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1、名词解释操纵子：是原核生物基因的一个基本转录单位，由编码序列及上游的调控序列组成。编码序列通常包括几个功能相关的结构基因，调控序列有启动序列（启动子）、操纵序列（操纵基因）及其他调节序列构成。顺式作用元件：是真核基因变大调控转录过程的特殊DNA序列，于转录因子结合而起作用，通常包括启动子、增强子、沉默子等。反式作用元件：与其他基因的顺式作用元件结合，调节基因转录活性的蛋白质因子，根据功能不同分为基因转录因子和特异性转录因子。启动子：位于结构基因上游、与RNA聚合酶识别、结合的特异DNA序列，与基因转录起始有关。同源重组：是指发生在同源序列见得重组，它通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序
2、列间进行单链或双链的交换。又称基因重组。DNA克隆：指在体外对DNA分子按照既定目的和方案进行人工重组，将重组分子导入适当细胞内，使其在细胞扩增和繁殖，从而获得该DNA分子大量拷贝的过程称为分子克隆，又叫基因克隆或重组DNA技术。基因工程：在体外将目的基因和载体DNA按照既定的目的基因进行人工重组，并将重组体导入宿主细胞，经过无性繁殖和表达得到所需核酸、蛋白质、生物新品种。包括转基因动物、植物、基因工程生产药物、基因诊断和基因治疗等。限制性核酸内切酶：指一类能识别和切割双链DNA分子内特定的碱基顺序的核酸水解酶，绝大多数是从原核细胞中提取的，可分为三类，其中型是分子克隆中最常用的工具酶。pBR
3、322：是研究最早、最清楚的质粒，其全部顺序为4363bp，含有一个复制原点、一个Ampr和Tetr标记，有限制酶酶切位点，可供外源性基因插入，利用这种遗传标记，有利于筛选出重组转化菌。gDNA文库：即基因组DNA文库，是指存在于转化菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合。它涵盖了基因组全部基因信息。cDNA文库：是细胞总mRNA的克隆，文库只包含表达蛋白质或多肽的基因。感受态细胞：用适当的理化方法处理受体菌后，使宿主细胞处于最适摄取和容忍重组体的状态，此时的宿主细胞即称为感受态细胞。基因诊断：又称DNA诊断，是利用分子生物学即分子遗传学的技术和原理，在DNA水平分析、鉴定遗传性疾病所
4、涉及的基因异常。基因治疗：向有功能缺陷的细胞导入具有相应功能的外源基因，以纠正活补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的，包括体细胞基因治疗和性细胞基因治疗。目的基因：要分离和克隆的相应基因常称为目的基因，因目的基因片段需要插入载体，导入宿主细胞内进行复制或表达，所以对宿主细胞DNA而言，又称它为外源性基因或外源性DNA。质粒：是独立于细菌染色体之外，能自主复制的共价闭合环状双链DNA。细胞信号转导：细胞针对外源信息所发生的细胞内生物学变化及效应的全过程。受体：（receptor）是细胞膜上或细胞内能识别外源化学信号并与之结合的成分，其化学本质是蛋白质，个别糖脂。鸟苷酸结合蛋白（G蛋白）：亦称GTP
5、结合蛋白，是一类信号转导分子，此类蛋白由于其生理活性有赖于三磷酸鸟苷（GTP）的结合以及具有GTP水解酶的活性而得名，在各种细胞信号转导途径中转导信号给不同的效应蛋白。核酸分子杂交：指用已知的DNA或RNA来检测样品中未知核苷酸顺序的分子生物学技术，若二者结合后，经显影或显色可知结合的位置和大小，这一过程称为核酸分子杂交。印迹技术：将凝胶中分离的生物大分子转移（印迹）或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。核酸探针：指用来检测某一特定核苷酸顺序或基因顺序的有同位素或非同位素标记的已知DNA或NA片段。Southern印迹：由E.Southern创立，利用毛细作用将凝胶中的DNA片段转移到载
