《酸性纤维素酶对红茶菌产膜量的影响-周鹏宇.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《酸性纤维素酶对红茶菌产膜量的影响-周鹏宇.doc（13页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、安徽科技学院 食品药品学院 本科毕业论文本科生毕业论文（设计）题 目: 酸性纤维素酶对红茶菌产膜量的影响 姓 名: 周鹏宇 学 院: 食品药品学院 专 业: 食品质量与安全 班 级: 061 学 号: 2006674131 指导教师: 孙永康 职称: 讲师 2010年 6 月 8日安徽科技学院教务处制目 录摘要1关键词1前言11 材料与方法11.1材料21.1.1 原料21.1.2 试剂21.1.3 仪器与设备21.2 方法21.2.1 技术路线21.2.2 操作要点21.3 检测方法 31.3.1葡萄糖标准浓度曲线绘制31.3.2酸性纤维素酶活力的测定31.3.3 纤维素膜重的称量42 结果
2、与分析52.1酸性纤维素酶不同加入时间对红茶菌产模量的影52.2不同浓度的纤维素酶对红茶菌产模量的影52.3红茶菌不同接种量对红茶菌产膜量的影响52.4不同培养基加入量对红茶菌产膜量的影响52.5初始pH的不同对红茶菌产膜量的影62.6不同温度对红茶菌产膜量的影响62.7酸性纤维素酶对红茶菌产膜量影响因素的优选63 讨论73.1 酸性纤维素酶加入时间确定83.2 纤维素酶浓度的确定83.3 红茶菌接种量的确定83.4 培养基加入量的确定83.5 初始pH的确定83.6 发酵液温度的确定94 结论9致谢9参考文献10安徽科技学院 食品药品学院 本科毕业论文酸性纤维素酶对红茶菌产膜量的影响食品质量
3、与安全：周鹏宇指导老师：孙永康摘要：本文对酸性纤维素酶在不同条件下对红茶菌产膜量的影响进行了研究。通过单因素实验和正交实验对红茶菌发酵过程中加入酸性纤维素酶的各种发酵参数进行优化选择。实验结果表明在46、初始pH5.0、0.12%酸性纤维素酶、红茶菌10%、培养基加入量60%的条件下纤维素酶对红茶菌产膜情况影响效果最好，可有效的抑制纤维素膜的产生。关键词：红茶菌， 酸性纤维素酶， 产膜量， 发酵， 影响前言红茶菌是一种有着悠久历史的传统功能性饮料。具有多种保健作用，也是一种很有利用价值的天然微生物发酵产品。茶菌中有益的微生物主要由乳酸菌，酵母菌，醋酸菌组成1，通过其的特殊作用，将糖、茶等原料经
4、过生物技术发酵工艺转化为极其丰富的营养物质(如葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、D-葡萄糖二酸-1,4内酯、乳酸、醋酸、维生素、多糖、蛋白等)，使糖茶水成为一种甘甜可口的饮料2。其功能主要体现在清理肠胃、消除疲劳、增强食欲、帮助消化、防治高血压和动脉硬化、预防和治疗糖尿病、以及防癌抗癌以及增强机体免疫力等3。据专家预测，21世纪的饮料市场将是茶饮料的世界。中国是世界茶叶的发源地，也是世界上最大的茶叶生产国。尽管我国茶饮料工业起步较晚，但发展势头十分强劲。基于红茶菌的保健作用，人们对各种红茶菌饮料的开发研究产生了格外的兴趣。同时红茶菌发酵产物中的细菌纤维素在食品、造纸、医疗等有着广泛的应用，国内外学者对如何
5、提高细菌纤维素产量也作了相应的研究4。在对红茶菌饮料的开发生产时，在发酵过程中产生的细菌纤维素膜一直是阻碍各生产企业对其的品质提升以及扩大再生产的重要因素5。解决这一问题就显得十分重要，然而对于红茶菌饮料发酵过程中所产生的细菌纤维素膜的解决的研究确寥寥无几。因此对红茶菌发酵时产生的细菌纤维素膜的防治的研究具有重要的经济意义。本文根据细菌纤维素膜的成分特点，在红茶菌发酵时加入酸性纤维素酶，并且在不同条件下研究酸性纤维素酶对红茶菌产膜量的影响。通过实验找出最佳工艺参数为解决红茶菌饮料生产时的产膜问题提供参考。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 原料红茶菌：安徽科技学院食品微生物实验室保藏；红茶：
6、市售；白砂糖：市售食品级。1.1.2 试剂柠檬酸、柠檬酸钠、酒石酸钾纳、无水硫酸钠、苯酚、3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、羧甲基纤维素钠、葡萄糖，以上均是分析纯试剂。酸性纤维素酶-湖南利尔康生物有限公司。1.1.3 仪器与设备FA2104电子天平：上海精密科学仪器有限公司；YP3001N电子天平：上海精密科学仪器有限公司；HH-B11电热恒温培养箱：上海跃进医疗器械厂；LS-B50L立式压力蒸汽灭菌器：上海华线医用核子仪器有限公司；SD-28加热水浴锅：上海精宏实验设备有限公司；GZX-9076 MBE 数显干燥箱：上海博讯事业有限公司医疗设备厂。1.2 方法1.2.1 技术路线 酸性纤维素酶
