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1、基于流化床包衣工艺的剂量分散型结肠给药系统研究2007-3-24 17:13:00中华康网治疗牛皮癣，疗效显著专家在线解答男性疾病青春痘、痤疮,一扫光!3天根除阴虱，5天除疥疮肝炎：治疗肝炎新突破！脂溢性脱发,25天治好 糖尿病治疗信息 脂溢性皮炎,20天治愈!腋臭,狐臭,一月去除!中医治癌：最新疗法治疗近视眼，干眼症高血压治疗信息 流化床(Fluid bed)又称沸腾床，它在制药领域中的应用已从原先的流化床干燥发展到现在的流化床混合、流化床包衣、流化床制粒（丸）和流化床粉碎等方面。而流化床包衣对于推动口服缓控释制剂的发展起了重大作用。剂量分散型制剂又称多-单元型制剂（Multiple uni
2、t dosage forms，如微丸、微片、口服微球等），由于其独特的设计原理，可进一步降低药物对胃肠道的刺激，可进一步减小因食物或胃排空造成的个体差异，可进一步避免剂量突释现象，可进一步保证临床用药的安全性，目前已成为口服缓控释制剂研究和应用的热点。 结肠定位释药系统对于肠道局部疾病的治疗和蛋白、多肽等生物大分子的口服给药是非常重要的。发展到现在，已有pH依赖型，前体药物，时滞型，压力型以及菌群触发型等多种技术出现。其中，pH敏感聚合物的肠溶包衣由于它的实用价值，是非常有吸引力的研究方向。甲基丙烯酸-甲基甲基丙烯酸酯的共聚物（Eudragit，优特奇）是目前最常用的肠溶包衣材料。由于胃肠道p
3、H值的变化趋势不是直线上升，而是在回肠达到最高约7.5左右，然后在盲肠处出现明显的下降趋势，因此目前的pH依赖型结肠定位释药系统往往存在提前释放药物的倾向。主要原因在于现有的肠溶包衣材料的pH溶解临界值较低（pH7），在到达结肠前的回盲肠（pH7.07.5）端即发生溶解而提前释放药物。为解决该问题，一种由甲基丙烯酸、丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸甲酯按25：10：65比例构成的新的肠溶聚合物，Eugragit FS 30 D，应用而生，这种材料具有更高的pH溶解临界值，只有在pH7.07.5时才发生溶解，而且它的延展系数高达600，是一种pH溶解临界值最高且无需增塑剂的优良肠溶包衣材料。 本文发展了一
4、种新的Eudragit FS 30 D包衣的剂量分散型膜控微丸，用于药物的结肠靶向递送。美洛昔康被用作模型药，由于其潜在的结肠息肉治疗效果。本文详细介绍该系统的制备过程和体外释放特征。更为重要的是，以五肽促胃酸激素控制的比格犬为动物模型，采用测定血药浓度的方法全面评价了该系统的结肠靶向能力。尽管类似的研究工作曾有文献报道，但是文献评价的制剂形式是包衣片剂，而本文研究的是剂量分散型的膜控微丸，膜控微丸比包衣片剂更具临床优势。最后，本文还能提供能使Eudragit FS 30 D包衣的膜控微丸具备理想体内结肠定位特征的比较准确的包衣膜厚度。为今后研究其他非甾体抗炎药的膜控微丸能起指导作用。 1 材
5、料和仪器 1.1 药品与试剂 美洛昔康原料药（福建永春制药厂馈赠）；吡罗昔康（南通制药厂馈赠）；Eudragit FS 30 D（德国罗姆公司赠送）；空白糖丸芯（710850 m，上海爱的发）；-环糊精（北京化工厂）；HPMC（6cps，日本日棉株式会社）；甲醇（分析纯，邯郸林峰精细化工有限公司）；氯仿（分析纯，北京化工厂）；乙醚（分析纯，北京化工厂）；磷酸（优级纯，北京化工厂）；三乙胺（分析纯，北京化工厂）；氮气（普氮）；分析用水为重蒸馏水。 1.2 仪器 流化床（GPCG 1，德国Glatt公司）；自动取样溶出测定仪（SR8PLUS，美国Hanson）；高效液相色谱仪（P600泵，UV48
