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1、1.（15分）犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV）主要感染幼犬，传染性极强，死亡率极高。犬细小病毒单克隆抗体（CPV McAb）可抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制,进而杀灭犬体内病毒。请回答：（1）在单克隆抗体CPV McAb的制备过程中，所用到的细胞工程技术了有 和 技术。（2）给成年鼠注射CPV ，一段时间后，若鼠血清中抗 的抗体检测呈阳性，说明体内产生了 （填体液或细胞）免疫反应。（3）将小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能分泌CPV McAb的杂交细胞的过程中至少要进行两次筛选，一次是通过 培养基筛选出杂交细胞，另一次是通过 筛选出能分泌CPV McAb的杂
2、交细胞。（4）诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合最常用的方法是 ；对杂交细胞进行培养时，需要_的环境，及营养、温度、pH和 环境适宜的条件。（5）通过上述方法得到的单克隆抗体可快速准确地识别CPV ，其原因是该抗体具有 的特点2. 下图为利用生物技术生产单克隆抗体和经体外受精培育优质奶牛的过程。请回答下列问题： （1）细胞A的形成过程中常用的生物诱导因素_。（2）体外培养杂交瘤细胞的条件包括：无菌无毒的环境、营养、_和气体环境。（3）在I图制备单克隆抗体的过程中，主要应用了_和_两个生物技术。（4）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，其最大的优越性是_。（5）过程优质奶牛的培育过程需要进行胚胎移植，胚
3、胎移植可利用激素对供体和受体进行_处理，使受体处于合适的生理状态。收集得到的胚胎要进行检查，培养至_阶段，移植后的胚胎能在受体子宫中存活，其生理基础是_。（6）若要同时获得多头与此优质奶牛相同的小牛，可对中囊胚进行_，该过程需要特别注意的是_。此技术可以看做是动物_繁殖。3. 2013年l2月20日，美国细胞杂志发布，中国科研团队在国际上率先完成了“单个卵细胞的高精度基因组测序”，该技术或可将试管婴儿的活产成功率从30提至60，并检测与遗传疾病有关的DNA序列变异，降低帕金森氏综合症等疾病遗传到下一代的风险。(1)“试管婴儿”技术与克隆人本质的区别是前者为_生殖方式。(2)获得“试管婴儿”需要
4、胚胎工程的技术有_、_和胚胎移植等。胚胎移植通常要将胚胎培养到_阶段。理论上要得到“同卵双胞胎”，采用的技术是_。(3)在医学卜可用_细胞来治疗帕金森氏综合症。该细胞是由_中分离出来的一类细胞。(4)现在大多数人反对设计试管婴儿，其原因是_。4. 人类在预防与诊疗传染病的过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某种传染病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白质为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程如下图所示，请分析回答：（1）图中所示基因工程的核心步骤是 。（2）若将含有A基因的受体细胞在体外培养，必须满足无菌无毒、营养、 、气体环境等条件，才能使细胞大量增殖；若受体细胞是受精卵，则需将其在体外培养
5、到 时期，然后进行胚胎移植，培育成转基因动物。（3）过程采用的实验技术是 ；获得的X是 。（4）科学家欲对抗A蛋白的单克隆抗体进行改造，生产出效果更好的嵌合抗体，用于癌症治疗。用蛋白质工程技术对抗A蛋白的单克隆抗体进行改造时，首先必须根据预期 ，设计 ，最终通过基因拼接，将抗体基因改造成嵌合抗体基因，然后导入到淋巴细胞中表达。（5）检测该基因在淋巴细胞中是否翻译成蛋白质，可用 技术。与基因工程相比较，蛋白质工程产物具备的特点是 ： 。要改造蛋白质结构，最终是通过改造基因来实现的。请说明原因： 。5. 随着科学的发展，现代生物技术已经广泛应用于社会生产的方方面面，请回答下ytJ,fH关问题：(1
6、)植物组织培养技术不仅可以保持优良品种的_，还可以高效快速的实现种苗的大量繁殖。若想获得脱毒苗，可以切取一定大小的_等进行组织培养。(2)科学家利用植物组织培养技术与_技术结合，培育出抗虫棉。这一过程中，获取目的基因常用的方法有_、利用PCR技术扩增、还可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成_，若扩增循环四次共需引物_个。(3)培育抗虫棉，需获得抗虫基因，需提取DNA，科学家常利用DNA在_中溶解度不同来提取它，在沸水浴条件下_可作为鉴定DNA试剂。6.（15分）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂
