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1、病原微生物实验重点高压蒸汽灭菌（最常用，最有效的一种湿热灭菌法）的原理和作用：原理：如果蒸汽被限制在一个密闭的容器（高压蒸汽灭菌器）中，随着压力的升高，蒸汽的温度也相应升高。在103.4KPa蒸汽压下，温度达到121.3，维持20-30min可杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物（但不能杀灭活朊粒）作用：适用于包括液体在内的各种耐热，耐潮湿物品的灭菌血清肉汤培养基的用途：用于培养乙型溶血性链球菌等营养要求较高的细菌血琼脂培养基的用途：主要用于分离培养营养要求较高的细菌和观察某些细菌的溶血现象双糖铁培养基的原理及用途：双糖培养基乳糖：葡萄糖=10:1，若细菌能分解两种糖，因产酸量多，整个培养基将由红
2、变黄；若只能利用葡萄糖，因产酸量少，斜面表面积大，有机酸易挥发氧化，结果培养基底部变成黄色，斜面仍保持红色。该培养基还含有亚铁离子，可与硫化氢生成黑色沉淀，所以利用此培养基还能观察到某些细菌分级含硫氨基酸产生硫化氢的情况。由于该培养基是半固体培养基，还可用于有无鞭毛（痢疾杆菌无鞭毛）的鉴定。本培养基主要用于肠道致病菌的鉴定。S-S琼脂培养基的原理及作用：主要用于分离肠道致病性沙门菌属和志贺菌属的细菌培养基的选择成分主要体现在煌绿对球菌生长有抑制作用，有助于肠道致病菌的生长；胆盐，枸橼酸钠，硫代硫酸钠可抑制革兰阳性细菌和大多数的大肠埃希菌属细菌的生成，枸橼酸铁能中和中性红的毒性作用，并能与硫代硫
3、酸钠作为还原剂，避免某些细菌产生的硫化氢被氧化培养基的鉴别作用体现在不发酵乳糖的沙门菌属和志贺菌属细菌，在平板上形成的菌落不着色，呈半透明。大肠埃希菌能发酵乳糖，产生的酸使胆盐沉淀，胆盐与中性红结合，使菌落呈红色，在平板上可见培养基中红色成片的乳浊状沉淀。某些变形杆菌和沙门菌还能分解含硫氨基酸产生硫化氢，使菌落中心成黑色。此外，细菌在该平板上生长后，分解蛋白质产生氨基酸等碱性代谢物，使平板PH值升高，培养基由红变黄罗氏培养基的用途：主要用于结核分枝杆菌的培养（结核杆菌在该培养基上生长缓慢，呈菜花样）油镜的放大倍数：90或100（光学显微镜的分辨率为0.25m）观察细菌鞭毛所用方法：压滴法，悬滴
4、法，半固体鞭毛穿刺法细菌的革兰染色法：原理：革兰阳性细菌的细胞壁结够比较致密，肽聚糖含量高且交联度大，脂质含量少，乙醇脱色过程中，虽然能溶解细胞壁的脂质而在壁上形成小孔，但脱水作用使细胞壁收缩构成屏障，通透性降低，阻止细胞内的结晶紫-碘复合物的溢出，细胞仍保持结晶紫初染的紫色。而革兰阴性菌的细胞壁结果较为疏松，肽聚糖层较薄，厚厚的外膜层含有丰富的脂质，具有良好的溶脂作用的乙醇溶解脂质，细胞壁的通透性增高，细胞内的结晶紫-碘复合物溢出，细菌脱色，经复染后呈红色方法：1）涂片标本的制作 2)染色及镜检注意事项；1）涂片是菌膜要薄而均匀。2）注意乙醇脱色的时间3）用水冲洗时不应直接对准菌膜，应倾斜载
