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1、第十章 变态反应病的检查 变态反应（allergy），过去习惯称超敏反应或过敏反应（hypersensitivity reaction）,是指人体与抗原物质接触后发生的异常免疫反应，它与生理性免疫反应不同，不但不起保护作用，相反由于反应的过度猛烈而导致生理功能的紊乱或组织的损伤。变态反应分为I型（速发型），II型（细胞毒型），III型（免疫复合物型），IV型（迟发型）四种类型。这种分型法既涉及发病的时间因素，又与发病机制和病理过程相关。变态反应病（allergic disease）是由于异常的免疫反应即变态反应而引起。目前变态反应病按变态反应分型，相应的分为I、II、III、IV型变态反应病，
2、对各型的变态反应病的检查是不同的。本章重点介绍了总IgE(total IgE,tIgE)、变应原特异性IgE(allergen-specific IgE, sIgE)、变应原特异性IgG(allergen-specific IgG, sIgG)、嗜酸性细胞阳离子蛋白（eosinophil cationic protein，ECP）、循环免疫复合物（circulating immune complexs，CIC）的检查；变态反应病的分类，实验诊断策略以及常见变态反应病的实验诊断。变态反应病的诊断需亲密结合临床，实验诊断的目的主要是病因诊断或脱敏疗效的观察等。第一节 血清IgE测定在人体血清五种I
3、g（IgG、IgA、IgM、IgD、IgE）中，IgE含量最低。IgE是介导型变态反应的抗体，生理状况下含量极低，在健康人群中呈偏态分布。血清IgE上升提示有患变态反应病的可能。一、血清总IgE测定适应症：用于型变态反应病如变态反应性休克、花粉症等的帮助检查。不明缘由的嗜酸性粒细胞增多（eosinophilia）或发热；用于寄生虫病的帮助检查。标本采集：血清。 检测方法1、放射免疫吸附剂试验（radioimmunobsorbent test，RIST）：吸附有抗IgE的固相载体上加入含IgE的标本进行反应，形成抗IgE-IgE复合物。清洗后加入放射性同位素125I标记的抗IgE（125I-抗I
4、gE），使形成抗IgE-IgE-125I-抗IgE复合物。再次充分清洗载体，以除去游离的125I-抗IgE，然后用计数器检测复合物的放射量。放射量与待测标本中tIgE的量呈正比。 2、ELISA：其原理相像RIST法，只是用酶来代替放射性同位素，最后通过酶作用的底物显色来检测标本中的tIgE含量。3、荧光酶联免疫吸附试验（fluorescent enzyme-linked immunosorbent assay, FEIA）：其原理同ELISA，只是酶作用的底物是一种可释放荧光的物质，依据荧光的吸光度计算tIgE的含量。此方法在临床较为常用。参考范围：血清tIgE100.0 KU/L (FEI
5、A法)。临床意义1、型变态反应病：血清IgE上升虽不能说明对何种变应原过敏，但提示有患变态反应病的可能。变态反应性皮炎，血清tIgE最高，可达10000 KU/L甚至更高，通常见于花粉（pollen）高浓度季节。2、寄生虫病：寄生虫感染，可使血清tIgE水平明显上升。在我国，特别是农村，寄生虫感染率很高，因此tIgE水平也偏高。3、免疫缺陷病：遗传性免疫缺陷病，尤其是细胞免疫缺陷与血清tIgE水平上升有关。HIV感染，尤其是在感染的晚期，可消失变态反应样综合征（atopy-like syndrome），有时可消失过高的tIgE水平，见于CD4+T细胞明显削减之前。评价与问题1、严格地说，血清无
