琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度MIC

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1、琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)|琼脂稀释法琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，参加融化并冷至50左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。1. 培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.27.4。淋病奈瑟菌使用GC琼脂根底加1%添加剂；其它链球菌使用含5%V/V绵羊血的MH琼脂当试验磺胺药时，使用溶解的马血。2. 含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗

2、菌药物分别参加已加热溶解，并在4550水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度34mm。通常按19比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置28冰箱可贮存5天。3. 接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再110稀释，以多点接种器吸取制备好菌液约12l接种于琼脂平板外表，每点菌数约为104CFU，形成直径为58mm的菌斑。接种好后置35孵育1620h甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h，观察结果。奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。4. 结果判断将平板置于暗色、无反光物体外表上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比拟抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，那么应检查培养物纯度或重复试验。