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1、细胞工程复习资料一：名词解释（20分）细胞分化：是指发育起始状态的合子沿个体发育方向不断分化出形态结构、生理功能不同 的细胞、组织、器官而最终形成完整植株的过程。即由于细胞的分工而导致其结构和功能改 变或发育方式改变的过程。看护培养：配置好花粉粒悬液和固体培养基后，将完整的花药或花药愈伤组织置于琼脂培养 基上，再将灭菌后的滤纸放在花药或愈伤组织上，然后再将欲培养的花粉置于滤纸上培养的 方法。细胞杂交：是指在人工控制条件下，不经过有性过程将不同类型的两个或多个细胞合并成一 个双核或多核细胞的过程。外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。人工种子:就是将离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有
2、养分和保护功能的人工胚乳和人 工种皮中形成的类似种子的颗粒。花粉培养：又称小抱子培养，或游离小抱子培养，指在无菌条件下，将花粉从花药中分离出 来使其成为分散或游离态，发育成单倍体植株的过程。条件培养基：培养过程中，有些细胞可能会分泌活性物质到培养液中，这种培养过某种细胞 以后，含有细胞分泌物的培养液称为条件培养基。植物脱毒：利用物理、化学、生物学等方法除去寄生的病毒的无毒植物。成批培养：将一定量的细胞或细胞团接种到一定容积的液体培养基中进行密封培养的方法。 体细胞杂交：又称原生质体融合，是指在人工控制条件下，不经过有性过程两种体细胞原生 质体相互融合产生杂种细胞。胚胎培养：是指在离体条件下使胚
3、或具胚器官发育成幼苗的培养技术。体细胞胚：又称胚状体，是指离体培养植物的体细胞，也可经胚胎发生过程形成在形态上与 合子胚相似的结构，这种结构同样具有再生出完整植株的能力。幼胚培养：是指处于原胚期、球形期、心形期、鱼雷期的胚培养。互补选择：两个具有不同生理或遗传特性的亲本，在一定的培养条件下形成杂种细胞时能产 生互补作用，根据这一特性进行杂种细胞选择的方法称为互补选择法。悬浮培养：是指将游离的单细胞或小的细胞团，按照一定的细胞密度，悬浮在液体培养基中 进行培养的方法。植板率：（每个平板上形成的细胞团数/每个平板上接种的细胞总数）*100% 种质：是指亲代通过生殖细胞或体细胞直接传递给子代并决定固
4、有生物性状的遗传物质。 玻璃化冻存：是指利用多种高浓度的冷冻保护剂联合形成的玻璃化冷冻保护液保护悬浮细 胞，直接投入液氮进行冻存的方法。微繁殖：是指在离体培养条件下，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织 和细胞进行无菌培养，经过不断地切割和重复培养，使其增值并再生形成完整植株，在短期 内获得大量遗传性均一的个体的方法。原球茎：兰科植物的种子在萌发初期并不出现胚根，只是胚逐渐增大，以后种皮的一端破， 膨大的胚呈小圆锥状，称作原球茎。半连续培养：是指在反应器中投料和接种培养一段时间后，将细胞悬液移出一部分，同时再 加入新鲜培养液进行培养的方法。细胞系：初代培养细胞一经传代后便改称为细
5、胞系。细胞株：平板培养中，单个细胞经持续分裂，形成许多细胞团，尽可能的使每个细胞团均来 自同一个细胞，这种细胞团成为细胞株。器官灌注培养法：利用器官的动静脉系统灌注血液或含有营养和氧气的培养液，以此维持器 官在体外的长期生存。接触抑制：细胞相互作用后，如果培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运 动的现象。核体：应用细胞松弛素处理培养细胞时，细胞内的纤细网状结构便被切断，从而使被细胞膜 所覆盖的细胞核移位。经离心分离，便可从胞质体中分离得到被称为核体的东西。非对称融合：是指利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行的融合。 对称融合：是指两个完整的细胞原生质体融合，一般在融合
