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1、化学发光法检测传染化学发光法检测传染病病放免酶联免疫化学发光荧光免疫60年代70年代80年代90年代免疫标记技术发展免疫标记技术发展国产进口酶促化学发光直接化学直接化学发光光2化学发光法检测传染病 化学化学发光技光技术的的优势与与应用前景用前景.敏感度高，(10-21mol/L)超过酶免，荧光免疫等方法.精密度，准确度超过放免，酶免，荧光免疫等方法.试剂稳定，无放射性，污染或生物毒性；.测定耗时短，方便快速提供结果报告；.测定项目齐全；已发展成全自动的测定系统。3化学发光法检测传染病包被微粒子包被微粒子包被磁珠包被磁珠包被微孔包被微孔包被包被试管管包被技术的发展包被技术的发展-磁微粒子磁微粒子
2、4化学发光法检测传染病包被磁微粒包被磁微粒 标记异异鲁米米诺Eg:双抗双抗夹心法分析模式心法分析模式 磁微粒子上包被的抗体与待检测抗原及异鲁米诺标记抗体结合提升检测功能灵敏度增加检测线性范围比吖啶酯更稳定延长试剂效期5化学发光法检测传染病*Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y*Y YY YY YY YY YY YY YY Y微粒包被微粒包被液相反应液相反应6化学发光法检测传染病磁微粒、直接化学发光反应反应充分速度更快酶标板，板式磁微粒，纳米级，均相7化学发光法检测传染病CLIA板式载量Y
3、 YY YY YY YY YY YY YY YY Y磁微粒子磁微粒子直接化学法直接化学法Ag/AbAg/Ab酶标板酶标板发光板发光板Ag/AbAg/Ab微粒子化学发光法抗体载量优势微粒子化学发光法抗体载量优势8化学发光法检测传染病分配分配样品品,磁磁颗粒粒和和试剂孵育孵育使反使反应物物结合合在磁在磁场中中清洗去除清洗去除未未结合物合物质加入加入激激发液液产生生信号信号信号信号检测微粒子化学发光原理微粒子化学发光原理9化学发光法检测传染病磁性微粒子及其分离技磁性微粒子及其分离技术磁性微粒子技术的优点：快速分离结合相与游离相提高与Ag或Ab包被亲和力提高接触表面积/反应容量比例，实现微量分析不需要
4、抗体分离步骤，杜绝干扰与交叉反应允许共价耦合反应，因此可以检测大/小分子的各种物质成分能应用各种分析设计与反应模式，扩大应用范围 如：夹心法，竟争法，抗体检测法等利于检测自动化与微量分析10化学发光法检测传染病v磁微粒子直接化学发光是最新一代免疫检测新技术最新一代免疫检测新技术v具有液相、快速、灵敏、准确液相、快速、灵敏、准确的特点v通过多中心的临床评估，基本上验证了LICA在乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、肿瘤标志物、甲状腺功能等项目的临床可用性v多家临床试验显示产品的质量不亚于进口的雅培、罗氏和西门子等厂家的产品媲美。11化学发光法检测传染病v1）磁性微粒子技术：便于分离，反应均匀，提高灵敏度v2
5、）泉涌内外壁清洗技术：最小的交叉污染率v3）试剂盒盖设计：减少人工操作误差和交叉污染，避免试剂挥发影响结果准确性v4）试剂冷藏系统：保证在仪器操作的过程中试剂能够一直保持稳定v5）磁性分离技术：保证了清洗效率，对于灵敏度要求极高的标记免疫分析是十分关键的技技术12化学发光法检测传染病 雅培雅培 免疫免疫项目目甲状腺功能甲状腺功能甲状腺素三碘甲状腺原氨酸游离甲状腺素游离三碘甲状腺原氨酸促甲状腺素性腺激素性腺激素人绒毛膜促性腺激素催乳素雌二醇卵泡刺激素黄体生成素孕酮睾酮肿瘤瘤标志物志物甲胎蛋白癌胚抗原前列腺特异性抗原游离前列腺特异性抗原糖类抗原125糖类抗原15-3糖类抗原19-92微球蛋白铁蛋白
6、神经元特异性烯醇化酶人钙结合蛋白肿瘤相关抗原72-4鳞状上皮癌相关抗原细胞角蛋白CYFRA 21-1心血管及心肌心血管及心肌标志物志物N末端脑钠肽肌钙蛋白肌酸激酶同工酶C反应蛋白心肌脂肪酸结合蛋白脂蛋白相关磷脂酶A2髓过氧化物酶肌红蛋白肝肝纤维化四化四项透明质酸型前胶原N端肽型胶原蛋白层粘连带白传染病染病乙型肝炎病毒前S1抗原乙型肝炎病毒e抗体乙型肝炎病毒e抗原乙型肝炎病毒核心抗体乙型肝炎病毒表面抗体乙型肝炎病毒表面抗原丙型肝炎抗体（HCV）梅毒抗体（TP）人类免疫缺陷病毒抗体糖代糖代谢类胰岛素C-肽13化学发光法检测传染病全自全自动、管式、直接化学、管式、直接化学发光法光法 -特异性特异性强