6、6检测器，2.10 Millennium 色谱工作站，Waters，美国）；紫外可见分光光度计（UV-160A，日本岛津）；磁力搅拌器（DF-101S，巩义市英峪予华仪器厂）；分析天平（Sartorius，千分之一）；超声仪（KS-120D，宁波可生仪器厂）；涡旋混合仪（北方同正生物发展有限公司）；台式高速离心机（Hermle，A200Z）；恒温水浴锅（北京西城区医疗机械厂）；微量取样器（北京青云航空仪表有限公司）。扫描电镜（SEM, Jeol JSM 5600 LV, Jeol, 东京日本）；金粉喷射头（JFC-1300, Jeol, 东京，日本）。 1.3 受试动物 4条雄性比格犬，体重：
7、11.513.7Kg，军事医学科学院实验动物中心。 2 试验方法 2.1 美洛昔康结肠溶微丸的制备 2.1.1 上药包衣 在水-氨水(980:20)的溶液中，溶解一定量的美洛昔康HPMC-环糊精，作为上药包衣溶液。取400g空白丸芯，置于流化床底喷包衣锅，按照一定的工艺参数进行上药包衣。包衣结束后，测定上药量。药物在载药丸芯中的含量为4.8%(w/w)。 2.1.2 隔离包衣 取15g HPMC和1.5g的PEG400溶于200ml的水中，使用流化床底喷包衣锅，按照一定的工艺参数对载药丸芯进行HPMC隔离层包衣，包衣增重为3(w/w)。 2.1.3 肠溶包衣 37.5g滑石粉作为抗粘剂加入到2
8、75ml水中，置均质机中高速搅拌3分钟，然后在搅拌状态下缓慢加入到250g的Eudragit FS 30 D分散体中。即为固含量为20(w/w)的肠溶包衣液。取500g含有隔离层的美洛昔康载药丸芯，置于流化床底喷包衣锅，按照一定的工艺参数进行肠溶包衣。当包衣增重达到7.5，10，12.5，15(w/w)时，在流化床取样口取出一定数量的微丸，作为供试样品。所有的样品都要在温度40的环境中老化（Curing）24小时。通过比较微丸包衣前后的重量差异，计算肠溶包衣的效率。 2.2 美洛昔康结肠溶微丸的形态学检查 Eudragit FS 30 D包衣的美洛昔康肠溶微丸被随机用刀片沿横截面切割成两部分，
9、然后用金粉喷射头喷金5分钟，在15 kV的电压下，用扫描电镜分别对微丸的表面和衣膜厚度作形态学检查。 2.3 美洛昔康结肠溶微丸的释放度试验 转篮法，500ml释放介质，温度370.5，转速100rpm。样品都要精确称量使每一份受试样品均含有10mg的美洛昔康。为了考察载药丸芯的药物释放行为，使用了3种释放介质，分别为pH1.2的0.1M的盐酸液、pH6.8的0.2M的磷酸盐缓冲液以及pH7.4的0.2M的磷酸盐缓冲液。为了评价不同包衣水平的Eudragit FS 30 D包衣的美洛昔康肠溶微丸的抗酸性，使用pH1.2的0.1M的盐酸液为释放介质，测定样品2小时的释放量。为了测定包衣水平为15
10、(w/w)的Eudragit FS 30 D包衣的美洛昔康肠溶微丸的pH溶解临界值。采用更换释放介质的方法，即开始的2小时以pH1.2的0.1M的盐酸液为介质，然后分别更换pH6.8，7.0，7.2，7.4的磷酸盐缓冲液，继续释放4小时。美洛昔康的含量采用UV法，pH1.2的盐酸液样品选择350nm的测定波长，pH6.8，7.0，7.2，7.4的磷酸盐缓冲液样品选择364nm的测定波长。 2.4 美洛昔康结肠溶微丸的比格犬体内吸收试验 2.4.1 给药及取血过程 采用双周期两制剂随机交叉试验设计。4条比格犬随机等分成两组，每组2条。第一组先服用参比制剂(载药丸芯)，后服用试验制剂(15包衣样品