6、子中包含有两个融合亲本的全 套染色体和全部的细胞质。胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。选择性筛选：通过改变培养基成分或添加药物对杂交细胞进行筛选的方法称为选择性筛选。 原代培养：即第一次培养，是指将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养 物的培养过程。永久细胞系：也称连续细胞系，是指细胞获得持久性增值能力的细胞群体。有限细胞系：原代细胞经第一次传代后，形成细胞群体，即具有增值能力，类型均匀的培养 细胞一般为有限细胞系。细胞同步化：指同一悬浮培养体系的所有细胞都同时通过细胞周期中的某一特定时期。 间接筛选：是指借助与突变表现型有关的性状作为选择指示或筛选压的方法。超数排
7、卵：在动物发情周期，用促性腺激素进行处理，诱发其卵巢上大量卵泡同时发育并排 卵的技术叫做超数排卵，简称超排。胚胎移植：是指对优秀雌性动物进行超数排卵处理，在其发情配种后，从其生殖道中取出早 期胚胎移植到同期发情的普通雌性动物生殖道的相应部位，让其生产后代的技术。胚胎干细胞：一般是从发育早期的胚胎内细胞团中分离培养出来的一种的具有自我更新、无 线增值能力、能分化成代表3个胚层组织细胞能力的干细胞。胚胎分割技术:采用显微操作系统将哺乳动物附植前的胚胎分成若干个具有继续发育潜力部 分的生物技术，运用胚胎分割可获得同卵双生后代。二、问答（选择、填空，简答，论述80分）一、常用的灭菌方法有哪些，各有哪些
8、优缺点？1）湿热灭菌（咼压蒸汽灭菌） 优点：咼温咼压蒸汽对生物材料有良好的穿透力，能造成 蛋白质变性凝固而使微生物死亡，是一种最有效的灭菌方法。缺点：如果是对培养基或液 体溶液灭菌，灭菌时间与需要灭菌的培养基或液体溶液的体积密切相关，时间不足达不到灭 菌效果，时间过长培养基内的化学物质遭到破坏，影响培养基成分。2）过滤除菌 优点：物质不会发生变性或丧失功能。3）干热灭菌 缺点：干热灭菌存在能源消耗大、浪费时间、安全性差问题4）紫外线灭菌缺点：由于紫外线穿透物质的能力很弱，所以只适于空气中和物体表面的 灭菌，而且要求距照射物质以不超过1.2m为宜。5） 熏蒸消毒优点：方法简便，只需要把消毒的空间
9、关闭紧密即可。6）药剂喷雾消毒二、动物细胞培养常用的培养基组成成分有哪几类，在离体培养过程中有哪些作用？1）天然培养基：对促进细胞生长繁殖、粘附及中和物质的毒性有一定作用。2）合成培养基：血清的加入对培养非常有效，但对培养产物的分离纯化和检测会造成不便。3）无血清培养基细胞外基质能帮助细胞附着和贴壁；低分子营养成分是细胞生长和代谢 所需的；激素与生长因子促进细胞生长繁殖；酶的抑制剂，保护细胞不受培养基内残留酶的 损伤。三、外植体的发育程度对愈伤组织的诱导和继代有何影响？答：在胚性愈伤组织的诱导中，外植体的发育状态是一个十分重要的因素。外植体在发育过 程中，存在一个很短暂的时期，此期外植体内的某
10、些细胞处于未分化或部分分化的状态，这 些细胞具有形成胚性愈伤组织的能力，而处于这一发育时期之前或之后的外植体都只能形成 非胚性愈伤组织。因此，选择适宜的取材时期可获得理想的培养结果。四、培养条件下的器官发生有哪些方式？影响其发生的因素有哪些？答：（1）有直接发生与间接发生两种途径。（2）影响其发生的因素有：1、外源激素的影响2、物理因素：光照、温度3、外植体的 生理状态4、培养物的年龄。五、胚状体的发育大约要经过哪几个时期？答：一、诱导期二、胚胎发育期六、控制胚性细胞同步化的方法有哪些？答：抑制剂法促进细胞同步分裂；低温处理促进细胞同步分裂;渗透压控制同步化法； 同步胚的分段收集筛选法；通气法
