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1、附录一 实验室常用试剂、缓冲液的配制方法(一) 1 M Tris-HCl (1 L)1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中2. 加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解；3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值；PH值浓HCl7.4约70 mL7.6约60 mL8.0约42 mL4. 将溶液定容至1 L；5. 高温高压灭菌后，室温保存；注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1 C，溶液的pH值大约降低0.03个单位。(二) 0.5 M EDTA (1 L)1. 称取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L烧杯中
2、；2. 加入约800 mL的去离子水，充分搅拌；3. 用NaOH调节pH值至8.0 (约20 g NaOH)；注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解；4. 加去离子水将溶液定容至1 L；5. 适量分成小份后，高温高压灭菌；6. 室温保存。(三) 50 TAE Buffer (pH8.5) (1 L)1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中；Tris242 gNa2EDTA.2H2O37.2 g2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解；3. 加入57.1 mL的醋酸，充分搅拌；4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。(四) 10 TBE Buffer (pH8.3) (
3、1 L)1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中；Tris108 gNa2EDTA.2H2O7.44 g硼酸55 g2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解；3. 去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。(五) 40%丙烯酰胺(1 L)1. 称量下列试剂，置于2 L烧杯中；丙烯酰胺Alrylamatide380 g甲叉丙烯酰胺Bis-Alrylamatide20 g2. 向烧杯中加入约400 mL的去离子水，充分搅拌溶解；3. 去离子水将溶液定容至1 L；4. 37 C过夜，充分溶解。(六) 8%非变性聚丙烯酰胺凝胶(70 mL)1. 40%丙烯酰胺、TEMED和10% APS均放
4、置于4 C冰箱中，要用时才取出；2. 按照顺序称量下列试剂，置于200 mL烧杯中；去离子水41 mL5 TBE Buffer14 mL40%丙烯酰胺14 mL10% APS650 LTEMED65 L3. 磁力搅拌器将其充分混合均匀(注意控制时间，特别是室温高的时候，容易凝结)；4. 将其缓慢倒入电泳玻璃板中。(七) 6 Loading Buffer (500 mL，DNA电泳用) 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中；EDTA4.4 gBromophenol Blue250 mgXylene Cyanol FF250 mg2. 向烧杯中加入约200 mL的去离子水，加热充分搅拌溶解；3.
5、加入180 mL甘油后，使用2 N NaOH调节pH值至7.0；4. 去离子水将溶液定容至500 mL后，室温保存。(八) 10 Loading Buffer (10 mL，RNA电泳用)1. 称量下列试剂，置于10 mL离心管中；0.5 M EDTA (pH 8.0)200 LBromophenol Blue25 mgXylene Cyanol FF25 mg2. 向烧杯中加入约4 mL的DEPC处理水，充分搅拌溶解；3. 加入5 mL甘油后，充分溶解；4. DEPC处理水定容至10 mL后，室温保存。(九) 组织裂解液(100 mL，鱼类用)1. 按照顺序称量下列试剂，置于200 mL烧杯中；1M Tris-Cl (pH 8.0)1 mL0.5M EDTA1 mL0.5M NaCl20 mL10% SDS10 mL2. 加去离子水将溶液定容至100 mL。(十) Hanks液(1L，淡水鱼用)1. 按照顺序称量下列试剂，置于2 L烧杯中；NaCl8.0 gKCl0.2 gMgSO4.7H2O0.26 gNaH2PO4.2H2O0.065 gNaHCO31.0 gCaCl20.2 g2. 充分搅拌至前部溶解；3. 加去离子水将溶液定容至1000 mL，4 C保存。