7、、性能、性能稳定定 超超长时间无人无人值守守 （1）试剂区区15个个试剂位，位，（2）样本区本区12 12=144 个个样本位本位 （3）码垛区一次性装区一次性装载720个反个反应杯杯 测试中可随中可随时添加，随添加，随时替替换14化学发光法检测传染病真正的急诊功能，急诊样本，随到随测。测试速度高达220测试/小时原试管上样，无需倒管。全封闭反应舱，有效减少外界环境干扰和污染全中文软件，图标式界面，操作更简便综合测试成本低 15化学发光法检测传染病 管式、微粒子包被技管式、微粒子包被技术，反，反应速度更快，速度更快，结果更准确。果更准确。vELISA法法检测乙肝表面抗原、梅毒、艾滋、丙肝按照乙
8、肝表面抗原、梅毒、艾滋、丙肝按照2010年年药典典规定反定反应时间至少要至少要2小小时30分分钟；而全自；而全自动微粒子化学微粒子化学发光光试剂则不到不到30分分钟即可完成。即可完成。v稳定性更好定性更好v特异性更好特异性更好 大部分国大部分国际一流厂家也都采用直接一流厂家也都采用直接发光法：光法：罗 氏氏西西门子子雅雅 培培.16化学发光法检测传染病传染病染病试剂传统酶免法和微粒子化学免法和微粒子化学发光法光法对比比方法学项目传统酶免法微粒子发光法分析敏感度特异性精密度分析敏感度特异性精密度HBsAgadr 0.1IU/mLadw 0.1IU/mLay 0.2IU/mL(-/-)20/20(
9、+/+)3/313.21%adr 0.1IU/mLadw 0.1IU/mLay 0.2IU/mL(-/-)20/20(+/+)3/38.03%HBsAb10 mIU/mL(-/-)20/2012.05%10 mIU/mL(-/-)20/207.45%HBeAg1#1:642#1:1283#1:32(-/-)15/15(+/+)9/1012.04%1#1:642#1:1283#1:32(-/-)15/15(+/+)10/108.03%HBeAb1#1:322#1:643#1:64(-/-)15/15(+/+)9/1012.31%1#1:322#1:643#1:64(-/-)15/15(+/+)1
10、0/108.20%HBcAb1#1:1282#1:1283#1:256(-/-)15/15(+/+)14/1514.03%1#1:1282#1:1283#1:256(-/-)15/15(+/+)15/1510.34%HCVL1、L2阳性，L3阴性，L4阴性(-/-)29/30(+/+)29/3010.05%L1、L2阳性L3阳性，L4阴性(-/-)30/30(+/+)30/307%HIVS1,S2阴性,S3,S4,S5,S6阳性(-/-)18/20(+/+)20/2014.34%S1阴性,S2,S3,S4,S5,S6阳性(-/-)20/20(+/+)20/2010%TPL1、L2阳性，L3阴性
11、，L4阴性(-/-)20/20(+/+)10/1011.26%L1、L2阳性L3阳性，L4阴性(-/-)20/20(+/+)10/107.98%17化学发光法检测传染病参比试剂：雅培参比试剂：雅培I2000乙肝灵敏度特异性符合率HBsAg97.92%100%99.78%Anti-HBs95.98%97.38%96.69%hiv95.24%100%99.59%Anti-HBe90.77%97.21%95.36%Anti-HBc91.54%98.9%94.48%试剂性能多中心临床评估（乙肝）试剂性能多中心临床评估（乙肝）18化学发光法检测传染病免疫测定试剂的关键点免疫测定试剂的关键点v作作为为免免
12、疫疫反反应应，抗抗原原抗抗体体的的选选择择是是整整个个免免疫疫分分析析特特异异性性和总体表现的关键和总体表现的关键如如何何选选择择好好一一个个抗抗体体(单单克克隆隆或或多多克克隆隆)去去检检测测一一个个被被检检物物质质，而而不不与与非非常常相相似似结结构构的的其其它它代代谢谢产产物物有有交交叉叉反反应应,或或着着是是一一些些没没有有临临床床意意义义的的分分解解产产物物等等，这这是是分分析析设设计计的重点中之重点。的重点中之重点。批内、批间的分析重现性批内、批间的分析重现性。19化学发光法检测传染病AFPHBsAg4.50%1.79%4.91%2.14%HCV12345MeanSDCV批内86.
