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1、实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件一、实验目的1、掌握分光光度计的原理、构造和使用方法。2、学习分光光度计分析中如何确定最佳实验条件。二、实验原理在可见光区分光光度法测量中，通常是将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。显色反应的程度受显色剂用量、显色时间，显色液酸度等条件的影响，通过实验，确定合适的显色条件。三、仪器及试剂分光光度计；1cm 吸收池； 10mL移液管； 25mL 容量瓶 ,100ml 容量瓶1铁标准溶液100gmL -1（即 0.01 mg mL-1 ）铁标准溶液：准确称取0.3511g（ NH 4）2 Fe（ SO4 ）26H
2、 2O于烧杯中，用 2 mol L-l 盐酸 15 mL 溶解，移入500 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。用前，准确稀释 10 倍成为含铁 10 ug mL -1标准溶液。2. 1g.L -1 邻二氮菲： 1.0 g 邻二氮菲于小烧杯中，加入5-10ml 95% 乙醇溶液溶解，再用水稀释到 1000 mL 。3. 10盐酸羟胺水溶液： 10水溶液（现用现配，避光保存）4. 醋酸钠溶液 1mol/L5. 0.8 mol/L 氢氧化钠溶液四、实验步骤1、吸收曲线的制作和测量波长的选择用移液管吸取0.0ml、 2.0mL 10 ug mL -1 标准溶液，分别注入二个25 mL 容量瓶中，加
3、入 1.0mL10% 的盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min ；再加 2 mL 邻二氮菲溶液， 2.5mL 醋酸钠溶液溶液，用水稀释至刻度，摇匀。放置5min 后，用 1cm 比色皿，以试剂空白为参比，在440560nm 之间，每隔 10nm 测一次吸光度，其中在500-520 nm 之间，每隔 5nm 测一次吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。2、显色剂用量影响在 7 只 25mL容量瓶中，各加 2.0 mL 10 ugmL -1铁标准溶液和1.0 mL 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置 2 min 。分别加入0.1、 0.25、 0.5、1.0、 2.0、
4、3.0 、 4.0ml1g.L-1 邻二氮菲溶液，再各加2.5mL 1mol/L 醋酸钠缓冲溶液 ，以水稀释至刻度，摇匀。放置5min 后，以水为参比，在 510nm 测量各溶液的吸光度。其中，加 2.0 mL 1g.L-1 邻二氮菲溶液的显色溶液不要倒掉，用于时间影响的测定。3、显示时间的影响取上述 1 中加 2.0 mL1g.L -1邻二氮菲溶液的容量瓶， 在显色时间为 10min 、20min 、30min 、40min 、 50min 、60min 分别测定吸光度值。4、溶液酸度的影响在 7 只 25mL容量瓶中，各加入2.0 mL 10 ug mL -1 铁标准溶液和 1.0 mL
5、盐酸羟胺溶液，摇匀后放置 2 min ，再各分2.0ml 邻二氮菲溶液， 摇匀。然后，分别用移液管准确吸取加人0.8 mol L-1氢氧化钠溶液 0.0 、0.5、 1.0 ， 2.0， 3.0 ， 4.0 、5.0ml 于容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，放置 10min 。用精密 pH 试纸测定上述溶液pH值，同时在分光光度计上，波长为510 nm，以水为参比测定各溶液的吸光度。五、数据记录1. 最大吸收波长的确定波长 nm440450460470480490500505510515520530540550560吸光度A2、显色剂用量的影响显色剂用量 ml0.10.250.51.02.03.
