《AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规范流程》由会员分享，可在线阅读，更多相关《AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规范流程（28页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 文件名称AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程使用维护标准操作规程颁发部门制订人：复核人：批准人：质保部制订日期：复核日期：批准日期：执行日期版本1.0编号SOP04006制作份数_份发送部门修订记录修订人修订原因修订容版本修订日期1. 目的：确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规化。2. 围：适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。3. 定义：无4. 职责：荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。质保部对本规定的有效执行承当监视检查责任。5. 容：5.1 室温度控制在1530，相对湿度4575%。5.2 仪器操作5.2.1 依次
2、翻开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。5.2.2 接着翻开AB7500仪器电源开关，预热10分钟。5.2.3 点击7500 Software v2.3图标，翻开软件。5.2.4 按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的8联PCR反响管或者96孔PCR反响板放入检测孔位，记下放置位置。检测8联PCR反响管用*反响孔模块，检测96孔PCR反响板用*反响孔模块。检测8联PCR反响管需放入盖紧管盖的空8联PCR反响管配平，检测96孔PCR反响板无需配平5.2.5 再次按压托盘使其滑入仪器。5.2.6 新建扩增参数模板：例如新建一个UG-63-62的模板，扩增参数是95，
3、10；95，10；63，455 cycles；95，10；62，3540 cycles，在62时收集荧光信号HEX、FAM信号，20l反响体系。5.2.6.1 在Setup-Plate Setup-Define Targets and Samples中，将Target Name下的Target1改成FAM；点击Add New Target，将新增的Target1改成HEX，点击Reportee下拉菜单，选择VIC。5.2.6.2在Setup-Run Method-Graphical View中的Reaction Volume Per Well后面输入2020l反响体系。选中第一个Holding
4、 Stage，点击Delete Selected删除；在Cycling Stage中的Number of Cycles后输入5，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度63度，输入时间45秒，将63度下面收集荧光图标点掉；点击Add Stage下拉菜单项选择择Cycling，在Cycling Stage中的Number of Cycles后输入40，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度62度，输入时间35秒，在62度下面点击图标收集荧光。5.2.6.3 点击Save下拉菜单下的Save As Tamplate，文件名输入UG-63-62，保存在默认ab7500-co
5、nfig-tamplates文件夹，关闭设置界面。5.2.7 已有扩增参数模板：在软件Home界面中点击Template，选择需要的模板，点击翻开。例如：UG-63-62，其扩增参数就是95，10；95，10；63，455 cycles；95，10；62，3540 cycles，在62时收集荧光信号HEX、FAM信号，Reaction Volume Per Well:20l20l反响体系。5.2.8 在Setup-Plate Setup-Assign Targets and Samples中选择8联管摆放的位置，全部勾选Sample 1；UGT1A1*6勾选HEX，UGT1A1*28勾选FAM
6、。5.2.9 在Run-Amplification Plot中点击START RUN，命名为20140101-1当日日期+当日上机次数，例:2014年1月1日第1次上机编号为20140101-1，保存在默认文件夹中，开场运行。5.2.10 结果分析5.2.10.1 PCR反响完毕后自动保存结果，对扩增曲线进展分析。5.2.10.2 也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以用户可根据实际情况自行调整，Start值可以在315、End值可设在520，Threshold值Rn推荐设定为500015000，点击Analyze进展分析，然后到Plate窗口下记录每个反响的Ct值。
7、5.2.11实验完毕后取出反响管切勿翻开管盖，顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。5.3 仪器维护5.3.1 每周维护5.3.1.1 检查计算机磁盘空间。如需要，将实验文件归档或备份。 至少每周检查一次计算机磁盘空间。 如果硬盘的可用空间缺乏其总容量的20%，应将较旧的数据传输到备份存储设备上保存。5.3.1.2 关闭控制7500 Instrument的计算机，30秒后再次开启计算机。5.3.1.3 用无绒布块不脱毛蘸取75%酒精清洁7500 Instrument的外表。注：切勿使用有机溶剂清洁7500 Instrument。5.3.1.4 使用75%酒精浸泡反响管托架晾干后
