《LeicaSp2共聚焦操作手册》由会员分享，可在线阅读，更多相关《LeicaSp2共聚焦操作手册（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、Leica TCS SP2激光共聚焦显微镜系统操作手册A :步距调节B:电动升台按钮 C:电动降台按钮D:微调E :上限设置F:下限设置1、观察、扫描转换拉杆2、卤素灯开关3、透射光探测器开光横档4、荧光光路开关5、荧光滤镜转盘 1: DAPI ； 2: TRITC ； 3: FITC ； 4: SCAN6、镜头侧DIC棱镜转盘7、与镜头相配DIC滤块&起偏器9、检偏器10、镜头侧 DIC 棱镜微调旋钮11、光强调节纽12、减光滤光片13、孔径光阑14、视场光阑选择合适的镜头Leica TCS SP2 镜头配置镜头类型使用介质放大倍率 /数值孔径编号HC PL APO CSDRY10X /0.
2、4506511HC PL APO CSDRY20X/ 0.7506513HC PL APO CSDRY40 X 0.85/ CORR506140HC PL APO Ibd.BCOIL63X /1.4506192Leica TCS SP2 AOBS 镜头配置镜头类型使用介质放大倍率 /数值孔径编号HC PL FLUOTARDRY10X/0.3506505HC PL FLUOTARDRY20X/0.5506503HCX PL APOOIL40X/1.25-0.75506176HC PL APO Ibd.BCOIL63X/1.4506192HCX PL APO CSOIL100X/1.40-0.70
3、506038WATER HCX APO L U-V-IWATER63X/0.9506148荧光观察 荧光光路开关至“ O ”位，转轮至“1.0孩位，转换拉杆完全推进，荧光滤块换到相应号位（ 1： DAPI ； 2：TRITC ；3：FITC；4：SCAN）图像输出扫描荧光光路开关至“ I”位， 转轮至“ UV ”位， 转换拉杆完全拉出， 荧光滤块换到 4：SCAN ）荧光观察（以油镜观察为例）1、样品正面朝上正确放在显微镜样品台上，点上镜油。2、长按电动升台按钮，使镜头和样品上镜油接触，调节微调旋钮，找到样品。3、将光路转换成荧光观察位置，找到预扫描目标，将光路转换至扫描状态。二Leica L
4、CS软件的使用（一）、Leica con focal software 界面一Ep-Jtx.宀.- irJILn ”|:| !软件面板介绍左：Co nt a, ins1TCS mConfocal p Status b arfhardwarelegendTCS-menu: accquire view 3D process quantifyapplication右：image win dows（二）、设置参数打开软件，默认在 Acquire面板中，mode扫描模式为xyz. Format扫描像素为 512x512, average line/frame average为 1。Mode扫描模式：空间
5、扫描模式：xyz xzy时间扫描模式：xt xyt xzt xyzt光谱扫描模式：xy入xz入丨 mit Format扫描像素一般设置为1024 x1024。I匚九average line一般设为4或8。（三）、软件具体的操作使用单荧光道扫描多荧光扫描DIC图像扫描荧光与DIC图像同时扫描多层扫描时间序列扫描光谱扫描ROI扫描FRETFRAPLIVE MODE多方法组合荧光强度分析单荧光扫描1、按Acquire按钮中的Beam键打开光路设置对话框窗口2、 点击Mode选择扫描模式，如平面扫面xyz3、 点击Format选择扫描像素，一般用512x512或1024x10244、 点击 Avera
6、ge line / frame average选择获取图像时平均的次数：4-8次5、 双击相应荧光素或染料方法，如FITC、TRITC等6、点击con tin uous，优化图像质量用快捷钮Z Position调节到最佳层面，点击Q LUT使图像颜色变为伪彩 Glow O&U模式（观察样品荧光强度），用相应PMT调节荧光亮度，Zoo m调节电子放大倍率。点击 Stop点击 Beam path 中的 save 键，保存个人的扫描方法7、点击single键扫描获取图像8、save 保存图像到硬盘上。多荧光标记1、按 Acquire 按钮中的 Beam 键打开光路设置对话框窗口2、点击 Mode选择
7、扫描模式 xyz3、点击Format选择扫描像素 512x512或1024x10244、点击 Average line / frame average 选择获取图像时平均的次数5、 双击相应荧光素或染料方法，如FITC6、点击continuous，优化图像质量点击Q LUT使图像颜色变为伪彩Glow O&U模式，用快捷钮Z Position调节到最佳层面，用相应PMT调节荧光亮度，Zoom调节电子放大倍率。Stop点击Beam path中的save键，保存个人的扫描方法 其他荧光同样操作后7、 点击Beam path中Sequential Scan将个人的多种荧光扫描方法添加到面板中，选择be
