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1、学兔兔标准下载0ICS67.50CCSX04中华人民共和国出入境检验检疫行业标准7SN/T5655.2023商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法第7部分:扁桃仁ittCommercalkitesmehodImmunoassayoffoodalergensinprepackagedfoodstAPar7:lmonds-20231101发布20240501实施中华人民共和国海关总署发布学标准兔兔下载学兔兔标准下载7SN/T5655.2023前言本文件按照GB/T1.2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件为SN/T5655商品化试剂盒检测方法预包装食品
2、致敏原免疫分析法的第7部分。SN/T5655已经发布了以下部分:第1部分:麸质;第2部分:甲壳纲类动物;第3部分:蛋类;第4部分:花生;第5部分:大豆;第6部分:乳;第7部分:扁桃仁;第8部分:腰果;第9部分:榛子;第10部分:巴西坚果;第11部分:夏威夷果;第12部分:开心果;第13部分:胡桃。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国上海海关。本文件主要起草人:王赢、刘津、樊彦莉、刘静宇、梁颖婕、董洁。学标准兔兔下载学兔兔标准下载7SN/T5655.2023引言食
3、品致敏原是普通食品中正常存在的天然或人工添加物质,被过敏体质人群消耗后能够诱发过敏反应。SN/T5655商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法规定了预包装食品中致敏原成分的酶联免疫吸附定量检测和胶体金免疫层析定性检测方法,旨在满足预包装食品致敏原标识、生产质控和食品安全检验监管的检测需求。SN/T5655商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法拟由下列13个部分构成。第1部分:麸质。第2部分:甲壳纲类动物。第3部分:蛋类。第4部分:花生。第5部分:大豆。第6部分:乳。第7部分:扁桃仁。第8部分:腰果。第9部分:榛子。第10部分:巴西坚果。第11部分:夏威夷果。第12部分:开心果。
4、第13部分:胡桃。学标准兔兔下载学兔兔标准下载7SN/T5655.2023商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法第7部分:扁桃仁1范围本文件规定了预包装食品中扁桃仁的酶联免疫吸附和胶体金免疫层析测定方法。第一法酶联免疫吸附法适用于预包装食品中扁桃仁致敏原成分的定量检测。第二法胶体金免疫层析法适用于预包装食品中扁桃仁致敏原的定性检测,也适用于预包装食品生产过程中为监控扁桃仁致敏原目的对生产原料和环境采样的定性检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有
5、的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法liiiiiiiiitiAOACGuideinesforColaboratveStudyProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyss.AppendixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISAmethods:com-muniyguidanceandbestpractces3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。13.扁桃仁almondsRP(蔷薇科(osaceae)李亚科(runoideae)桃属AmygdalusL
6、.)植物的果实的核仁。注:又称为巴旦木或美国大杏仁。23.-iE酶联免疫吸附测定enzymelnkedimmunosorbentassay;LISA可溶性抗原或抗体结合到微孔板等固相载体上,基于免疫反应和酶催化显色的一种定性或定量检测方法。33.G胶体金免疫层析coloidalgoldimmunochromatographyassay;ICA以胶体金作为示踪标志物的一种免疫层析检测技术。注:通常为试纸条形式。1学兔兔标准下载7SN/T5655.2023第一法酶联免疫吸附法4原理利用抗原-抗体特异性结合反应,对样品中扁桃仁致敏原含量进行酶联免疫吸附测定。样品中游离的扁桃仁蛋白被微孔中预先包被的扁
7、桃仁特异性抗体捕获,形成抗原-抗体复合物。加入过氧化物酶标记抗体后,形成酶标记抗体-抗原-抗体夹心复合物,其他物质在洗涤步骤被除去。加入底物/发色剂呈显色反应。通过测定450nm波长下吸光度值得出样品中扁桃仁致敏原含量。样品中扁桃仁致敏原含量与吸光度值成正比。5试剂和材料除特别说明外,实验用水应符合GB/T6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。1liiiiiiiiiti5.扁桃仁致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒:试剂盒按照AOACGuideinesforColaboratveStudyProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppen
8、dixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISAmethods:communiyguidanceandbestpractces进行评价,评价结果见附录A。注:试剂盒详细信息见附录B。25.脱脂奶粉(不含扁桃仁致敏原)。13145.1洗涤缓冲液:按照110比例稀释试剂盒中10洗涤缓冲液浓缩液见B.c),稀释后的1洗涤缓冲液可贮于28条件下保存4周。1条微孔板需约15mL1洗涤缓冲液洗涤。5.1致敏原提取缓冲液:按照110比例稀释试剂盒中10致敏原提取缓冲液浓缩液见B.d),稀释后的1致敏原提取缓冲液可贮于28条件下保存12周;稀释前,若10
9、致敏原提取缓冲液浓缩液中有结晶,则先将其置37水浴中温育并摇动混匀,直至结晶完全消失。155.1酶标记物:用水按照111比例稀释11酶标记物浓缩液见B.b)。每次检测前根据当次检测需求量即用即配。稀释后的1酶标记物应当次用完,不应长期保存。如移取100L11酶标记物浓缩液到1mL水中稀释混匀,足够1条微孔反应用。6仪器和设备1236.酶标仪:具450nm波长。6.分析天平:感量0.1g。6.涡旋混匀仪。45366.冷冻离心机:转速4000r/min,温度4。6.水浴锅:7,0。621736.单道移液器:0L200L,00L1000L。6.八道移液器:0L300L。2兔兔学标准下载m20fV(1
10、)7SN/T5655.20237分析步骤17.样品处理110(7.普通样品:针对固体样品,对不少于50g样品进行均质,称取1.0g均质样品到50mL离心管中,加入20mL预热至60的1致敏原提取缓冲液5.4)。针对液体样品,对不少于50mL样品进行均质,吸取1mL均质样品到50mL离心管中,加入19mL预热至60的1致敏原提取缓冲液(35.4)。按照7.2.进行下一步提取。1200(1317.调味料、雪葩冰糕、可可类样品:对不少于50g样品进行均质,称取1.0g均质样品到50mL离心管中,加入1.0g脱脂奶粉5.2)。再加入20mL预热至60的1致敏原提取缓冲液5.4)。7.将经过7.2.或7
11、.2.处理的样品,涡旋混匀,置于60水浴中孵育10min后,用冰水快速冷4却,下4000r/min离心10min,取上清液进行检测。至此稀释倍数为20倍。27.测定21127.将预包被有扁桃仁致敏原特异性抗体的微孔板见B.a)插入微孔板架,并做好标记,标准品和样品均设置双平行。宜一次检测不要超过3条微孔板条(4个板孔),以避免过大的孔间时间差造成对定量结果的影响。2212(2(12117.平行加入100L标准品15见B.e)i)和样品至微孔中,室温(025)孵育10min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔加入250L1洗涤缓冲液5.3),进行洗涤后,在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗涤结束后,每个微孔加入100L1酶标记物5.5),室温(025)孵育10min。孵育结束后,倒去微孔中
