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1、编码抗原（重组蛋白C33C,NS5；合成多肽5-1-1，C100,C22）的丙肝病毒CHIRON RIBA HCV3.0 SIA针对人血清或血浆中丙肝病毒抗体（anti-HCV）的条带免疫印迹试验（SIA）适用于体外诊断编码抗原（重组蛋白C33C,NS5；合成多肽5-1-1，C100,C22）的丙肝病毒CHIRON RIBA HCV3.0 SIA针对人血清或血浆中丙肝病毒抗体（anti-HCV）的条带免疫印迹试验（SIA）适用于体外诊断产品编号 930600目录 页码命名和使用目的 2试验概述和说明 2试验的生化原理 3试剂 4警告 4试剂制备 6储存说明 7试剂变质指示 8样本收集和准备 8
2、程序 9提供材料(30人份试剂盒；产品编号930600) 9 需要但不供给的材料9 主要陈述9 试验程序9质量控制程序11结果解释11程序的局限性12预期结果13具体的性能特征17关键符号19参考文献20发行日期：2007-12诺华疫苗和诊断试剂公司100125121. 命名和使用目的 CHIRON RIBA HCV3.0 SIA是一种针对人血清或血浆（来自为输血或血液再造的捐赠者）中丙肝病毒编码的单个蛋白所对应的抗体的体外定性酶免印迹测定，它主要是一种对经类似ELISA等许可的抗HCV筛选步骤重复筛查的活性人血清或血浆样本进行辅助的，更具体的测试手段。2. 测定概述和说明 正如Ebeling
3、等人所描述的，条带免疫印迹测试（SIA）已经在阐明丙肝对应的单个抗体方面展示出用性，通过SIA法对抗HCV的检测是基于传统的Western-blotting技术，在这项技术中，HCV基因组编码的特异性抗原被固定在一个膜支持物上。因HCV编码的单个蛋白而产生的抗HCV活性的可视化是通过使用酶标记的抗人IgG对酶底物的比色实现的。CHIRON RIBA HCV3.0 SIA是一种体外定性免疫印迹测定，它把重组HCV编码抗原和合成HCV编码多肽分别固定在测试条带上。两个重组抗原（C33C和NS5）及两个合成多肽（C100P和5-1-1P）是源于推测的病毒非结构蛋白，然而第三个多肽(C22P)被推测对
4、应于病毒的核衣壳蛋白，由于重组HCV C33C和NS5抗原是以一种和人源过氧化物岐化酶(hSOD)融合表达的形成得到的重组蛋白，所以hSOD也被单独表达作为条带上的对照带。这个对照条带可以排除重组蛋白中本不属于HCV本身编码的hSOD部分所对应的抗体。HCV C33C抗原产生于大肠杆菌（E.coli）基因重组表达，而HCV NS5抗原和hSOD产生于酿酒酵母（S.serevisiae）体系的基因表达。把基于早期重组抗原的RIBA HCV SIA结果值作为单抗原或多抗原的抗HCV筛选试验的补充实验已经出现在多篇已发表的论文当中。然而，已通过多抗原筛选步骤重复验证为部分活性样本却在RIBA HCV
5、 2.0 SIA 试验中成了不确定样本。（推测的包含HCV抗原的HCV基因组定位如图一所示） 据报道，非A,非B（NANB）肝炎占据输血后肝炎的80-90%，这类肝炎最显著的特点是半数的感染病人会发展成慢性肝炎，其中的20%又有可能进一步发展成肝硬化。接种过慢性NANB肝炎病人血清的黑猩猩会通过连续的病毒渠道传染到其它黑猩猩体内，这个实验证实了可转移的NANB媒介的存在。一个NANB肝炎的严格定义指除甲肝，乙肝，delta肝炎，巨细胞病毒感染和Epstein-Barr病毒感染，以及其它原因的肝脏发炎等之外的肝炎。一般NANB感染是温和的，病例中的75%是无黄疽的，病例中病症温和的比例甚至更高。
6、但是NANB肝炎也具爆发性。Mathiesen等已经揭示出所有爆发性肝炎病例中，36%被诊断为NANB感染者。NANB肝炎媒介的基因组已经从带有高滴度媒介的受感染的黑猩猩血浆中被克隆得到，这个媒介已经被指定为丙肝病毒。重组的HCV编码蛋白已经被利用发展为检测人血清和血浆中抗HCV的第一代（单抗原）和第二代（多抗原）检测筛选测定。具有显著特征的NANB panel数据表明了HCV抗体与输血后和社区型获得NANB肝炎间的具体关系。RIBA HCV 3.0 SIA，when used as directed in this insert，可以检测人血清或血浆中HCV的抗体。呈现在测试纸带上的单个的抗