6、IgE检出才能视为无异常。所谓参考范围（高限值），是很多难以掌握的因素综合作用的结果。如在选择“参考人群”进行“参考范围”调查时，基本的入选条件是无变态反应病，无寄生虫感染。但如某些人有很稍微的过敏，又无临床表现，或数年前感染过寄生虫，现体内已有寄生虫，这些人都可能入选，即使条件掌握很严格，也肯定有部分这样的人被当成“参考人群”。2、影响tIgE水平的因素年龄：新生儿血清tIgE水平特别低，随着年龄的增长，tIgE的水平随之增高，学龄前儿童tIgE可接近成人水平，青春期水平最高，30岁后逐渐下降。老年人tIgE处于较低的水平，这可能与老年人TH细胞功能低下，TS细胞功能相对增强有关。性别：男性
7、高于女性，其机制尚不清晰。种族：混血人种的tIgE比白人高34倍，黑人水平更高，黄种人水平也较高。这可能受遗传的影响。3、tIgE水平在鉴别过敏与非过敏的问题上有肯定价值。但tIgE高不肯定是过敏，过敏者tIgE也不肯定高。因此tIgE不能作为型变态反应病的筛查试验，tIgE不增高也不能除外变态反应病。二、血清变应原特异性IgE测定人体针对不同的变应原产生不同的特异性IgE（sIgE），通过测定sIgE来确定引起型变态反应性疾病的变应原或过敏原（allergen），从而达到病因诊断。适应症：用于型变态反应病的病因诊断。监测变态反应病脱敏疗效。标本采集：血清。检测方法：FEIA、ELISA和放射
8、变应原吸附剂试验（radioalleryosorbent test，RAST），后者的原理同RIST，只是将抗IgE换成变应原吸附在固相载体上，最后依据放射量计算待测标本中sIgE的含量。FEIA在临床较为常用。参考范围：0.35 KU/L (FEIA法)。临床意义1、确定变应原：sIgE是能与某种变应原特异性结合的IgE，检测其存在是体外确定变应原的重要手段，阳性结果具有诊断意义，尤其是在临床表现特别严峻和典型、又不宜皮试时，可直接测定血清sIgE。当患者体质异常虚弱，皮试部位有严峻皮损，皮肤划痕症，正在服用抗组胺药或激素而不能停药以及婴幼儿，依据病史检测相应的血清sIgE，可确定患者对何种
9、物质过敏。2、推断变态反应程度：一般情况下，患者应先进行吸入变应原和食入变应原筛查试验，检测常见变应原的sIgE。常见吸入变应原包括：混合尘螨、混合霉菌、各种花粉、动物毛等。常见食入变应原包括鸡蛋、牛奶、鱼肉、花生、大豆、小麦等。阳性患者可在依据病史、临床表现等选择某些有关变应原，检测其sIgE含量。血清sIgE结果推断一般分几个等级，0级：0.35 KU/L，无已知变应原所致变态反应；1级：0.350.7 KU/L，对已知变应原有可疑或稍微的变态反应；2级：0.73.5 KU/L，对已知变应原有稍微的变态反应；3级：3.517.5 KU/L，有中等强度的变态反应；4级：17.550.0 KU
10、/L，有中等至严峻的变态反应； 5级：50.0100.0 KU/L，有严峻的变态反应；6级：100 KU/L，有特别严峻的变态反应。3、变态反应病患者进行脱敏治疗时，体内产生IgG性封闭抗体，与再次接触外来变应原结合，从而阻止变应原与sIgE结合, 通过定期检测血清sIgE量的动态变化来观察疗效。随着疗效的提高, sIgE量将逐步下降。评价与问题变应原有明显的地域性，生产国的试剂所接受的变应原与本国的不肯定完全符合。此外还大量存在同属不同种系，这些都可造成皮试与血清sIgE不全都，应予注意。某些小分子的变应原（半抗原）的sIgE测定灵敏度不高，对这些变应原如测不出sIgE并不能除外过敏的可能性
11、。其次节 变应原特异性IgG测定特异性脱敏是型变态反应病患者常用的治疗方法。在确定了患者发生变态反应的变应原后，将变应原配成不同浓度的提取液，给患者反复注射，可以在体内产生变应原特异性IgG（sIgG）型封闭抗体。通过检测血清sIgG量可了解脱敏治疗的效果。适应症：监测脱敏疗效。标本采集：血清。检测方法：ELISA和FEIA法，后者在临床常用。参考范围：阴性。临床意义：型变态反应病经脱敏治疗后，使变应原进入体内作用于机体的免疫系统产生sIgG，该抗体与以后进入的相应变应原结合，形成免疫复合物，最后由单核吞噬细胞系统清除掉，从而阻断或削减该变应原与sIgE结合的机会，故该sIgG又称为阻断抗体。