13、1186.3688.4087.9086.4386.271.551.79%批间74.59 73.63 69.64 71.90 71.96 71.01 3.20 4.50%HBsAg12345MeanSDCV批内72.59 71.25 76.50 75.05 78.03 76.61 1.642.14%批间0.22 0.22 0.23 0.22 0.23 0.23 0.01 4.91%批内批间微粒子化学发光试剂的精密度微粒子化学发光试剂的精密度20化学发光法检测传染病相关性相关系数线性系数HIV显著相关0.990.98HCV显著相关0.930.99参比试剂：雅培参比试剂：雅培试剂性能多中心临床评估试
14、剂性能多中心临床评估21化学发光法检测传染病相关性相关系数线性系数HIV显著相关0.970.92HBsAg显著相关0.960.95N=500，参比试剂：雅培I2000试剂性能多中心临床评估试剂性能多中心临床评估22化学发光法检测传染病 丙型肝炎抗体丙型肝炎抗体诊断断试剂丙肝病毒复杂的基因结构：决定了抗体谱的差异，从而为丙肝抗体检测敏感度的提高带来了困难。23化学发光法检测传染病丙肝丙肝诊断断试剂目前存在的目前存在的问题v1、灰区、灰区标标本的困惑本的困惑v2、阳性、阳性标标本的漏本的漏检检24化学发光法检测传染病问题形成的技形成的技术原因原因-灰区的形成灰区的形成1、重、重组抗原的原因抗原的原
15、因 （1）融合蛋白）融合蛋白 （2）大）大肠杆菌杆菌杂蛋白蛋白2、第二抗体的非特异反、第二抗体的非特异反应 （1）酶标抗体抗体对固相固相载体的直接吸附体的直接吸附 酶标二抗二抗对于丙肝抗体是非特异的，和各种人于丙肝抗体是非特异的，和各种人IgG均能反均能反应结合。合。（2）个）个别标本中本中IgG浓度度过高高 多聚体的混合：多聚体的混合：E-E、E-Ab、E-Ab-E、E-Ab-E-Ab，既，既引起本底背景，又阻遏抗原抗体反引起本底背景，又阻遏抗原抗体反应 25化学发光法检测传染病问题形成的技形成的技术原因原因-阳性阳性标本的漏本的漏检1、关于灵敏度的两个概念、关于灵敏度的两个概念 （1）分析
16、灵敏度）分析灵敏度 决定因素：决定因素：a.单个抗原决定族的抗原性个抗原决定族的抗原性强弱。弱。b.试剂盒的信号放大能力盒的信号放大能力 （2）流行病学敏感度）流行病学敏感度 决定因素：决定因素：a.抗原片段的种抗原片段的种类是否是否齐全。全。b.是否含构像抗原。是否含构像抗原。c.分析灵敏度的高低。分析灵敏度的高低。26化学发光法检测传染病CE1 E2/NS1NS2NS3 NS4a NS4b NS5aNS5b丙型肝炎病毒的基因结构丙型肝炎病毒的基因结构ELISA-1st RIBA-1stELISA-2stRIBA-2stELISA-3stRIBA-3stC22-3C22-3NS5NS5C100C1005-1-1C33CC100C33CC1005-1-1C33CC33CC100C1005-1-12、抗原片段种类不全27化学发光法检测传染病新型丙肝化学新型丙肝化学发光光试剂的关的关键技技术1、包被和、包被和标记实现双特异，以降低假阳性双特异，以降低假阳性率，并提高分析敏感度。率，并提高分析敏感度。2、通、通过整体系整体系统优化，化，进一步一步扩大阴阳反大阴阳反差，使差，使结果判果判读泾渭
