧光淬灭及杂光干扰。二、开机查看实验记录，确认是否马上能开机（注意：汞灯必须在关机20 分钟以后才能再开启一般为30 分钟）。确认后可执行以下操作：（务必先开电源，后开钥匙！）。1、打开PSU （主电源）2、打开激光器（只开启需使用的激光器）1）、 氩离子多线 激光器（ 458/488/5 15 ，应用染料GFP/FITC/Fluo3/Alexa488/CFP/YFP 等）。2）MCPSU 半 导 体 综 合 激 光 器 （ LD405 应 用 染 料DAPI/Hoechst/BFP 等；D635 应用染
2、料:CY5/Alexa647 等）。3）LD559 激光器（注意：电源打开后不要马上开钥匙，等待TEMP 指示灯不闪烁后，再开钥匙，红色指示灯不闪烁后， 可正常使用）。3、打开显微镜电源IX2-UCB4、打开荧光汞灯（注意：开启后，“15 分钟内勿关”）,双击共聚焦软件,打开FV10-ASW应用5、打 开 电 脑 主 机 、 显 示 器 ， 登 陆 windows xp 系 统User ID: AdministratorPassword: fluo唯wUserID:AdministratorPassword： .besb三、取图1、 DIC （微分干涉差）明场立体图（1）、插入起偏镜、检偏镜（
3、DIC滑块）。（2）、FV10-ASW软件中点击透射光观察按钮羸，打开卤素灯快门，使用 TD 滑块（软件 TD lamp 项）控制卤素灯的光强，倒置显微镜下观察标本，进行标本聚焦。1）、使用手控面板选择合适倍率的物镜下观察 （注意若用60X油镜时，检偏镜部位要推上弯杆），并检查各物镜对应的DIC元件。2）、可在检偏镜部位用旋钮进行对比度的调节。（需要时 可使用，一般勿调）（3）、FV1O-ASW软件中点击透射光观察按钮 *1 ,关闭卤素灯快门。打开DIC通道，执行取图操作。1）、调节扫描速度至最快（2.0us/pixel）, size为512by，点击卩鈿，进行快速预扫，寻找焦平面。/coin
4、Jj调节预扫描。寻找焦平面，如需放大光学倍数，可适当调节1 。点击2）、选择AutoHV,放慢扫描速度（扫描速度越慢，扫描时间越长，图像信噪比好，但耗时，易淬灭，一般为10-12.5 us/pixel）, size为640by,点击計曲阳进行再预扫,调节HV、gain及offset参数至图象清晰尖锐即可。点击Filrei Mode3）、若背景噪音仍过多也可选上来降低随机噪音干扰（次数越多降噪越好，但扫描时间也越长，一般在HV较高时使用）。4）、点击X意进行取图，并保存。（注意：原始图像一定要保存为oib格式）Filrer Mode5） 、去掉，将扫描速度、size恢复至初始状态（扫描速度至最快
5、， 即最左端，2.0us/pixel， size为512by），为下一个标本做好准备。2、荧光图（1）、拉出检偏镜（DIC滑块），打开汞灯机械快门（shutter）。（2）、FV10-ASW软件中点击汞灯观察按钮了，打开汞灯快门，倒置显微镜下观察标 本，进行标本聚焦（找视野）。使用手控面板，根据标本荧光探针选择合适的荧光虑色片及选择合适的物镜下观 察, WU紫外激发/蓝色荧光（eg： DAPI），WB蓝色激发/绿色荧光（eg： FITC、EGFP）, WG 绿色激发/红色荧光（eg:Texas Red, Rhodamine，DsRed）。（一般要求标本在所用的各种荧光探 针匹配的荧光虑色片下均
6、能观察到所需视野，eg： DAPI + FITC+ Texas Red多色荧光探针，需 在WU,WB,WG下均能观察到所需视野，DAPI 一般荧光较强，FITC或Texas Red下易找些）。（注意：更换不同倍数物镜时应适当降低物镜再更换，以免损坏物镜；若用60X油镜时，要插入检偏镜并推上弯杆。）（3）、FV10-ASW软件中点击汞光观察按钮咅，关闭汞灯快门。执行取图操作。1）、点击，添加荧光染料。（最多为三色，多于三色需分别扫描）若标本使用的荧光染料不是染料库里的染料，可选激发光及发射光谱较接近的染料代替，这时可适当调整2）、调节扫描速度至最快（2.0us/pixel）, size为512b
7、y,点击浙血卩刚，进行快速预扫，寻找焦平面。WU ChlBl IHT霍州 ri253步骤：适当调节HV、gain及offset参数1-1 d（一般为能看到各通道图像即可）,停止预扫描。如需放大光学倍数，可适当调节。点击汕,:L3）、选上bNi-（双染以上一定要选上，可避免激发光串色），选择AutoHV（AutoHV功能为自动匹配扫描速度与HV值,不选易造成图像出现强度过饱和状态）,，停止预扫描。放慢扫描速度（一般为10-12.5 us/pixel），size为640by,点击灯仙诃进行再预扫，调节HV、 gain及offset参数至图象清晰尖锐即可。点击Fit剽 Mode4）、若背景噪音仍过多
8、也可选上h山mm来降低随机噪音干扰（次数越多降噪越好，但扫描时间也越长，一般在HV较高时使用）。5）、点击进行取图，保存及相关图像处理。（注意：原始图像定要保存为oib 格式）HKer Mode6）、去掉1 K占，将扫描速度、size恢复至初始状态（扫描速度至最快，即 最左端，2.0us/pixel, size为512by）,为下一个标本做好取图准备。四、刻录数据图像保存后，退出FV10-ASW软件，刻录数据（注意：必须用新的光盘，严禁使用U盘、移 到硬盘等）。五、关机务必先关钥匙后关电源！1、关闭荧光汞灯（注意：开启后，“15 分钟内勿关”）2、关闭激光器1）、关闭LD559激光器2）、关闭 MCPSU 半导体综合激光器3）、氩离子多线激光器（注意：先关钥匙，千万别马上关闭电源，要等风扇停止转动后 再关闭电源）3、使用擦镜纸沾擦显微镜物镜（注意：一般物镜清洗液为乙醇，擦镜纸为普通擦镜纸； 油镜清洗液为30%乙醇/70%乙醚，擦镜纸为Olympus公司的擦镜纸。），并把物镜降低到最 低点。4、关闭 shutter5、关闭显微镜电源IX2-UCB6、等待仪器冷却后（尤其光源部分：汞灯、卤素灯、激光），盖上防尘罩（注意：激光 散热风扇较热，不宜盖住）
