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1、Central Lab SOP中心实验室-SOP文件TITLE:题目前白蛋白（PA）测定标准操作规程INDEX NUMBER:序列号 FL-ML-0-006WRITTEN BY: 书写者：陈先宝 DATE WRITTEN:书写日期 2011年10月1日EFFECTIVE DATE: 生效日期 2011年11月1日REVIEW DATE: 审阅日期2011年10月20REVISION DATE: 修订日期REPLACE NUMBER: 被替代版号 New Format：新版号A/0APPROVED BY:审批者：Lab Director:中心主任黄永富所有相关人员上岗前或文件有变动时均应及时阅读
2、此文件并签字。1. Intended Use目的通过颗粒增强的免疫散射比浊法定量测定人血清中的前白蛋白含量。2. Sphere of Application适用范围在检验部BN ProSpec特定蛋白分析系统上进行的前白蛋白定量的检测。3. Principle of Test检验方法及原理 免疫散射比浊法。在免疫化学反应中，人的血清中的前白蛋白会与特异抗体形成免疫复合物。这些复合物会使穿过标本的光束发生散射。散射光的强度与标本中前白蛋白的浓度成正比。与已知的标准浓度对比就可得出结果。4. Specimen Collection使用的样本4.1. 标本种类：新鲜血清或采样后24小时内即进行冷冻储
3、存的血清。4.2. 收集方法：4.2.1. 血清：推荐使用超速离心清除脂血样本。l 收集静脉血于空白试管，并立即分离血清和血细胞。l 血清标本必须彻底凝固，并在离心沉淀后绝不能含有任何颗粒或残存的纤维蛋白。l 脂血标本或溶解后变得浑浊不清的冷冻标本，则必须在测试前通过离心沉淀加以澄清（在大约15000g下10分钟）。4.3. 病人准备要求：4.3.1. 一般要求早晨空腹安静时采血。4.3.2. 采血前一天忌用烟、酒、茶、咖啡，并应尽可能避免服用任何药物，不能停用的药物应予以注明，如抗生素、激素、维生素及其它影响代谢或干扰测试反应的药物，以便解释结果时参考。4.4. 标本容器的要求：洁净干燥的空
4、白试管。4.5. 拒收标本的规定：严重溶血、严重脂血、严重污染标本会导致错误结果，应予以拒收。4.6. 标本的处理方法：4.6.1. 血清：血样本应立即离心并分离血清进行检测；冷冻样品应解冻或缓慢升温至室温，此外冷冻过的样本检测前必须很好地加以混合并离心。4.7. 标本的储存规定：4.7.1. 血清或血浆：l 新鲜样本采集后，在18-25的室温环境中，必须在8小时内进行检测。l 样本在2-8保存，最多不超过8天，在低温（-20及以下）最多可以保存1年，条件是在样本采集采集后24小时内冷冻，且避免反复冻融。4.8. 标本的外送规定：4.8.1. 仪器故障不能立即维修及试剂断货导致不能在报告周期内
5、准时发出检测报告时，标本可外送至其他有医疗资质的单位进行检测。4.8.2. 标本结果可疑或与临床不符时，标本可外送至其他有医疗资质的单位进行复查比对。5. Reagents, calibrators, quality control试剂、标准品、质控品5.1. 试剂、标准品、质控品的商名： 5.1.1. 试剂厂商名：SIEMENS5.1.2. 标准品厂商名：SIEMENS5.1.3. 质控品厂商名：SIEMENS或RANDOX5.2. 试剂、标准品、质控品的产品名：5.2.1. 试剂产品名：SIEMENS BN ProSpec 前白蛋白测定试剂盒（OUIF09）5.2.2. 标准品产品名：SI
