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1、1 组织切片1、剪取组织,10 %甲醛固定。2、已经固定好的组织依次在 70 %、80 %、90 %、95 %、95 %、100 % 的乙醇溶液中浸泡 15-20 min，3、再浸入乙醇和二甲苯（1:1 ）的混合溶液中15-20 min，然后浸入 二甲苯直到透明，将透明的组织浸入石蜡和二甲苯（ 1:1）的混合溶 液中浸泡1 h,用石蜡进行固定。4、包埋、切片2 组织切片 HE 染色染色结果：细胞核呈蓝色,细胞的细胞质呈粉红色。步骤：1、组织切片用二甲苯脱蜡15 min，再次用二甲苯进行脱蜡15 min,2、浸入二甲苯和酒精混合溶液（1:1） 3 min，依次浸入100%、95 %、 90%、
2、80%、 70%、 50%乙醇各2 min。3、 苏木素染色5 min,自来水冲洗3 min, 1 %盐酸2 s，自来水冲 洗2 min, 依次浸入50 %、 70 %、 80 %乙醇 2 min, 伊红浸泡 5 s。4、 95%、100%、100%乙醇各2 min，最后连续2次二甲苯各15 min， 封片。3 组织切片免疫组化检测1、组织切片置于58 C烘箱内烤片20 min,然后取出待冷却后，进 行脱蜡。2、连续2次二甲苯脱蜡各15 min,依次浸入100 %、95 %、80 %乙 醇、蒸馏水各 2 min。3、高压抗原修：将 3 L 柠檬酸盐缓冲液注入不锈钢压力锅中加热至 沸腾。切片置于
3、切片架上，放入锅内，使切片位于液面以下，盖高压 锅压阀。当压力锅开始慢慢喷气时（加热5-6 min ）计时1-2 min, 然后将压力锅端离热源，冷水冲至室温后，蒸馏水冲洗， PBS 洗，片 子室温冷却20 min,再次PBS洗。4、免疫组化具体方法参照 SP 试剂盒（福州迈新）：1、室温,正常非免疫动物血清封闭 30 min；2、一抗 4 C 12 h;3、用 PBS 清洗两次,每次 2 min；4、室温，内源性过氧化物酶阻断1h;用PBS清洗三次，每次2 min;5、室温，生物素标记的二抗30 min;用PBS清洗三次，每次2 min;6、室温,链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶 30 min,7、DAB显色5 min，蒸馏水冲洗；8 、 Gills 苏木素复染 3 min;9、自来水流水冲洗5 min;依次95 %、100 %的乙醇脱水3 min;10、最后用二甲苯透明,封片,镜检,拍照。