8、tween frames。between lines 各个通道一线一线分先后扫描 几乎同时成像between frames 各个通道分先后扫描先后成像 （多用此法）between stacks 多层扫描中，先扫完一个通道的多层，再扫另一个通道的多层8、点击 series 键扫描图像9、 点击overlay获取叠加图像，选中叠加图片，单击右键 send to - experiment -selection（raw）（保存选中的图片的原始格式，扫描像素一定，固定大小，单通道图片可以在 leica 软件中再编辑， overlay 图片不能再编辑）selection （ snapshot）（保存选中的
9、图片的抓图模式，显示大小）All Snapshot（保存抓图模式，整个窗口）9、save 保存图像到硬盘上。DIC图像扫描1、 将显微镜 DIC棱镜调整至与观察用镜头倍数相配，如镜头为63x, DIC棱镜就调到40/60 的位置2、 镜头侧棱镜由BF调整到与观察用镜头型号相配，如镜头标示为R/0.17/D,棱镜就调到 D3、双击 Beam path 面板方法中的 Transmission4、点击continuous，优化图像质量用快捷钮Z Position调节到最佳层面，打开signal面板，用signal面板中Tr PMT Gain调节图像亮度，Tr offset调节图像对比度（值 不宜过小
10、），Zoom调节电子放大倍率。点击Beam path中的save键，保存个人的 DIC扫描方法5、点击single键扫描获取图像6、save 保存图像到硬盘上。荧光与 DIC 图像同时扫描1、 将显微镜 DIC棱镜调整至与观察用镜头倍数相配，如镜头为63x, DIC棱镜就调到40/60 的位置2、 镜头侧棱镜由BF调整到与观察用镜头型号相配，如镜头标示为R/0.17/D,棱镜就调到 D3 、双击 Beam path 面板方法中的 Transmission4、点击continuous，优化图像质量用快捷钮Z Position调节到最佳层面，打开signal面板，用signal面板中Tr PMT
11、Gain调节图像亮度，Tr offset调节图像对比度，Zoom 调节电子放大倍率。点击Beam path中的save键，保存个人的 DIC扫描方法荧光图像扫描方法如前保存5、 点击Beam path中Sequential Scan将个人的荧光扫描方法和DIC扫描方法添加到面板中， 选择 between frames。6、点击 series 键扫描图像7、 点击overlay获取叠加图像，选中叠加图片，单击右键send to - experiment -selection（raw） （保存选中的图片的原始格式，扫描像素一定，固定大小，单通道图 片可以再编辑， overlay 图片不能再编辑）s
12、election （ snapshot）（保存选中的图片的抓图模式，显示大小，图片不再能编辑）All Snapshot（保存抓图模式，整个窗口，图片不再能编辑）8、save 保存图像到硬盘上。多层扫描1、点击continuous，优化图像质量用快捷钮Z Position调节不同层面，点击Q LUT使图像颜色变为伪彩Glow O&U模式观察样品荧光强度，相应PMT调节荧光亮度，Zoom调节电子放大倍率。然后选择需要扫描的起始、终止层面，分别按begin、 end 键，保存起始、终止层面位置， select 选择扫描的张数Others 可以自由选择扫描层数或是扫描厚度2、 单荧光标记样品直接点击
13、series 键扫描图像多荧光标记样品点击Beam path中Sequential Scan将个人的多种荧光扫描方法添加到面板中，选择 between frames,点击series键扫描图像。3、save 保存图像到硬盘上。多层图像的叠加（一）平面叠加选中多层图像的原始文件，点击process面板中的3D projection- maximum apply（二）动态叠加1、选中多层图像的原始文件，点击 process 面板中的 3D projection animation maximum2、Rotation面板，图像旋转围绕的轴角度。选择animation面板。选择frame叠加张数，选择
14、旋转方式：full turn 360度旋转，half turn 180 度旋转， quarter turn 90度旋转， angle 自定义角度旋转。3、 Apply生成3d文件，右键选中文件，Export .avi格式的文件，可以选择播放的速度。时间序列扫描（一）固定时间间隔1、按Acquire按钮中的Beam键打开光路设置对话框窗口2、 点击mode中带时间的扫描模式：xyt3、点击continuous，优化图像质量4、 点击Time Series面板，选择扫描间隔时间AT或选择最小扫描间隔Minimize,选择扫描张数Frames，点击Complete time 生成总时间5、点击 series 开始扫描6、save 保存图像到硬盘上选中扫描好的文件，右键Export .avi格式的文件（二）多个时间间隔组合1、按Acquire按钮中的Beam键打开光路设置对话框窗口2、 点击mode中带时间的扫描模式：xyt3、点击continuous，优化图像质量4、 点击Time L