6、EMENS BN ProSpecN蛋白标准品SL（OQIM13）5.2.3. SIEMENS质控品产品名：l SIEMENS BN ProSpec N/T蛋白质控品SL/L（低值）OQIN13；l SIEMENS BN ProSpec N/T蛋白质控品SL/M（中值）OQIO13；l SIEMENS BN ProSpec N/T蛋白质控品SL/H（高值）OQIP13。5.2.4. RANDOX质控品产品名：RANDOX LIQUID SPECIFIC PROTEIN CONTRIL（LEVEL1、2、3）5.3. 试剂、标准品、质控品的包装规格：5.3.1. 试剂的包装规格：每包装1瓶，每瓶容
7、量2mL。5.3.2. 标准品的包装规格：每包装3瓶，每瓶容量1mL。5.3.3. 质控品的包装规格：每包装3瓶，每瓶容量1mL。5.4. 试剂、标准品、质控品内容物：5.4.1. 试剂内容物：l N抗血清为液体动物血清，用高纯度人前白蛋白作为抗原，使兔子产生抗体而制成。抗体滴度（T）由放射免疫扩散法测定并印在瓶标签上。抗体滴度表明用1ml的抗血清在琼脂糖凝胶中沉淀的抗原的量（以mg为单位）。l 防腐剂：叠氮化钠1g/L。5.4.2. 标准品内容物：l N蛋白标准品SL为液态、稳定的人血清。该标准品中加入从下列人源性制剂中获得的IgE、铁蛋白和2-微球蛋白：骨髓瘤血清IgE、胎盘铁蛋白和尿液2
8、-微球蛋白。列出的血浆蛋白浓度已根据不同蛋白参考制备法进行了调整，并因具体批号而异。l 防腐剂：叠氮钠（1g/L）5.4.3. 质控品内容物：l N/T蛋白质控品SL/L、M和H为液态、稳定的人血清。列出的血浆蛋白的浓度已根据不同蛋白参考制备法进行校正，并因具体批号而异。l 防腐剂：叠氮钠（1g/L）5.5. 试剂、标准品、质控品准备：5.5.1. 试剂准备：l 28下储存的试剂和标本可立即使用。使用前试剂需充分混匀。l 试剂瓶或样本管中的泡沫或薄层（液体表面薄层）会干扰水平信号的探测。从而影响样品和试剂的正确传送。在将样品和/或试剂放置到 BN ProSpec 系统上之前，先去除泡沫和 /或
9、薄层。5.5.2. 标准品准备：28下储存的N蛋白标准品SL或RANDOX质控品可直接使用。轻轻颠倒混匀。应避免用力振摇和形成泡沫。5.5.3. 质控品准备：28下储存的N/T蛋白质控品SL/L、M和H可直接使用。轻轻颠倒混匀。应避免用力振摇和形成泡沫。5.6. 试剂、标准品、质控品稳定性与贮存：5.6.1. 试剂稳定性与贮存：l 28保存条件下：稳定至失效期。l 开封后的稳定性：每次使用后立即盖紧盖子，储存温度保持在28，可以保存4周。不得冷冻。l 上机稳定性： 3天（按每天8小时计），或长度相当的时间（最多24小时）。5.6.2. 标准品稳定性与贮存：l 28保存条件下：稳定至效期。不得冷
10、冻。l 开封后的稳定性：SIEMENS BN ProSpecN蛋白标准品SL如果使用后立即密封保存在28环境中，则有效期为14天；RANDOX质控品如果使用后立即密封保存在28环境中，则有效期为30天。l 在储存期间，N蛋白标准品可能出现浑浊现象，这不是由微生物污染引起的，也不影响结果。5.6.3. 质控品稳定性与贮存：l 28保存条件下：稳定至效期。不得冷冻。l 开封后的稳定性：如果使用后立即密封保存在28环境中，则有效期为14天。l 在储存期间，N/T蛋白质控品SL/L、M和H可能出现轻微浑浊现象，这不是由微生物污染引起的，也不影响结果。5.7. 试剂、标准品、质控品、注意事项：5.7.1
