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1、一.实验室管理制度（一）实验室技术规程1、采样前应对被检者进行登记编号，按临床采血技术规范操作，用一次性真空采血管抽取35ml静脉血，置室温12h，待血凝固，血块收缩后再用3000r/min，吸出血清备用；短期（1周）内进行检测的血清（浆）存放于280C（冰箱），长期保存的血清（浆）置200C以下冰柜中，采样时应戴双层手套、注意安全、谨慎操作，防止刺伤和造成外界污染。2、样品运送须将血清（浆）置于带盖的塑料试管内并标明编号、姓名、种类和采集时间，然后置于外标有HIV检测专用字样内垫有缓冲吸水材料的带盖容器，最外层包装要帖标签（数量、收、发件人），送检单与样品分开放置，用冷藏包加放冰箱后运送。3
2、、对院内各科室送来的样品应与送检单核对无误，同时检查样品管有无破损和溢漏，若漏则将尚存样品移出，对样品管和盛器消毒灭菌，记录有无严重溶血，微生物污染，血脂过多以及黄疸等情况，如污染过重或认为样品不能被接受，应安全废弃并告知送样人。4、应戴手套、口罩、防护服镜在HIV专用操作台面上（或生物安全柜里）打开样品和吸加样品至反应板（或试纸条），严格按厂家试剂盒说明加入血清、掌握显色时间、及阳性对照反应情况，按SOP文件填写原始记录。5、应严格按SOP文件操作，加入样品和试剂要准确，防止移液器吸头间、吸头与反应板（或试纸条）的交叉污染，测定结果后应及时将原始记录填写、存档、并将血清编号登记后置于-20冷
3、冻保存，检测阴性的血清至少应保存一年以上，检测阳性的标本应送上级确证，本院不能保存。6、实验结果后应对台面和室内物品进行清理，用0.5%次氯酸钠或75%酒精消毒处理操作台面或地面，按相关制度做好技术处理。（二）HIV抗体检测程序1.常规检测：初筛试验，用敏感性高的检测试剂，结果为阴性，则报告阴性；结果为阳性反应，则进入复检试验。2.复检试验，用原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两家不同原理（或厂家）试剂，两种试剂复检结果均为阴性，则报告阴性。如一阴一阳或两种均为阳性反应，则按全国艾滋病检测技术规范要求送赣州市疾病预防控制中心艾滋病确证实验室进行确证试验。3.根据检测结果进行咨询，检测结
4、果为阴性的按阴性咨询，对两种检测结果均为阳性反应或一阴一阳反应的，按照疑似阳性咨询（流程图）。 HIV抗体检测流程图样品初筛试验筛查试剂阳性反应阴性反应复检试验原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂均阳性反应一阴一阳均阴性反应确证试验报告阴性（三）安全操作制度1. 个人保健和防护(1) 检测人员上岗前应接受相关的生物安全与个人防护培训。(2) 为检测人员提供一次性乳胶手套、口罩、帽子。(3) 检测人员工作前应修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。(4)避免在检测样本时进食、饮水、吸烟和化妆。(5) 出现手部皮肤有开放性伤口及其他不适于检测工作的情况，应暂停工作。(6)
5、 操作过程中，如发现工作服被污染，应立即更换；如手套破损，应立即丢弃、洗手并换上新手套。(7)避免用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵、头发和清洁工作区域。(8)禁止手套清洗或消毒后再次使用，因为使用表面活性剂清洗可使手套对水的通透性增加，消毒剂可以引起手套的破损。2.意外事故处理(1) 如发生皮肤针刺伤或切割伤，应立即用肥皂和大量流水冲洗，用70%乙醇或碘伏等其它消毒剂消毒伤口。(2)皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或碘伏等其它皮肤消毒剂。(3)粘膜污染：用大量流水或生理盐水冲洗污染部位。发生上述事件后，通常应遵循三条原则：及时处理原则，报告原则，
6、保密原则。3.HIV实验室清洁和消毒(1) 每次实验后，用0.5的次氯酸钠或75的酒精常规消毒工作台。(2) 将用过的检测试剂板（或条），置于废弃缸（或桶）中用1的次氯酸钠浸泡。（四）废弃物消毒处理制度1.血液标本置于合适容器内，加盖盖紧后运送，切勿污染盛器外部。如果盛器被污染，要用消毒液消毒。也可以将血样置于有盖的塑料管内，外面套上塑料袋，封口，连同送检单一并运送，有血液外溢时，当即用消毒液消毒。2.各种试剂和化学品应帖有标签，放置于合适的位置，实验台上不放置不必要的物品。任何测试用的样品和试剂不宜置于桌面或架子的边沿，以防滑落打破，污染环境。一旦污染，先在污染区外周围倒入0.5%次氯酸钠消
7、毒液，逐渐向中心消毒处理。3. 实验室所有垃圾，包括用过的一次性手套和工作衣，置于专门污袋内经有效消毒处理后交有关部门处理，污染的非一次性工作衣应先消毒后再洗涤。4. 所有用过的实验室用品，尤其是装过血样的试管和血标本先在实验内经高压灭菌处理后，再移出室外，交医院清洁工转置本院医疗废物回收点。5.所有尖锐物品应置于不宜刺破的容器内（如锐器盒），消毒后标识，再移出室外，交医院清洁工转置本院医疗废物回收点。6.常用的消毒剂和消毒方法与病毒性肝炎消毒方法相同。7.所有用的需消毒处理的实验用品，必须在实验室内包装后统一消毒。8.统一消毒工作由实验室检测人员负责，并做好处理记录。（五）反馈与报告保密制度
8、1.对本实验室检测结果阴性的标本，出具HIV抗体阴性报告，并将结果及时反馈给送检医生或被检者。2.对本实验室检测结果阳性的标本应进行核对、登记，及时用两种不同厂家的试剂复检。3.复检结果阴性的，出具HIV抗体阴性报告，并将结果及时反馈给送检医生或被检者，此样品不再送赣州市疾病预防控制中心。4.复检结果无法排除HIV抗体阳性及本实验初筛中发现的可疑阳性标本，应及时送赣州市疾病预防控制中心，同时填写HIV抗体复检送检单和送样单。5.将本实验室HIV抗体检测情况汇总，于每月5日前上报中国疾病预防控制中心。6.HIV初筛实验室有专人负责妥善保存各种实验记录、感染者档案，不得擅自修改和销毁；严格遵守保密