8、放回仪器。5.3.2 每月维护5.3.2.1 执行背景校准。可执行一次背景校准以检查是否存在污染物5.3.2.2 运行磁盘清理和磁盘碎片整理。 至少每月一次。 当Windows操作系统显示消息提示执行碎片整理时。 切勿同时运行磁盘管理实用工具和7500 Real-Time PCR Software。5.3.3 每半年6个月维护5.3.3.1 检查灯具状态。在7500 Software中，选择InstrumentLamp Status/Replacement以确定卤素灯的状态。显示Lamp Status/Replacement对话框： Condition 表示以下其中一种状况： Good 灯具工
9、作良好，不需要更换。单击Close。 Failed 必须更换灯具。单击Close，然后按照5.3.4.3步骤更换卤素灯。 Change Soon 灯具使用超过2000小时；生产商建议将其更换。单击Close，然后决定是否更换灯具。如果断定更换，请按照5.3.4.3步骤更换卤素灯。 Usage (Hours) 灯具已照明的总小时数。 Lamp Current 灯具的输出电流，以安培为单位(A)。低电流意味着灯具可能将要失效。 Date Last Replaced 上次更换灯具的日期。在执行一次运行之前或期间，7500 Software可能显示以下警告：消息描述Warning Cannot det
10、ect sufficientcurrent from lamp. Either lamp is notinstalled properly or needs to bereplaced.在运行开场时，灯具电流低于可承受水平。在按照5.3.4.3步骤更换卤素灯具之前，无法继续该运行。Warning Cannot detect sufficientcurrent from lamp. Either lamp is notinstalled properly or needs to bereplaced.7500 Software停顿了该次运行，因为在运行中灯具电流下降到可承受水平之下。在按照5.3
11、.4.3步骤更换卤素灯具之前，无法继续该运行。在消息框中单击OK，检查仪器日志，然后更换灯具。Warning - The lamp usage hasexceeded 2000 hr. We remendreplacing the lamp soon to ensureoptimal assay performance.在运行开场时，灯具使用时间超过2000小时。单击Cancel Run，然后更换灯具，或者单击Continue Run。重新运行ROI、背景、光学和染料校准。5.3.3.2 执行目标区ROI校正。5.3.3.3 执行背景校准。5.3.3.4 执行光学校准。5.3.3.5 执行染料
12、校准。5.3.3.6 执行RNase P仪器验证试验。5.3.4 其它维护任务需要时执行5.3.4.1 样本块污染去除。 执行以下程序，去除7500 Instrument样本块的荧光污染。荧光污染是导致背景运行失败的常见原因，在此情况下，一个或多个反响孔会持续表现出异常的高信号。注意！切勿移去设备上的盖板。7500 Instrument中没有用户可平安维修的组件。如果疑心存在问题，请联系生产商效劳代表。全程戴上一次性无粉手套操作。找到样本块中受污染的反响孔参阅5.4.2.13 “如何确定污染。从7500 Real-Time PCR Instrument中取出反响板和托盘支架。a.按压托盘门，将
13、其翻开。b.取出反响板和托盘支架。c.关闭托盘门。以一定角度向托盘右侧施加压力。手动降低样本块：a.在7500 Software中，选择 InstrumentInstrument Maintenance Manager。b.在Instrument Maintenance Manager的ROI选项卡中，单击Start Manual Calibration。c .在ROI Inspector对话框中，单击Move Block。d.当ROI Inspector对话框显示“Block Down时，单击Done。关闭7500 Real-Time PCR Instrument，然后拔下其电源电缆。允许仪
14、器冷却15分钟。翻开7500 Real-Time PCR Instrument的检查门。a.将薄型螺丝刀插入检查门边缘处的键销孔，然后推动以解开门栓。b.翻开仪器前门。抬起门栓，然后将受热的护盖门推到仪器的反面。使用少量的双蒸水，清洁样本块中被污染的反响孔：a.用移液管吸取少量双蒸水并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的双蒸水数次，以冲洗反响孔。c.将用过的双蒸水水吸入废液瓶中。d.使用棉花拭子，擦试每个被污染的反响孔的壁。e.使用无绒布料，吸出剩余的双蒸水。7500 Real-Time PCR Instrument将受热的护盖门拉到仪器的正面。抬起门栓，然后将受热的护盖门紧固到
15、穿插杆。翻开7500 Real-Time PCR Instrument的检查门。插上电源插头并开启7500 Instrument。通过执行背景校准运行确认已消除污染参阅5.4.2 “背景校准。如果污染仍然存在，重复步骤至，然后使用95%乙醇溶液清洁样本块中受污染的反响孔：a.用移液管吸取少量95%乙醇溶液并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次，以冲洗反响孔。c.将用过的乙醇溶液吸入废液瓶中。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后，应始终使用双蒸水冲洗反响孔。重复步骤至，以冲洗样本块的反响孔，并验证已去除掉污染物。如果污染仍然存在，重复步骤至，然后使用10%漂白剂溶液清洁样本块中受污染的反响孔：a.用移液管吸取少量10%漂白剂溶液并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的溶液