11、. 用于试剂生产的每一份血液样品已根据欧盟或FDA 体外诊断法令批准的检测方法进行了检测并证实其对乙肝表面抗原、抗-HCV、抗-HIV1 和抗-HIV2 的检测呈阴性。然而，由于任何已知的检测方法都无法保证样本中完全不存在传染性成份，因此所有人源性产品都应该被视为具有生物危害性的传染性物质而谨慎处理。5.7.2. 试剂含有叠氮钠，必须小心处理：禁止入口或与皮肤、黏膜接触！如要倒在下水道里，请用大量的水冲刷，以防叠氮化物积聚。与铜、铅等重金属接触时，叠氮钠可能形成具有爆炸性的叠氮化物。6. Instrument仪器6.1. 仪器品牌：SIEMENS 6.2. 仪器型号：BN ProSpec特定蛋
12、白分析系统6.3. 仪器主要测定参数：详见每批试剂定标信息打印文件。7. Procedure操作步骤7.1. 样本操作：7.1.1. 样本用量：对原试管，其上清血清/血浆必须比沉淀细胞或分离胶高出大约10mm，如果使用1275mm试管，大约需要450500ul。7.1.2. 上机：标本离心后按照试管的直径选择白色或黑色的适配器。将样本管往下按到样本节段适配器的底部。然后由操作人员上机检测，具体操作参见BN ProSpec特定蛋白分析系统操作规程， BN ProSpec特定蛋白分析系统会自动将血清样本与N稀释液按1：5的比例稀释并进行测量。如果测得的读数超过了测量范围，可以使用更高或更低的稀释比
13、例重复检测。7.2. 室内质控：每次建立参考曲线后、首次打开试剂瓶后以及每运行一轮血清标本后，都检测N/T蛋白质控品SL/L、M和H，.这些质控项目将与病人标本一样来检测和评估。定值和质控范围列于相应质控项目的定值表中。如果质控项目的结果超出了质控范围，必须重复测试。如果重复测试证实了偏差，应建立新的参考曲线。在确定并校正偏差原因前不要发布患者的检测结果。7.3. 校准：参考曲线是通过多点定标建立的。仪器能使用N稀释液自动准备N蛋白标准品SL的系列稀释液。标准的稀释液必须在4小时内使用。只要准确性质控项目，即N/T蛋白质控品SL/L、M和H的值在它的可信区间内，就一直可以使用该参考曲线。如果使
14、用另一个批号的抗血清，则必须建立新的参考曲线。8. Precautions and Warnings操作注意事项8.1. 标本中的浑浊和颗粒可能干扰测量结果。因此，含有颗粒的标本必须在检测前进行离心沉淀。切勿使用通过离心处理（在大约15000g下10分钟）不能澄清的脂血标本。8.2. 在储存期间，N抗血清可能会出现沉淀或混浊，在这种情况下，抗血清应经过过滤后使用。建议使用孔径为0.45m的滤器。9. Calculations计算方法仪器的logit-log函数自动求出结果。10. Reference Range参考范围前白蛋白的参考范围：0.2-0.4g/L11. Operating Perf
15、ormance操作性能11.1. 检测范围：准确的测量范围取决于每一批N蛋白标准品SL中蛋白的浓度。若要了解典型数值请参阅BNP系统操作手册。11.2. 灵敏度：由参考曲线的下限决定，因此取决于N蛋白标准SL中蛋白的浓度。典型的测量范围参考BN ProSpec特定蛋白分析系统操作手册11.3. 精密度：在BN系统上用N抗血清人前白蛋白试剂按全国临床试验标准委员会指导原则EP5-A进行方差分析。检测内分析的变异系数（n=30）为1.9%，检测内分析的变异系数为（n=10）为1.4%。11.4. 特异性：N 抗血清对相应蛋白是特异。11.5. 方法学比较：用N抗血清人前白蛋白在BN系统（y）上用放射免疫扩散（x）（Partigen）方法对49个血清样品，进行测量比较，结果相关系数为0.99，y轴截距为0.017g/L，斜率为0.84。12. Limitations of Procedure方法局限性12.1. 由于工艺技术的原因和/或标本的老化，质控标本和实验室间质评标本所得到的结果可能因使用的检测方法不同而有出入，因此可能有必要结合具体方法的靶值来对这些结果进行评估。12.2. 标本中的混浊和颗粒可能干扰测量结