7、 红茶糖水的配制红茶菌的扩培接种发酵过滤称重1.2.2 操作要点1.2.2.1 红茶糖水的配制以茶叶，蔗糖，蒸馏水质量比为1:20:500的比例，将其加热煮沸，然后过滤至棕色瓶中（用8层纱布封口）灭菌后备用。1.2.2.2 红茶菌的扩培取4.0g茶叶，320g蔗糖，蒸馏水2000mL，在一起加热煮沸，然后滤去茶叶并将茶糖水移至棕色瓶中（用8层纱布封口），最后放入高压杀菌锅中灭菌15min。取出灭菌过的培养基，在无菌操作台中将红茶菌小心接种在棕色瓶中。将接种过的红茶菌培养基放入37的恒温箱发酵培养7天。1.2.2.3 酸性纤维素酶的加入时间对红茶菌产膜量的影响以红茶菌接种量20%，培养基量为总体
8、积的70%，发酵温度37，在红茶菌接种当时即0天、1，2，3，4，5，6，7天时向发酵液中加入0.12%的酸性纤维素酶进行试验，测定结果。1.2.2.4 纤维素酶浓度对红茶菌产膜量的影响红茶菌接种量20%，培养基量70%，发酵温度37，在接种红茶菌的同时加入0、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20、0.24浓度的纤维素酶进行试验，测定结果。1.2.2.5 不同红茶菌接种量对红茶菌产膜量的影响按培养基量为总体积的70%，同时加入0.12%酸性纤维素酶，发酵温度37的条件下进行茶菌接种量分别为5%、10%、15%、20%、25%、30%时对产膜量的影响试验。1.2.2.6 培养基量对红
9、茶菌产膜量的影响同时向培养基的量为45%、50%、55%、60%、65%、70%中加入20%的红茶菌和0.12%的酸性纤维素酶在发酵温度37的条件下进行试验，测定结果。1.2.2.7 初始pH对红茶菌产膜量的影响按培养基量为70%，同时加入20%红茶菌液和0.12%酸性纤维素酶在发酵温度37的条件下，调节各培养基的初始pH分别为3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0进行试验，测定结果。1.2.2.8 温度对红茶菌产膜量的影响以培养基量为70%，同时加入20%红茶菌和0.08%酸性纤维素酶，在发酵温度分别为35、37、40、43、46、50、53下进行试验，测定结果。1.2.2.
10、9 正交试验的建立根据各单因素试验结果按照表1和表2进行正交试验。1.3 检测方法1.3.1葡萄糖标准浓度曲线绘制1.3.1.1 1lmg/mL标准葡萄糖溶液精确称取105干燥2h的分析纯葡萄糖0.5000g加水溶解，稀释定容至500mL。1.3.1.2葡萄糖标准浓度曲线的绘制分别取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL的1mg/mL的葡萄糖标准溶液和2mL3，5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）于不同编号的25mL容量瓶中。并用去离子水将各容量瓶补至4mL。在沸水浴中反应10min，冷却后定容到25mL。在max=492nm下，用紫外分光光度计测定吸光度值，以吸光度值为纵坐标，葡萄
11、糖含量为横坐标，绘制标准曲线6。葡萄糖标准曲线如图1所示。其回归方程为y=27.999x-0.1085，线性相关系数R2=0.9988，线性很好可以用此进行纤维素酶活力测定。 1.3.2 酸性纤维素酶活力的测定1.3.2.1酸性纤维素酶酶液制备取酸性纤维素酶粉2.09g加200mL的去离子水，搅拌均匀后，于40水浴中保温45min，用脱脂棉过滤到三角瓶中密封置冰箱中冷藏待用7。1.3.2.2 酶活力测定方法采用3，5-二硝基水杨酸(DNS)法8在45、pH5.0、酶促反应30min条件下测得酶活力为1334 IU/g。1.3.3 纤维素膜重的称量将菌膜取出后用清水进行漂洗，在自然状态下放置风干半小时后于分析天平上称量其膜重量。图1 葡萄糖标注曲线Fig 1The curve of glucose standard concentration 表1正交试验因素和水平Table 1 The factors and levels of the orthogonal experiment水平因素初始pH温度（）红茶菌接种量（