7、原带可以确认抗特异的假定病毒抗原的抗体活性。3. 测试的生化原理 RIBA HCV 3.0 SIA是一个利用固定在测试条带上的重组HCV抗原或合成多肽形成的单一带进行的三步试验。第一步，样本和试验对照被稀释并于条带上孵育。假若有的话，那么其中的特异的HCV抗体将结合到对应的重组抗原或者合成多肽条带位置。血清或血浆中未结合组分通过抽吸和冲洗被去除掉。第二步，条带被孵育在含过氧化物酶标记的抗人IgG结合物中，这个结合物被结合到抗原抗体复合物的人IgG部位，未结合的结合物的去处通过倾倒和清洗步骤来完成。第三步，包含有过氧化氢和4-氯-1-萘酚的可借酶进行反应底物显色系统被加入，如果结合物是存在的，那
8、么在特异性的抗原，多肽或者对照带位置，酶促反应后将产生一种可溶性的蓝黑背景的产物，显色反应与过氧化氢对过氧化物酶的二价氧化有关，接着氧化状态的过氧化物酶分别靠两个共价键与4-氯-1-萘酚反应而恢复到正常状态，并导致产生可溶性的蓝黑色的反应产物。条带上的颜色产生以后，反应通过反应物的去除和洗涤而终止。肉眼可见的出现在条带上的带型是结合在条带上单个重组抗原或合成多肽所对应抗体的直接反映，对应每个抗原带的样本活性通过肉眼对条带上的低浓度的IgG和高浓度的IgG产生的隐性和阳性对照而被确定。如图三所示。4试剂 RIBA HCV 3.0 SIA 是一个30人份试剂盒（产品编号930600）组分描述供量S
9、TRIPHCV编码抗原（重组C33C和NS5抗原，合成的C5-1-1,C100,C22多肽）覆盖的条带：每个条带包含4个HCV编码抗原/多肽带，1个重组人SOD带，2条IgG对照带30个连续号的条带：提供在6个密闭袋中；每个袋中含有5个条带，并各自被置于软管中SD样本稀释液：带有牛蛋白稳定剂和去污剂的磷酸盐缓冲液（PBS）。包含有0.1%叠氮化钠和0.05%庆大霉素硫酸盐作为防腐剂含100ml溶液的瓶子CON结合物：过氧化酶标记的抗人IgG（重链和轻链），含有牛蛋白稳定剂，含有0.01%硫汞撒作为防腐剂含65ml溶液的瓶子4CN底物溶液：4-氯-1-萘酚的甲醇溶液含12ml溶液的瓶子SB底物缓
10、冲液：过氧化氢的磷酸缓冲液含60ml溶液的瓶子WB洗液浓度(50): 含有0.01%硫汞撒防腐剂的和去污剂的磷酸缓冲液含80ml溶液的瓶子PC阳性对照（人源）：灭活的包含有抗HCV抗体的人血清或血浆；并通过FDA认证实验测试对HbsAg,抗HIV-1,抗HIV-2，抗HTLV-1和HTLV-2抗体无反应活性，包含有0.1%叠氮化钠和0.05%庆大霉素硫酸盐作为防腐剂含0.3ml溶液的小瓶NC阴性对照（人源）：经FDA认证实验测试对HbsAg,抗HIV-1,抗HIV-2，抗HTLV-1和HTLV-2抗体无反应活性的人血清或血浆，包含有0.1%叠氮化钠和0.05%庆大霉素硫酸盐作为防腐剂含0.3m
11、l溶液的小瓶注意：所有样本要当做含有可传染性的媒介成分进行处理。储存在2-8（不要冰冻）针对体外诊断使用CHIRON RIBA HCV3.0 SIA满足FDA要求5.提醒 1.所有实验样本要当做含有可传染性的媒介成分进行处理。产生阳性对照物的血清或者血浆被处理以灭活其中的丙肝病毒。另外，使用的血清或者血浆要通过FDA认证实验测试验证对HbsAg,抗HIV-1,抗HIV-2，抗HTLV-1和HTLV-2抗体无反应活性。然而，还没有哪种灭活过程或者试验方法可以完全保证来自人血液的产物不会转移感染性媒介。因此，这些成分必须当做具备转染性媒介进行操作。建议所有试剂和样本均按已确立的最佳实验室操作规程进行操作。2.不要用嘴吸液。3.不要在操作过样本或试剂盒的地方吃喝，抽烟，或者使用化妆品。4.测试过程中戴一次性手套，之后要彻底洗手。手套要作为医疗垃圾丢弃。5.对溅液要迅速地用0.5%次氯酸钠溶液进行消毒（利用家用消毒剂1：10稀释）或者等效其它消毒剂。污染物体应该被视为医疗垃圾丢弃。6.任何潜在的污染物