11、（乙烯）。七、离体繁殖时外植体选择应注意哪些方面？ 答：生理状态和基因型其中生理状态包括年龄、取材、季节、生长、环境部位。八、脱除植物病毒病有哪些方法？其原理是什么？物理方法(1) 、高温处理又称热疗法原理:一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下(35-40 C)即钝化失活，繁殖力下降，失去侵染能力，而植物基本不受伤害.(2) 、低温处理又称冷冻疗法原理：降低温度能使病毒活力下降。化学处理(1).病毒抗血清预处理：用齿舌兰环斑病毒(ORV)的血清处理兰属离体分生组织，提高了再生株中无ORV的植株频率。.RNA抑制剂处理：烟草愈伤组织培养基中加入2-硫脲嘧啶，可除去组织中马铃薯Y病毒(PVY)。
12、放线菌D和放线菌酮能抑制原生质体中病毒的复制。(3) 三氯唑核苷：病毒唑，化学名称124-3唑-3-酰胺-1-0-D-咲喃核苷，可脫除马铃薯茎 尖中的X.Y.S和M病毒生物脫毒方法原理：培养材料中通常不含病毒，可通过植物组织培养就行脫毒)(1) 、茎尖分生组织培养(2) 、微体嫁接脫毒(3) 、愈伤组织培养脫毒(4) 、珠心胚培养脫毒(5) 、花药培养脫毒九、影响茎尖分生组织培养去除病毒的因素都有哪些？(1) 、供体的生理状态和部位(2) 、适当大小的茎尖分生组织的分离(3) 、茎尖分生组织培养基的类型和培养条件十、无病毒植物的检测方法有哪些？(1) 、直接检测法:直接观察(2) 、电镜检测法
13、(3 )、指示植物(敏感植物)法(4) 、血清学检测法(5) 、分子检测技术：PCR技术、探针杂交技术十一、简述植物细胞大规模培养反应器的类型及原理？成批培养：将一定量的细胞或细胞团接种到一定容积的液体培养基中进行密封培养的方法。 连续培养：用一定容积的但非封闭的反应器来进行大规模细胞培养的方法。半连续培养：在反应器中投料和接种培养一段时间后，将细胞悬液移出一部分，同时再加入 新鲜培养液进行培养的方法。十二、简述细胞固定化的几种方法。答：1、包埋法 其中包埋法包括：（1）海藻酸盐包埋法（2）k-卡拉胶包埋法琼脂 糖包埋法（4）膜包埋法2、吸附法：（1）聚氨酯泡沫吸附法 （2）尼龙网膜固定法（3
14、）壳聚糖吸附法十三、在植物细胞培养中如何提高植物次生代谢产物的产量？答：（一）筛选得到高产细胞系（株）常用方法有：1、克隆选择（有相同遗传基因的细胞群）指通过单细胞克隆技术和细胞团克隆技术，将培养细胞中能够积累较多次生代谢物且具有相 同遗传基因的细胞群挑选出来，并加以适当的培养形成高产细胞系。2、抗性选择指在选择压力下，通过直接或间接的方法得到抗性变异的细胞系。3、诱导选择是通过化学诱变或紫外线照射等各种物理化学方法诱变产生比原亲本细胞全成能力高的细 胞系（株）（二）培养条件1适宜温度2、不断调节PH3、营养成分：一方面要满足植物细胞的生长所需，另一方面要使每个细胞都能合成和积累 次生代谢产物
15、。4、光：包括光强、光质和光照时间对细胞生长和次生代谢产物合成都有一定影响。5、通气量和搅拌转速6、前体饲喂7、诱导子的应用：诱导子是指能引起植物细胞某些代谢强度或代谢途径的物质，可分为生 物诱导子和非生物诱导子。不同诱导子作用于不同植物可以产生多种多样的次生代谢产物。十四、原生质体的培养方法有哪些？各有何优缺点？液体浅层培养法：优点：原生质体在液体环境中有较强的吸收营养物质的能力，表现出较强的细胞分裂能力。 操作简单，对原生质体的损伤小，且易于添加新鲜培养基和转移培养物。缺点：原生质体分布不均匀，常常发生原生质体之间的粘连现象而影响其进一步的生长和发 育。此外，难以跟踪观察某一个细胞的发育情况。双层培养法一一夜体-固体双层培养法：优点：固体培养基中的营养物质可以缓慢释放到液体培养基中，如果在下层固体培养基中添 加一定量的活性炭，则还可能吸附培养物产生的一些有害物质，促进原生质体的分裂和细胞团的形成。缺点：不易观察细胞的发育过程。固体薄层培养法优点：使原生质体处于固定位置，避免了原生质体的漂浮游动，有利于对单个原生质体的细 胞壁再生及细胞团形成的全过程进行定点观察。缺点：培养基温度对薄层质量和原生质体分布有一定影响；另外，