6、04.0吸光度 A3、显色时间的影响显色时间吸光度 Amin1020304050604、溶液酸度的影响溶液 pH吸光度 A六、结果讨论与思考1. 分别以波长、显色剂体积、显色时间、溶液pH 为横坐标、相应的吸光度为纵坐标，绘制曲线，确定最大吸收波长、合适的显色剂用量、显色时间、溶液pH 是多少？2分光测定中比色皿盛放溶液的体积为多少，用手拿比色皿时应注意什么？实验二邻二氮菲分光光度法测定微量铁的浓度一、实验目的1掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法2了解分光光度计的构造、性能及使用方法二、实验原理邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2 9 的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定
7、的橙红色配合物。配合物的lg K 稳 21.3，摩尔吸光系数 510 11000 L mol-1cm-1。在显色前，用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子。4Fe3+2NH 2OH4Fe2+ N2O 4H H2O测定时，控制溶液pH 5 较为适宜，酸度高时，反应进行较慢，酸度太低，则二价铁离子水解，影响显色。用邻二氮菲测定时，有很多元素干扰测定，须预先进行掩蔽或分离，如钴、镍、铜、铅与试剂形成有色配合物；钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀，还有些金属离子如锡、铅、铋则在邻二氮菲铁配合物形成的pH 范围内发生水解；因此当这些离子共存时，应注意消除它们的干扰作用。三、仪器与试剂-1醋酸钠、 10%盐酸羟
8、胺、 0.1%邻二氮菲溶液、 10gmL-1铁标准溶l mol L液、分光光度计等。四、实验步骤1、 标准曲线的绘制取 25 mL 容量瓶 6 个，分别准确吸取的 10 gmL -l铁标准溶液 0.0，1.0，2.0，3.0，4.0 和 5.0mL 于各容量瓶中，各加 10盐酸羟胺溶 l mL ，摇匀，2 min 后再各加醋酸钠溶液2.5 mL 和 0.1邻二氮菲溶液 2 mL，以水稀释至刻度，摇匀。 10min 以后，在分光光度计上用l cm 比色皿，在最大吸收波长 510 nm 处以试剂空白为参比测定各溶液的吸光度。记录实验数据。（2）吸取未知液 5 mL ，按上述与标准曲线相同条件和步骤
9、测定其吸光度。做 3 个平行，记录实验数据。五、数据记录与处理1以铁浓度为横坐标， 吸光度为纵坐标， 用 EXCEL 绘制标准曲线、线性方程、相关系数。2计算未知液 3 份平行样的铁浓度和平均浓度（gL-1）。六、思考1. 在实验中盐酸羟胺和邻二氮菲的作用分别是什么？2、实验中试剂空白的作用是什么？3、简述可见光分光光度计的操作步骤。实验三土壤中水溶性盐的提取及原子吸收光谱法测定土壤中水溶性镁一、实验目的1. 了解土壤中水溶性盐的提取方法2. 了解和掌握原子吸收光谱法的原理、结构及操作方法。二、实验原理含金属离子的试液被雾化后并进入乙炔空气火焰时，金属离子被原子化，产生基态原子蒸气。 该蒸气能
10、吸收相应金属元素空心阴极灯发射出来的共振发射线的辐射能，其吸收情况服从比尔定律。样品测得的吸光度，根据标准溶液计算的标准曲线计算相应的浓度。一、仪器与试剂原子吸收光谱仪 AA-7000 、10ug/mL 镁标液、 SrCl2 溶液、去离子水二、 实验步骤1、 土壤水溶性盐的提取称取 20.0g 过 1mm 筛的土壤，加去离子水 100ml ，在振荡机上振荡 3 分钟，或用手摇荡 3min，然后过滤。2、 镁标准溶液的配置分别取 0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0ml 的镁标液于 6 个 25ml 容量瓶中，加 1ml SrCl2 溶液，用去离子水定容至刻度，摇匀待测。3、样品溶液的配
11、置分别取滤液 0.5ml 于 3 个容量瓶中， 加 1ml SrCl2 溶液，用去离子水定容至刻度，摇匀待测。三、原子光谱仪测定AA-7000 测定步骤见附件。四、结果计算1、 标准溶液与吸光度标准溶液体积 ml0.250.50.751.01.25浓度 ug/ml吸光度根据测定结果计算标准曲线和相关系数。2、根据测定结果计算土壤提取液中镁的平均浓度、土壤中水溶性镁的百分含量。六、思考题1、简述原子吸收光谱仪的构成与工作原理。2、如果测水溶性钙，能不能用镁元素的空心阴极灯作光源？附 :SHIMADZUAA-7000 原子吸收操作步骤（一）火焰连续法一、开机顺序： 打开电脑； 打开 AA-7000
12、 主机电源 ； 启动 WizAArd 软件，选择“操作”，点击“测量”； 在 ID 栏输入“Admin”，登陆系统； 弹出“向导选择”对话框，点击“取消” ，进入下一步。二、仪器初始化在“仪器”下拉式菜单中，点击“连接”，仪器进入初始化状态。弹出“气体调节”页面时，根据提示，打开通风设备，乙炔钢瓶主阀（逆时针旋转 1 圈为宜）和空压机开关。 （乙炔气体分压要求为0.08-0.10 MPa ，空气压力要求为 0.35 MPa ）检测完成后，点击“确定” 。弹出“火焰分析日常监测项目” 页面时，请对每个项目一一进行检查并勾选，点击“确定”。等待漏气检测结束，若不存在漏气现象，点击“确定”，完成初始
13、化。三、设置参数在“参数”下拉式菜单中，选择“元素选择向导”，进行元素选择。 选择“火焰连续法”、“普通灯”，单击“下一步”； 输入元素灯位；点击“谱线搜素”； 谱线搜素完成后，点击“关闭” 。 校准曲线设置：输入“浓度单位”，编辑“校准曲线测量次序” 。 样品组设置：输入“浓度单位” 、“样品数量”，点击“更新”；在样品 ID 栏输入样品名称或编号，点击“下一步” 。 点击“连接 / 发送参数”，完成参数设置。四、点火同时按下PURGE和 IGNITE两键，直至火焰点燃，松开。五、测量步骤 校零：把进样吸管放入去离子水中，雾化1min，点击页面底部的AutoZero 。 测量标准样品： 吸入溶液，待信号稳定后，按页面底部的START，读数完毕，
