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1、一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine ):溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20C。1mol/L精胺(Spermine ):溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。 分装成小份贮存于-20C。10mol/L乙酸胺(ammonium acetate ):将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定 容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA ):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学 试剂级，无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白)，盖好盖后，轻轻摇
2、动，直至牛血清 蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于 -20C。1mol/L二硫苏糖醇(DTT ):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成 小份贮存于-20C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassium acetate ):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水 定容到 100ml。1mol/L氯化钾(KCl ):溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠(sodium acetate ):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml
3、水中， 用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L )，混合后 形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH ,并 溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES 将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中 用 NaOH 调 p( 6.8-8.2 ), 然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl :加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IPGT (异丙基硫代书-D-半乳糖苷)于10ml水 中，分成
4、小份贮存于-209。1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCI2 6H2O 于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF (苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中， 定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-209。20mg/ml蛋白酶K ( proteinase K ):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中， 轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分 装成小份贮存于-209。10mg/mlRnase （无 DNase ）（ DNase - free RNase ）:溶解 10mg 的胰蛋白RNA酶
5、于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0 ）。溶解后于水浴中煮 沸15min ,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris - HCl调pH至7.5，于-20C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl ）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH ）:溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力 搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10%SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧 杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbito
6、l ）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体 积为 100ml。100%三氯乙酸（TCA :在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅 拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5% X - gal （ 5-溴-4-氯-3-吲哚-B-半乳糖苷）：溶解25mg的X - gal于1ml 的二甲基甲酰胺（DMF ），用铝箔包裹装液管，贮存于-20C。100xDenhardt 试剂(Denhardts regent)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll, 400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2g2%BSA （组分 V） 水2g2g加水
7、至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-209贮 存。10x标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接)成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用里0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选） 水5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 0.5ml
8、10 mg/mL 贮液 2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-209 。100 mmol/L dNTP 溶液( dNTP solutions)可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-809可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20PEG
9、8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二 醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml 5 mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml ,用磁力搅拌器搅拌溶解。20xSSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二 水）3mol/L氯化钠水88.2g 175.3g 补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调 pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于100ml水中，使DE
10、PC的体积分数为0.1%。在37C温浴至少12h然后在15 psi条件下高压灭菌20min以使残余的DEPC失活DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺(deionized formamide)直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器 轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分 成小份，充氮气于-809贮存(防止氧化)。磷酸缓冲液( phosphate buffer)按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L磷酸氢 二钠(双碱)贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 m
11、ol/L的磷酸二氢钠 (NaH2PO4H2O )贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸 氢二钠(Na2HPO4 )贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。lmol/L磷酸二氢钠(ml)lmol/L磷酸氢二钠(ml)最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE (用于悬浮和贮存DNA)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCllmmol
12、/L EDTA水1ml lmol/L Tris-HCl (pH7.4-8.0, 25C)200ul 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 98.8mlTris 缓冲液（Tris-HCI buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25C下）加一定量的浓盐酸（ 11.6N） ，用水调整终体积至 1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2卞二电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50xTris-乙酸（TAE ）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2m
13、ol/L Tris 碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA 水242g57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH8.0 )补足1L5xTris-硼酸(TBE )缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L硼酸盐10 mmol/L EDTA 水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH8.0 )补足1L染料1 溴酚蓝( bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 二甲苯青 FF(
14、xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙锭( ethidium bromide )小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于49贮存。凝胶上样液（gel loading sOlu tions6x碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用里0.3 N氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖（400型）0.15%溴甲酚绿0.25% 一甲苯青FF 水300ul 10N氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)1.8g15mg25mg 补足到10ml6x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用里0.15%溴酚蓝0.15%一甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖（400型）水1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1 %一甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)1.5g 补足到10ml6x溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用里0.25 %溴酚蓝0.25% 一甲苯青FF15%聚蔗糖（400型） 水2.5ml 1%溴酚蓝2.5ml 1 %一甲苯青 FF1.5g补足到10ml6x甘油凝