6、体膜上（NC膜），并将DNA固定于膜上的过程称为Southern印迹。PCR及RTPCR：PCR即聚合酶链反应，是体外DNA的合成、扩增和放大技术。经变性、退火、延伸的若干循环，极微量的目的基因被特异扩增和放大，RT-PCR即逆转录PCR，又称RNA-PCR，是以mRNA为模板，经逆转录和体外扩增放大得到大量cDNA的一种PCR技术。基因组文库（gDNA library）：包含某一个生物的全部基因组DNA序列的克隆群体，以DNA片段的形式贮存着某一生物的全部基因组DNA信息。cDNA文库：包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部mRNA经反转录而合成的cDNA序列的克隆群体，它以cDNA片段的
7、形式贮存着该组织细胞的基因表达信息。基因芯片：指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量DNA探针以显微打印方式有序的固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可得出样品遗传信息。蛋白质芯片：将高密度集排列的蛋白质分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测样品反应时，可捕获样品中靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术。写出下列代号的中文名称：PCR-RFLP:PCR结合限制性片段长度多态性分析（将正常和致病基因的PCR产物经同一限制内切酶消化，可得长度不等的限制性片段，据此判断致病基因有无的分析方法。）PCR-ASO:PCR产物与等位基因特异寡
8、核苷酸探针的杂交分析PCR-SSCP:PCR产物的单链构象多态性分析DGGE:变性梯度凝胶电泳DMD:杜氏营养不良症SRY基因：Y染色体性别决定基因CT-PCR：模板竞争PCRRAPD：随即扩增的多态性DNADDRT-PCR：RNA差别显示逆转录PCR转基因技术：采用基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。核酸转移技术: 核转移技术是将动物的一个体细胞核导入另一个体得去除了胞核的卵细胞内，将该卵细胞导入动物子宫，使之发育成个体。基因剔除技术: 有目的地去处动物体内某种基因的技术或基因靶向灭活，其基本原理是建立在同源重组的基础上。功能克隆和定位
9、克隆：功能克隆是指对一种致病基因功能的了解出发克隆该致病基因。定位克隆是指从一种致病基因的染色体定位出发逐步缩小范围，最后克隆该基因。基因诊断：通过直接检测基因的结构及其表达水平是否正常，从而对疾病做出诊断的方法，通常用于遗传病、病原体、肿瘤等基本，基因增补：将目的基因导入病变细胞或其他细胞，通过目的基因的非定点整合，使其表达产物补偿缺陷基因的功能或使原有的功能得以加强。基因疫苗：指DNA疫苗将编码外源性抗原的基因插入到真核表达质粒中，直接导入人体内，使抗原基因在一定时间内持续表达，不断刺激机体免疫系统，达到防病或治病目的。自杀基因：指宿主细胞获得的外源基因，表达某种酶能将对宿主细胞无毒或低毒
10、的药物前体转化为细胞毒性物质，导致宿主细胞死亡。该基因称为自杀基因，可用于肿瘤的基因治疗。写出下列代号的中文名称：RFLP：限制性片段长度多态性 VNTR ：可变串联重复多态性 SSCP：单链构象多态性PCR-ASO：聚合酶链式反应-等位基因特异性寡核苷酸问答题试述乳糖操纵子的调控机制。（1） 乳糖操纵子的机构中含有Z、Y、A三个结构基因，分别编码利用乳糖乳糖的-半乳糖苷酶、通透酶、乙酰基转移酶。此外还有一个操作序列O、一个启动序列P及上游的分解代谢物基因激活蛋白（CAP）结合位点，构成乳糖操纵子的调控区。在操纵子的上游还有一个调节基因I,编码一种阻遏蛋白，后者可与O序列结合而使操纵子处于关闭
11、状态。（2） 乳糖操纵子的负调控：当细菌以葡萄糖为能源时，i基因编码一种阻遏蛋白，与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合和向结构基因移动，而抑制结构基因的转录。（3） 乳糖操纵子的正调控：当细菌只能以乳糖为能源时，乳糖转变为半乳糖，后者与阻遏蛋白结合，使其构象变化而不能结合O序列，从而诱导转录过程。同时，细胞内cAMP的含量升高，cAMP与CAP结合，使CAP结合到CAP结合位点上，促进转录过程。何谓限制性核酸内切酶？型限制酶的作用特点是什么？ 指一类能识别和切割双链DNA分子内特定的碱基顺序的核酸水解酶，绝大多数是从原核细胞中提取的，可可分为、及型，其中型是分子克隆中最常用的工具酶。型限