5、玻片，让水自上而下冲去多余的染料细菌的抗酸染色法； 原理；抗酸染色是细菌染色后不被盐酸乙醇脱色的染色方法，主要用于细菌抗酸性的鉴定。结核分枝杆菌等分枝杆菌属及少数放线菌为抗酸阳性菌。这类菌细胞壁脂质含量丰富，用一般染色方法不易着色，若通过加热或延长染色时间促使染料苯酚复红渗透，使其着色后，其脂质中主要成分分枝菌酸即表现出抗乙醇盐酸脱色的能力。而其他菌则会被脱色，经亚甲蓝复染成蓝色。 方法；1）涂片标本的制作；2）染色及镜检；培养基：是依据细菌的营养类型，按一定的培养目的而人工配制的满足细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质培养基类型凝固剂的添加主要用途液体培养基（呈淡黄色，透明澄清）
6、液体培养基接种法未添加快速增菌培养，细菌生长动态的观察，细菌的生化反应的检测固体培养基（呈琼脂的灰白色）分区划线法，连续划线法，蛇形划线法2%3%的琼脂平板可用于细菌的分离纯化，鉴定，计数及药物敏感试验，斜面可用于菌种的短期保存半固体培养基（呈琼脂的灰白色）半固体穿刺接种法0.5%0.8%的琼脂细菌动力观察，菌种的保存，细菌的生化反应的检测菌落；通过平板表面划线，可将混杂的细菌逐一分散开，经培养后可获得单个细菌生长而形成的细胞的集团，即为菌落在液体培养集中细菌的三种生长现象；混浊生长（表面葡萄球菌，大肠埃希菌），沉淀生长， 菌膜生长。真菌的培养条件；高糖，高氧，高湿度，低营养，低温度，低PH值
7、真菌的培养基；沙保弱培养基（SDA），麦芽浸膏培养基（MEA），玉米粉培养基真菌形成的三种菌落；酵母型菌落，类酵母型菌落，丝状菌落糖酵解实验；（多用于肠道细菌的鉴别上）1） 原理；该实验通过将细菌标本接种于内含倒置小管的单糖发酵管中，用溴甲酚紫作指示剂，培养后观察发酵管内指示剂的颜色变化及倒置小管的产气情况，判断细菌对不同单糖分解利用能力。2） 结果；若单糖发酵管中仍为紫色，表明细菌不分解该糖；若液体发酵管中液体变为黄色，表明细菌分解该糖；若发酵管中液体不仅变黄，同时倒置的小管内还有气泡，表明细菌即分解该糖产酸又产气乳糖葡萄糖大肠埃希菌产酸产气产酸产气伤寒门杆菌-产酸不产气甲基红实验1） 原理
8、；某些细菌如大肠埃希菌，可分解葡萄糖产生丙酮酸，使培养基的PH值降至4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，此为阳性反应。而产气杆菌分解葡萄糖后则生成乙酰甲基甲醇，培养基的PH值大于5.4，加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应2） 结果；大肠埃希菌+，产气杆菌V-P试验；1）原理；大肠埃希菌和产气杆菌都分解葡萄糖产酸产气，两者不能区别。但是产气杆菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，并可使之脱羧生成乙酰甲基甲醇，后者在碱性环境氧化为二乙酰，再与培养基中的胍基结合，生成红色化合物，为V-P阳性试验。而大肠埃希菌则为阴性试验。枸橼酸盐利用试验；1） 原理；某些细菌如产气杆菌，能利用枸橼酸盐作为唯一的碳源，可分解枸橼
9、酸盐生成碳酸盐，并分解培养基中的铵盐生成氨，使培养基变为碱性，指示剂溴麝香草酚蓝则由绿变为深蓝，此为阳性反应。而大肠埃希菌不能利用枸橼酸盐作为唯一碳源，不能在枸橼酸盐培养基上生长，为阴性反应。靛基质实验（吲哚试验）；1） 原理；某些细菌如大肠埃希菌，普通变形杆菌等具有色氨酸酶，能分解培养基中的色氨酸产生无色的靛基质（吲哚），当加入靛基质试剂（对二甲基氨基苯甲醛）后，可在液面上形成红色的玫瑰吲哚环，为靛基质试验阳性。2） 大肠埃希菌+，产气杆菌硫化氢生成试验；1） 原理；有些细菌，如沙门菌，普通变形杆菌能分解含硫氨基酸产生硫化氢，与培养基的铅或铁离子结合，生成黑色的硫化铅或硫化亚铁，即为阳性反应