12、检测sIgG浓度变化来检测脱敏治疗效果。随着疗效的提高，血清sIgG量可逐渐上升。第三节 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白测定嗜酸性粒细胞是变态反应中最重要的炎症反应细胞，大量存在于上、下呼吸道粘膜，在支气管-肺泡灌洗液中也可查到。在变态反应病中，嗜酸性粒细胞被各种途径激活，释放很多活性物质，如嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（Eosinophil cationic protein，ECP）ECP等。ECP是嗜酸性粒细胞颗粒释放的特异性标志，反映了嗜酸性粒细胞活化程度。ECP对哺乳动物的细胞有很强的毒性作用，在炎症过程中，能诱导肥大细胞释放组胺，并介导气管上皮和角质细胞的损伤。适应症：推断气管炎的炎症反应程度，评
13、价抗炎治疗的效果。标本采集：全血标本在标准条件下（1921，1h）凝固后分离血清，使已活化的嗜酸性粒细胞释放ECP。检测方法：FEIA。参考范围：13g/L临床意义：血清ECP水平可反映嗜酸性粒细胞激活的程度和分泌毒性蛋白的能力，对反映气管炎症反应的程度较为敏感，故ECP可作为监测气管炎症反应的指标。ECP含量越高，气管炎症越严峻。ECP含量转变与血液中嗜酸性粒细胞数量无关。2、ECP可用于指导抗炎的指标。患者经抗炎治疗后，若ECP含量不降或轻度下降，可能药物剂量不够或需换药。在治疗过程中，尽管患者病情好转，症状消失，但ECP还13.0g /L，预示患者可再度复发。评价与问题：ECP测定的主要
14、难点是血液标本采集及室温的掌握，不同的实验条件可能干扰结果。第四节 循环免疫复合物测定血液循环中的免疫复合物（immune complexs，IC）大小与抗原和抗体分子的相对比例亲密相关。当抗原浓度过量时，形成细小的可溶性复合物，容易通过肾小球随尿液排出体外，或长期在血液中循环，往往不致病。当抗体浓度过量时，则形成大的沉淀性复合物，容易被吞噬细胞所吞噬和清除，往往也不致病。只有当抗原量略高于抗体量时，形成中等大小的可溶性复合物，它既不易被吞噬细胞清除，也不能经肾小球排出，可较长时间地在血流中循环。在血流迟缓，血流量较大而易产生涡流的区域，IC容易在小血管基底膜沉积下来，使补体活化、中性粒细胞浸
15、润、血小板活化，从而引起免疫损伤。循环免疫复合物（circulating immune complexs，CIC）增高与较多的疾病有关，尤其是III型变态反应病。适应症：主要用于III型变态反应病，如SLE，免疫复合物型肾炎等的帮助诊断。标本采集：血清。检测方法1、聚乙二醇法：聚乙二醇（PEG）是乙二醇聚合而成的无电荷线形多糖分子。用分子量为6KD 、3%4%的PEG可以选择性地沉淀大分子免疫复合物。方法是将PEG溶液与待测血清混合，放4冰箱过夜后离心，将沉淀物用PEG溶液充分洗涤，再次溶解于0.01mol/L的NaOH中，在波长280nm下测量溶液的吸光度，换算成CIC的浓度，以每毫升相关单位（relative unit, RU）或g/ml报告。2、ELISA：包被有补体片段C1q的固相载体与含有CIC的待测血清反应，经清洗载体后，在载体上加入酶标的抗人IgG抗体进行反应。经酶底物显色后测定其含量。参考范围：20 RU/ml或20 g/ml（ELISA）。临床意义：血清CIC上升可见于多种疾病，如SLE，免疫复合物型肾炎、类风湿性关节炎、急性血清病、原发性冷球蛋白血症、慢性活动性肝炎、恶性肿瘤等，可以作为一种帮助检查指标，对疾病的诊断无特异性，而且仅凭血清CIC增高也不能确诊为免疫复合物病，应结合其它指标综合分析，连续监测CIC含量对推断疾病活动性和治疗效果有肯定