7、转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图示。请根据图示回答下列问题。（1）图2示意的是采用_技术扩增目的基因的过程中，此过程需要使用一种不同于一般生物体内的酶_。（2）图1步骤是_，所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列_（有/没有）专一性要求。重组质粒必须具有的结构除目的基因外还必须有_，_，_。（3）图1步骤是_，此步骤所用的细菌B通常为_。（4） 对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点，对以下酶切结果作出判断。 采用EcoRI和PstI酶切，得到_种DNA片段。 采用EcoRI和SmaI酶切，得到
8、_种DNA片段。7. 材料甲：科学家将药用蛋白基因导入母牛的受精卵中，可以在奶牛分泌的乳汁中生产所需要的药品，因而称为乳腺生物反应器。 材料乙：某DNA聚合酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码该酶的基因进行改造，使其表达的DNA聚合酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了该DNA聚合酶的耐热性。 材料丙：干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。它包括胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞的发育受多种内在机制和微环境因素的影响。目前人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。最新研究发现，成体干细胞可以横向分化为其他类型的细胞和组织，为干细胞的广泛应用提
9、供了基础。回答下列问题：(1)资料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入奶牛的受精卵中常用_法。科学家将药用蛋白基因与_等调控组件重组在一起；培育转基因牛的核心步骤的完成是在细胞_（内或外）。(2)资料乙属于_工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对_进行改造，或制造一种_的技术。(3)资料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎干细胞属于胚胎工程的重要应用，胚胎干细胞是由囊胚期的_或_分离出来的一类细胞，在体外培养的条件下可以增殖而不分化，如果在培养液中加入_，就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化。8. 克隆猪成功率较低，与早期胚胎细胞的异常凋亡有关。Bcl-2基
10、因是细胞凋亡抑制基因，用PCR技术可以检测该基因转录水平，进而了解该基因与不同胚胎时期细胞凋亡的关系。克隆猪的培育及该基因转录水平检测流程如图。请回答：（1）图中过程采用的技术手段称做 技术。克隆猪的成功培育说明 。（2）过程所用技术为 ，所用的培养液与植物组织培养的培养基从成分上主要区别是前者必须含有 。（3）在PCR过程中可检测出cDNA中Bcl-2 cDNA的分子数，进而计算总mRNA中Bcl-2mRNA的分子数，从而反映出Bcl-2基因的转录水平。图中X表示 过程。在PCR反应体系中应包含的主要成分有扩增缓冲液、4种脱氧核苷酸、模板DNA以及 、 。PCR扩增过程第一轮循环的模板是 。
11、9. 请结合所学知识回答下列问题:I通过基因工程培育转基因动物时，需将基因表达载体通过_技术导入受体细胞，常用的受体细胞是_，极大地限制了基因的操作。II目前，我国科学家已成功地建立了小鼠哺乳动物单倍体胚胎干细胞系，这些干细胞可以替代精子或卵子完成受精和胚胎发育，产生健康小鼠，为基因操作找到了新的途径。下图为科学家利用小鼠单倍体胚胎干细胞培育转基因动物过程，请据图回答:(1)单倍体胚胎干细胞取自囊胚的_，和生殖细胞相比，单倍体胚胎干细胞在体外培养的条件下，可以_。(2)在过程中，科学家可能采用两种策略来获得小鼠的孤雄单倍体胚胎:方法一是将受精后获得的受精卵的_去除，方法二是向_中注射成熟精子的
12、头部。(3)过程用到的技术是_，早期胚胎能够在受体内存活的主要生理学基础是_。10. 回答下列有关问题： (1)哺乳动物的卵子发生是在雌性动物的卵巢内完成的。卵原细胞演变为初级卵母细胞并依次经过两次分裂，减数第一次分裂是在_前后完成的，减数第二次分裂是在_过程中完成的。当观察到卵细胞膜与透明带之间有_时，说明卵子已受精。_是防止多精入卵的第一道屏障。 (2)哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的储备，是在完成的，这是精子和卵子在发生上的重要区别。刚排出的精子不能立即与卵子结合，必须在雌性动物的生殖道内发生相应生理变化后，才具备受精能力，这一生理现象叫做_。 (3)体外受精是对体内受精的模拟操作，首先对实验动物用_处理，使其排出更多的卵子，待精子获能后，可以在_或者专用受精溶液小滴中完成受精。 (4)精卵体外受精后，应将受精卵移人发育培养液培养，它的成分比较复杂，除了一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸、_等物质。 (5)对于“试管动物”的正确理解是_。