10、。2） 结果；大肠埃希菌+，普通变形杆菌色素生成试验；1）细菌的色素分为1仅菌落着色而培养基颜色不变者为脂溶性色素2菌落及周围的培养基均出现颜色者为水溶性色素2）脂溶性色素；金黄色葡萄球菌（金黄色），表面葡萄球菌（白色），腐生葡萄球菌（柠檬色）水溶性色素；铜绿假单胞菌（绿色）S-R变异；即菌落由光滑型变为粗糙型（光滑湿润边缘整齐变为粗糙干燥边缘不整齐） 原理；该型变异是由于细菌失去LPS的特异性寡糖重复单位引起的，变异时不仅菌落特征发生变化，其理化特性，抗原性，生化反应，毒力等也常发生变化。H-O变异；即失去鞭毛的变异（这种变异通常是可逆的，H菌落形似薄膜，O菌落无薄膜）细菌的毒力相关实验；原
11、理；许多细菌在生长过程中可合成并分泌侵袭性胞外酶，有利于病原菌的抗吞噬作用并向周围组织扩散。如致病性葡萄球菌分泌的血浆凝固酶，A群链球菌分泌的透明质酸酶扩散因子（乙型链球菌）。血浆凝固酶可分为结合型（直接结合与血浆的纤维蛋白原，导致葡萄球菌凝集成块）和游离型（使液态的纤维蛋白原变为固态的纤维蛋白），结合型常用玻片法检查，游离型则用试管发检查。细菌外毒素实验；一只小鼠（甲）注入破伤风梭菌培养物滤液，另一只小鼠（乙）先注入破伤风抗毒素而后注入破伤风梭菌培养物滤液。结果是甲后肢及尾巴痉挛强直，随后死亡，此为阳性试验。乙仍健康存活。化脓性感染的微生物学检测化脓性球菌的种类；G（葡萄球菌，A群链球菌，肺
12、炎链球菌）G （脑膜炎奈瑟菌，淋巴奈瑟菌）溶血环的区别；甲型链球菌，肺炎链球菌（溶血环窄，呈半透明，草绿色）；乙型链球菌，金黄色葡萄球菌（溶血环宽，全透明）：不溶血消化道感染的微生物学检测1）细菌性痢疾的患者采集粘液脓血便；霍乱患者采集米泔水样便2）由于消化道细菌抵抗力普遍较弱，采集标本应及时送检，否则宜将标本保存在甘油缓冲盐水或肠道细菌转运培养基内。周二下午所有班级都用的是这一套题，所以周四再用这套题的可能性不大。至于是不是考他们上午基础考试用的那一套，在下实在不敢保证。但是可以肯定的是绝对没有考出给的范围。整理这套题出来，大家综合重点范围，可以多看下这套题里面没有包含的内容。好了不多瞎逼逼
13、了，题目走起！一、 一、名词解释：1、 1、无菌操作 （） 2、菌落二、 二、填空1、革兰氏染色的原理是 细胞壁学说 ；操作步骤是 结晶紫初染 、 碘液媒染 、 95%乙醇脱色 和 复红复染 。2、光镜下可以查见的细菌的特殊结构为 荚膜 、 鞭毛 和 芽孢 。3、致病性肠道细菌分离鉴定的原理 细胞的生化反应和血清型鉴定 ；S-S培养基属于 选择鉴别 培养基；非致病性肠道细菌菌落呈 无色半透明或菌落中心呈黑色 ；致病性肠道细菌菌落呈 红色成片的乳浊状的沉淀 。4、实验室判断细菌有无鞭毛所进行的操作方法有 压滴法 、 半固体鞭毛穿刺法 和 悬滴法 。5、金黄色葡萄球菌产生的色素为 脂溶性 ，表现为 金黄色 ；铜绿假单胞杆菌色素为 水溶性 ，表现为 绿色 。6、常用的热力灭菌方法为 高压蒸汽灭菌法 ，温度可达 121.3 ，时间持续 20-30min ，即可杀死包括芽胞在内的所有微生物7、小鼠拖腿试验用于检测 破伤风梭菌 产生的 外 毒素，发病表现为 症状。三、 三、简答请简述平板划线分离接种法的方法、操作注意事项、结果及应用。