11、)；第二组先服用试验制剂，后服用参比制剂。两个周期间隔15天(净化期)。受试制剂、对照制剂的给药剂量均为10mg/犬。受试比格犬给药前禁食12 h。比格犬在口服给药前的15min和给药后的45min分别肌肉注射五肽促胃酸激素（Pentagastrin），剂量为(6g/kg)。清晨分别单次口服受试制剂10mg/1粒或参比制剂10mg/1粒，服药时用约50ml水送服。服药4 h后喂水、喂食。比格犬在给药后0，0.5，1，2，3，4，5，6，7，8，10，12，24，48，72和96 h分别于腿静脉取血5ml，置于肝素钠处理过的负压玻璃管中，胶塞密封，3000 r/min离心15 min，分离血浆，
12、移取血浆约1ml到10ml试管中，标注试验号、比格犬的随机号及采血时间，血样放置冰箱冷冻室保存待处理分析。 2.4.2 血浆样品的处理 取血浆样品1ml，加入50l吡罗昔康内标贮备液(100 g/ml)，用0.1ml 1M的盐酸酸化血浆，混匀后，加氯仿5ml，涡旋混和3min，离心（3000rpm，15min），取有机相4ml，60水浴氮气流吹干，残留物用100l流动相溶解，涡旋1min，离心（3000rpm，5min），取上清液20l。进行HPLC分析。 2.4.3 色谱条件及血药浓度的测定 以Kromasil C18（5m，4.6mm25cm）为固定相；甲醇-水-磷酸-三乙胺（650：30
13、0：0.5：0.75）为流动相；流速为1ml/min；检测波长为360nm。在上述色谱条件下，主药美洛昔康的保留时间为11min左右，柱效在3000以上；内标吡罗昔康保留时间为8min左右，柱效为5000以上。主药、内标以及相邻杂质之间的分离度良好，内源性物质不干扰测定。在0.0510g/ml范围内，方法的标准曲线为As/Ai0.2384C+0.001（r20.9998）。最低检测限为0.05g/ml。最低定量浓度为0.10g/ml。绝对回收率及方法回收率能满足测定要求。日内及日间RSD均在15以内。 2.4.4 数据处理 应用药物代谢动力学研究数据处理程序（DAS2.0）计算主要动力学参数。
14、体内滞后时间（In vivo tlag），Cmax和Tmax由实测值计算，AUC采用线性梯形面积法求算。各药动学参数经配对t-检验进行统计学分析。 3 结果与讨论 3.1 包衣水平为15的Eudragit FS 30 D美洛昔康肠溶微丸的形态学 扫描电镜检查结果见图1（略）。可见，微丸拥有理想的球形的外观结构，粒经比较均一，外观比较光洁。形成的肠溶衣膜连续、密封，厚度大致为28m左右。 3.2 -环糊精对美洛昔康的增溶作用 美洛昔康从未包衣丸芯中的释放迅速而又完全。在30分钟之内，不管是在pH1.2的酸性释放介质或pH6.8的中性磷酸盐缓冲液还是在pH7.4的偏碱性磷酸盐缓冲液中，所有样品均已
15、释药完全。结果见图2（略）。本文，-环糊精被作为增溶剂加入到载药层中。根据美洛昔康能够从Eudragit FS 30 D未包衣的载药丸芯中迅速释放而且释放不受pH影响的事实，可以证实，-环糊精显著地增加了美洛昔康的水中溶解度，更为重要的是，-环糊精逆转了美洛昔康pH依赖的溶解度状态，使得模型药物的性质不对Eudragit FS 30 D肠溶衣膜产生负面影响。 3.3 Eudragit FS 30 D的不同包衣水平对膜控微丸抗酸性的影响 为了考察Eudragit FS 30 D在不同包衣水平下的抗酸能力，本文制备包衣增重分别为7.5、10、12.5和15的肠溶微丸，在pH1.2的0.1M 的盐酸液中进行2小时的抗酸性释药研究。结果见图3（略）。可见，7.5或10的低水平包衣增重，不能有效抑制Eudragit FS 30 D膜控微丸在酸性介质中释放药物，将包衣增重提高到12.5，Eudragit FS 30 D膜控微丸的抗酸能力得到很大提高，当包衣增重增加到15时，Eudragit FS 30 D膜控微丸的2小时酸中释放量仅仅为0.9，远远低于肠溶制剂酸中释放量的标准，说明15%的包衣水平（衣膜厚度为28m）能有效抑制药物向
