实验一 药理学实验的基本技能

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1、实验一 药理学实验的基本技能实验一 药理学实验的基本技能 一、实验动物的基本技能和实验技术基础 1.实验动物的标记 大、小鼠和白色家兔的标记常用35黄色苦味酸溶液涂于皮毛上标号。常用的方法： 1号 -左前腿 2号 -左腰部 3号 -左后腿 4号 -头部 5号 -正中 6号 -尾根部 7号 -右前腿 8号 -右腰部 9号 -右后腿 10号 -不标记 2.实验动物的捉持 (1)小鼠的捉持 用右手提起鼠尾，放在粗糙物上面，向后轻拉鼠尾；用左手拇指和食指捏住其两耳颈背部皮肤，将小鼠固定在掌中，使其腹部朝上，然后以无名指和小指夹住鼠尾或小鼠的左后肢。 大鼠的捉持 捉持和固定方法基本同小鼠，无经验者可戴上

2、防护手套，并应动作轻柔。用右手捉住鼠尾，放在鼠笼盖上，向后轻拉鼠尾；左手掌面向鼠背，食指和中指压住鼠的头顶，拇指和无名指分别从鼠的两腋下插入，将鼠的两前肢卡住；或拽紧鼠后颈及后背皮肤即可。 图 1 小白鼠捉持法 3、实验动物的给药方法 小鼠的给药方法 灌胃：将小鼠固定后，使颈部拉直，右手持装有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，压其头部，使口腔与食道成一直线，沿上腭壁向鼠口腔的后下方轻轻插入食道。如遇阻力，可将针头抽出再插，以免刺破食管或误入气管。一般给药量为0.10.3ml/10g。 图 2 小白鼠灌胃法实验 图 3 小白鼠腹腔注射法 皮下注射：常在背部皮下。轻轻捏起背部皮肤，将注射针头刺入皮

3、下，稍稍摆动针头，若容易摆动则表明针尖位于皮下。然后注入药液。一般给药量为0.10.20ml/10g。 图 4 小白鼠皮下注射法 腹腔注射：左手固定动物，右手持注射器，从下腹部外侧，呈45度角刺入腹腔，进针约35mm，一般给药量为0.10.3ml/10g。 肌内注射(im)：多注射于后肢股部肌肉，一般每侧不超过0.1ml。 尾静脉注射：将小鼠置于固定筒内，使尾部露在外面，用7075的乙醇棉球擦尾部，或将鼠尾浸入4559C温水中，待尾部左右侧静脉扩张后，左手拉尾，右手进针。一般给药量为0.10.2ml/10g 大鼠的给药方法 均同小鼠。一般情况下，灌胃剂量为12ml/100g，皮下注射、尾静脉注

4、射1ml /只，腹腔注射为1.5ml /只，肌内注射为0.10.2ml/只。此外大鼠尚有舌下静脉给药的方法。 图 5 家兔耳部血管分布 图 6 家兔耳静脉注射法 4、实验动物给药量的计算 药物浓度的表示方法 溶液的质量 百分浓度= 100% 溶液的体积 实验动物给药剂量一般按mg/kg(或g/kg)计算。为了方便，大鼠和豚鼠可按每100g计算，小鼠可按每10g计算。 给药剂量=药物浓度给药体积 给药容量的计算：从已知药的浓度和已知给药剂量算出相当于每1kg体重应给药的毫升数。 例：小鼠体重22g，腹腔注射盐酸吗啡10mg/kg,药物浓度为0.1%,应注射多少毫升? 药物浓度：0.1%=0.1g

5、/100ml=100mg/100ml=1mg/ml 给药剂量：10mg/kg=10ml/kg 小鼠体重：22g=0.022kg 10ml/kg0.022kg=0.22ml 或换算成ml/10g来计算较为方便：10ml/kg=0.1ml/10g。这样再计算其他小鼠的给药量就很方便。 5、实验动物的处死方法 颈椎脱臼法 此法常用于小鼠。用左手拇指、食指或镊子用力压住小鼠的后头部，同时用右手抓住鼠尾用力向后上方牵拉，使之颈椎脱臼，鼠立即死亡。 空气栓塞法 此法常用于家兔的处死。用注射器将空气快速注入静脉，可使动物立即死亡。 击打法 适用于较小的动物，如家兔、大鼠和小鼠等。提起动物的尾部，用力敲击动物

6、头部，或用要木锤打击头部，致使动物死亡。 断头法 此法适用于蛙、蟾蜍、小鼠和大鼠。用剪刀将动物头部剪断，由于脊髓娄离且大量出血，动物很快死亡。 二、实验记录的内容和实验报告的写作 1、 实验记录 实验记录是将实验内容如实地记录下来，长期保存备用。其基本原则是真实、及时、准确、完整，实验过程中应认真做好实验记录。内容一般应包括： 时间、天气、温度； 实验标本：动物的种类、体重、标记和标号及如何分组等。 实验药物：药物的来源、批号、剂型、浓度、剂量及给药途径。 实验进程、步骤和方法的详细记录。 观测指标的变化和原始的描记图纸。 2、实验报告的写作 实验报告要实事求事地反映实验的基本过程，并要对实际

7、所得结果进行整理、计算、统计学处理，然后进行科学地分析讨论，进一步阐明实验的目的和意义。一般包括以下内容： 实验目的 实验材料 包括仪器、药品和动物。要尽可能详细、具体、明确。 实验方法 可简明扼要地叙述，但关键环节或步骤必须写清楚。 实验结果 应根据实验获得的数据进行整理，并可对一个教学实验小组或全实验室的数据进行整理、归纳、分析和对比，尽量总结出图表。尤其有观察时效关系的，描出时效曲线，一目了然。数据须进行统计学处理，选择的统计学方法要恰如，检验效率要高。 讨论和结论 讨论与结论是报告的核心，应包括对实验结果的分析、思考题的探讨、实验、实验方法及实验中出现异常现象的分析、认识、体会和建议等