12、制酶的作用特点：（1）以内切方式切断双链DNA的磷酸二酯键；（2）能识别切割48bp回文结构；（3）切割可有两类切口，产生三种末端。何谓载体？分子克隆中良好的载体应具备哪些条件？能够携带外源DNA（目的基因）进入受体细胞，实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。良好载体应具备的条件：a、必须有自身的复制子，能在宿主细胞内独立自主复制并能携带重组DNA片段一同扩增。b、必须有限制性内切酶酶切位点（即多克隆位点）以供外源DNA插入。c、具有可供选择的遗传标记（如抗药基因、酶基因、营养缺陷型以及形成吞噬瘢的能力等），以供阳性重组体的筛选。d、分子量应尽量小，以便容纳较大的
13、外源DNA片段，具有拷贝数高，与宿主细胞核酸易分裂，抗剪切力强等特点。e、表达型载体还应配备与宿主细胞相适应的启动子、前导顺序、增强子等调控元件。简述DNA克隆的基本步骤。（1） 目的基因的获取（2） 基因载体的选择与构建（3） 目的基因与载体的体外拼接（4） 重组DNA分子导入受体细胞（5） 筛选并无性繁殖含有重组分子的受体细胞（转化子）常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？（1） 限制性核酸内切酶（必须）：识别并特异切割DNA碱基序列，（2） DNA pol ：催化缺口平移，制备高比度DNA探针（3） Klenow片段（掌握）：合成cDNA的第二条链，补齐或标记双链DNA 3端（4） 多核
14、苷酸激酶：催化多聚核苷酸5-羟基末端磷酸化，或标记探针（5） 逆转录酶：催化合成cDNA（6） 末端转移酶：将3-羟基末端进行同质多聚物加尾（7） DNA连接酶（必须）：催化2条DNA链之间形成磷酸二酯键（8） 碱性磷酸酶：切除常用的基因获取方法有哪些？制备基因组文库 建cDNA文库 PCR扩增目的基因 人工合成DNA技术常用的基因与载体连接方法有哪些？（1） 粘性末端连接:将靶基因片段和载体DNA经相同限制酶分别切割，使它们两端产生相同的黏性末端。然后经黏性末端碱基配对，再经DNA连接酶作用，共价连接成新的重组DNA分子，（2） 平头末端连接：将平末端的DNA分子在T4DNA连接酶催化下，使
15、DNA分子在3OH和5P进行共价结合（3） 人工接头法：是指利用人工接头加在平端DNA片段的两端，然后用相应限制酶切割人工接头以产生黏性末端，再与带相同黏性末端的载体相连，（4） 同源多聚尾联接法：在末端脱氧核苷酸转移酶催化下，在线形载体分子的两端加上单一核苷酸加dG组成的多聚尾，而在目的DNA分子的两端加上dC尾，二者混合退火，然后经DNA聚合酶或Klenow填补裂口处缺失的核苷酸，再通过DNA连接酶修复成环状的双链DNA什么是蓝白斑筛选法？这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌-半乳糖苷酶的基因片度，携带有lac基因片段的载体转入lac的宿主菌后，在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷（X-gal）平板上形成浅蓝色的噬菌斑，外源基因插入lac后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac宿主菌后，在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷（X-gal）平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则成为蓝色噬菌斑。简述细胞信号转导的基本路线。细胞外信号受体细胞内多种分子的浓度、活性、位置变化细胞应答反应简述细胞在转导信号过程中所采用的基本方式。 改变细胞内各种信号转导分子的构象 改变信号转导分子的细胞内定为 促进各种信号转导分子复合物的形成 改变小分子信使的细胞内浓度或分布