9、制度，未经卫生行政部门许可，不得向无关人员或单位提供任何情况。7.本实验室检测的阳性结果应及时送赣州市疾病预防控制中心作进一步确证，不能出具HIV抗体阳性的结果报告，按疑似阳性咨询告知。8.收到HIV抗体确认中心实验室确证的阳性结果，以机密形式及时反馈给送检医生或被检者，同时报相关部门备案。二.HIV筛查实验室操作规程（一）样品的采集、接收、登记、处理和运输目的规范本筛查实验室艾滋病病毒（HIV）检测的血清、血浆和全血样品的采集、接收、登记和处理、运输，有序进行，提高检测工作质量。1. 适用范围适用于HIV抗体检测、HIV抗原检测、核酸检测、CD4+/CD8+T淋巴细胞测定。2. 职责（1）检
10、测人员须严格遵守本操作规程。（2）本科室负责人负责监督检测人员履行相关职责。4、程序1）样品的采集和处理艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用的血液样品的采集和处理方法如下：（1） 编号及填写登记表首先对被检者编号及填写信息(试管编号与登记表编号应相一致,试管标签应填写DZY/检测编号/采血时间。（注解：“DYZ” ：“D”大，“Y”余，“Z”中医院）（2） 血清样品采集和处理用一次性注射器（或真空采血管）抽取5ml静脉血，室温下自然放置12h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min,将血清置于贴好标签的血清管(2ml规格螺
11、口管)中,在标签上填写DYZ/检测编号/收样(采血)时间。（3） 抗凝血样品采集和处理. 用加有抗凝剂的5ml真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管）采血5ml，立即把握住试管两端,颠倒混匀数次，将血液与抗凝剂混匀,防止凝固,分离血浆和血细胞备用,填写被检者的个案调查表,个案表号应与抗凝管编号一致,贴上标签, 在标签上填写DZY/检测编号/采血时间。. 应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠。.用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在48h内分离PB
12、MC和血浆，否则应在2448h内分离血浆和血细胞。做病毒载量测定的样品要求在6小时内分离血浆,运输前五天内在-20下冷冻或-70冻存。 CD4+/CD8+T淋巴细胞测定样品必须在常温（18-23）下24小时内送达检测实验室。（4）采集样品注意事项. 采集样品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。. 采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/体液的操作,应戴双层手套。2） 样品的运送（1） 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。（2）应采用WHO提出的三级包装系统. 第
13、一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。. 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。. 第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。（3） 血清和血浆样品应在28条件下由专人运送，随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下1823运送。每一包装的体积以不超过50ml为宜。（4）
14、 运送感染性材料必须有记录。3）样品的接收、登记检测人员在接收样品时应核对样品与送检单是否一致,是否清晰,粘贴牢固。如样品出现以下情况之一者应拒收，并要求送检者（单位）完善相关信息内容或重新采集标本：（1）样品上无标识或标识不清。（2）严重溶血及污染等影响检测结果的样品。（3）样品血清量不足，少于0.2ml。（4）样品的登记把样品信息及时填写大余县中医院HIV抗体筛查实验室样品检测登记表,应有样品编号、姓名、姓别、年龄、送检人群、送检科室、住院号（或门诊号）、收样时间、收样人,必要时要记录被检者的户口所在地详细地址、联系电话、身份证号码。4.支持性文件全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）
15、5.相关记录艾滋病抗体筛查实验室样品接收登记本（三）HIV抗体检测方法和步骤1. 目 的根据全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版），对艾滋病病毒抗体检测作必要的细化和补充，以规范本中心对艾滋病病毒抗体的检测方法。2. 适用范围适用于本HIV筛查实验室于对人体血液中艾滋病病毒抗体检测3. 职 责1) 检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测；2) 复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核；3)科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。4. 检测依据全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）。5. 操作程序1)实验前准备(1)检测人员进入污染区前，必须穿好工作服、隔离衣，戴上口罩、帽子及手套，不得将与实验无关物品带入实验室。(2)调节室温至18