8、。 实验二不同给药途径对药物作用的影响 观察给药途径不同，动物对药物反应有何不同。 小白鼠，体重18-24g，雌雄兼用 小鼠笼、天平、注射器、大烧杯、小鼠灌胃器、10%硫酸镁、0.5%戊巴比妥钠 1硫酸镁不同给药途径对药物作用的影响 取体重相近的小白鼠2只，编号并称重。1号小白鼠腹腔注射10%硫酸镁溶液0.3ml，2号小白鼠经口灌胃10%硫酸镁0.6ml。观察并比较两鼠有何不同现象发生，为什么？ 鼠号 1号 2号 给药途径 剂量 呼吸 肌张力 大便 2戊巴比妥钠不同给药途径对药物作用的影响 取体重相近的小白鼠3只，编号并称重。观察小鼠正常活动情况及翻正反射，然后用0.5%戊巴比妥钠，分别从不同

9、途径给药0.1ml/10g，观察小鼠反应，记录小白鼠腹腔注射0.5%戊巴比妥钠的时间、翻正反射消失及恢复时间，计算睡眠潜伏期和睡眠持续时间。 鼠号 1号 给药途径 剂量 睡眠潜伏期 睡眠时间 2号 3号 同一药物、同等剂量以不同途径给药将会出现哪些不同反应？ 实验三急性毒性的测定 通过实验学习测定药物LD50的方法、步骤及计算过程，观察受试药品一次给予动物后所产生的急性毒性反应和死亡情况。 药物给药剂量与动物死亡率间呈正态分布，以对数剂量为横坐标、死亡率为纵坐标作图，可得到一对称S型曲线，其两端较平坦，中间较陡，说明两端处剂量稍有变化时死亡率的改变不易表现出来，在50%死亡率处斜率最大，该处剂

10、量稍有变动时，其死亡率变动最明显，即最灵敏，在技术上也最容易测得准确，所以人们常选用LD50值作为反映药物的指标。若将死亡率换算成机率单位，则对数剂量与机率单位呈直线关系，用数学方法可拟合其回归方程式，可精确地计算LD50及引起任何死亡率的剂量及相关数据。 注射器、天平、小鼠笼、苦味酸；盐酸普鲁卡因。 1822g健康小鼠50只(正式试验)，雌雄各半，实验前禁食12h，不禁水。 1.预试验 目的是寻找引起0%和100%动物死亡的剂量范围，以便正式实验时确定各组剂量。一般是取小鼠912只，分34组，选择组距较大的一系列剂量腹腔注射给药，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡率，至少

11、应找出引起20%80%死亡率的剂量范围，以保证量-效曲线跨越足够的范围。普鲁卡因小鼠腹腔注射引起0%和100%动物死亡的剂量范围的参考值为：最小剂量121.3mg/kg，最大剂量 290mg/kg。 2.剂量计算及药液配制 (1)剂量计算 根据预试结果找出Dmax及Dmin，设正式实验的剂量组数为n，剂量公比为r，则 各组剂量为Dmaxrk-1，k为第几组，一般选用45组动物，r为0.60.85为宜。 例 已知普鲁卡因Dmin=121.3mg/kg， Dmax=290mg/kg 当n=6时，r=0.84, 各组剂量为： 1. 290 mg/kg 2. 290 mg/kg0.84 = 243.6

12、mg/kg 3. 290 mg/kg0.842= 204.6mg/kg 4. 290 mg/kg0.843= 171.9mg/kg 5. 290 mg/kg0.844= 144.4mg/kg 6. 290 mg/kg0.845= 121.3mg/kg 药液配制 药源充足时的配药方法 最高浓度药液的配制 小鼠腹腔注射体积为0.2ml/10g= 20ml/kg，每组药液量为4ml左右，为留有余地，各组动物所需药液体积定为6ml。 求出所需母液体积及母液所需药量 V=各组动物所需药液体积 / (1-r)= 6 / (1-0.84)=37.5ml M = V Dmax/(20ml/kg)=37.5(2

13、90/kg) /(20ml/kg)=543.75mg 各剂量组药液按下法稀释： 543.75mg+生理盐水至37.5ml，混匀 第一组取6ml 31.5ml+生理盐水6ml，混匀 第二组取6ml 31.5ml+生理盐水6ml，混匀 第三组取6ml 31.5ml+生理盐水6ml，混匀 第四组取6ml 31.5ml+生量盐水6ml，混匀 第五组取6ml 31.5ml+生理盐水6ml，混匀，为第六组药液 药源紧张时的配药法 各组所需母液的体积为： 第一组 6 第二组 6*r 第三组 6*r2 第四组 6*r3 第五组 6*r4 第六组 6*r5 母液总体积(V)=6(1+ r+ r2+ r3+ r4

14、+ r5) 总药量(M)=母液总体积Dmax/ 计算出V、M后，取药量M，用生理盐水稀释至Vml，用移液管精密吸取各组所需的母液量，加生理盐水稀释至6ml，即为各组试验药液。 3动物分组：将小鼠雌、雄分开。分别称重，同一重量段小鼠放入一个笼内，标记小鼠。雌、雄小鼠分别按重量顺序分层随机分为6组，使不同性别和体重的小鼠能均匀分配于各组，每组10只。 4给药：各组动物分别腹腔注射相应浓度的药液0.2ml/10g，立即详细观察，记录动物反应情况、死亡时间和数目。在24h内作多次观察，以后每天观察1次以上，连续观察714天。按Bliss法及其它方法计算LD50和95%可信限(由于Bliss法计算复杂，