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1、 引物查询方法 一共有两种查询引物的方法，包括primerbank和primer3，当我们查到引物时，我们需要用Pubmed来验证。详细说明见下文。1. Primerbank 用引物银行查询引物时，我们只需要输入引物的名称，种属网址：http:/pga.mgh.harvard.edu/primerbank/1. 将search by 修改为keyword2. 将species修改为您所需要的种属，如mouse3. 输入您所需查的基因的名字，如atg5 4. 点击submit点击这里，您将看到引物在编码序列中的位置您将得到所需查的基因的引物的结果点击这里绿色的部分，您可以看到这个引物的Qpcr的
2、结果2.primer 3 使用这个工具之前您需要在Pubmed中查到您的目的基因的序列，然后黏贴到primer3中，软件便会自动设计引物。Pumed的使用方法如下：网址：http:/www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/输入您的目的基因，如atg7修改为nucleotide最后单击search点击这里选种属点击fasta选项筛选符合您需求的，我们是自噬相关的atg7，因此选这个这就是您所要的序列，复制Primer3打开primer3的网址网址：http:/bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/黏贴如在pubmed中查到的基因序列修改为None选中pick l
3、eft和pick right点击这个选项修改为您所需产物的大小范围这个是软件默认的最好的引物，下面还有其他引物这就是结果的页面下拉页面，您将看到软件对您的基因锁设计的全部引物完成引物的设计后，我们可以用pubmedblast来验证引物Blast 网址：http:/blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi输入网址会显示以下页面，按照以下步骤便可验证.输入网址后选择网页下面的这个地方，primer blast 修改种属修改您所期望得到的扩增产物的大小，如qpcr 一般在200以内输入查得的上下游引物的序列最后点击页面最下的此选项点击这个紫色的，这是引物的一个编号，您会看到详细的介绍这个页面有引物的位置等信息点击这里您会看到一些文献是使用过atg7的，但不一定是您所查的那一个大概就是这样，不足之处还望大家给予建议和谅解
