生化检验相关实验简化版

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1、、血糖检测:-糖尿病1、葡萄糖氧化酶法:过氧化物酶;4-氨基安替比林和苯酚氧化缩合生成红色的醌类化 合物(Trinder 反应);505nm2、己糖激酶法:NADPH 340nm、血清总蛋白检测:1、微量凯氏定氮比色法:纳氏试剂(碘化钾汞复盐),棕黄色440nm2、双缩脲法: 540nm3、血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳分析:等电点不同,从正极开始:白蛋白,a 1, a 2,p,y1、电泳法2、免疫化学法3、染料结合法(溴甲酚绿BCG),最常用,无需分离白蛋白和球蛋白;蓝绿色630nm。四、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定-肝功能损害1、赖氏比色法:丙氨酸,a -酮戊二酸;2,4-二硝基苯肼(

2、腙)红棕色505nm五、血清(尿)淀粉酶检测-急性胰腺炎1、碘-淀粉比色法:AMY:淀粉酶 蓝色660nm六、血清乳酸脱氢酶测定心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤1、LD, 2,4-二硝基苯肼(腙)红棕色440nm七、血清肌酸激酶(CK)测定一骨骼肌、心肌、脑组织,心肌梗死、多发性肌炎、休克1、比色法:无机磷酸法、酶偶联丙酮酸测定法、肌酸显色法(常用)ATP,肌酸与双 乙酰和a -萘酚生成红色化合物;540nm2、速率法3、荧光分析法八、血清碱性磷酸酶(ALP )测定一肝胆系统、骨骼系统1、氨基安替比林比色法:ALP在碱性条件下使磷酸苯二钠水解,生成磷酸和游离酚, 后者与 4-氨基安替比林作用,并经

3、铁氰化钾氧化成红色醌类化合物, 510nm。2、速率法:ALP在碱性条件下,使磷酸对硝基苯酚(4-NPP)释放出磷酸基团,生成 磷酸基团和游离的对硝基苯酚(4-NP),形成黄色的醌,405nm九、血清Y -谷氨酰基移换酶(GGT)测定一肝胆系统1、底物:L-Y -谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺;受体:双甘肽,在GGT的催化下,谷氨酰 基转移到双甘肽分子上,同时释放出黄色的3-羧基-对硝基苯胺,405nm 十、血清三脂酰甘油测定一动脉硬化1、分溶抽提-乙酰丙酮显色法:皂化反应、甘油、过碘酸。血清经正庚烷异丙醇-稀硫 酸分溶抽提,上层正庚烷相中含有中性三脂酰甘油,用氢氧化钾皂化生成甘油,在 过碘酸的

4、作用下甘油被氧化成甲醛,有铵离子存在时,甲醛和乙酰丙酮发生缩合反 应生成黄色的 3,5-二乙酰-2,6-二甲基吡啶, 415nm2、酶法:POD、4-AAP、4-氯酚三者合称PAP,故本法称GPO-PAP法。500nm 十一、总胆固醇测定1、异丙醇-高铁冰醋酸硫酸法:用异丙醇提取血清胆固醇,沉淀蛋白质,再用氧化铝吸 附胆红素、磷脂、甘油等干扰物,向异丙醇胆固醇提取液中加入硫-铁显色剂,胆固 醇与显色剂反应生成稳定的紫红色化合物。 540nm2、氧化酶法:血清中的胆固醇酯可被胆固醇酯酶(CEH)水解成游离胆固醇和游离脂 肪酸,胆固醇在胆固醇氧化酶(COD)的氧化作用下,生成胆烷-4-烯-3-酮及

5、过氧化氢,过氧化氢在4-AAP和酚存在时,经POD催化生成红色醌亚胺(Trinder反应), 510nm十二、血清中高密度脂蛋白胆固醇测定1、磷酸钨-镁法:用磷钨酸与镁离子作沉淀剂,选择性沉淀LDL和VLDL (主要含 ApoB),上清液中只含HDL,用酶法测定胆固醇含量。十三、血清脂蛋白电泳分析-高脂蛋白血症1、血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染色后,以琼脂糖为载体,在pH 8.6巴比妥缓冲液 中进行电泳,根据各种载脂蛋白所带电荷量的不同,将脂蛋白分为不同区带,经测 量得出各区带的相对百分比自负极起原点为乳糜微粒依次为前蛋十四、血清胆红素检测-肝脏疾病(溶血性黄疸、肝细胞性黄疸、梗塞性黄疸),胆道

6、系统异常1、改良J-G法:血清与醋酸钠-咖啡因-苯甲酸钠试剂(咖啡因试剂)混合后,加入氯 化重氮苯磺酸(重氮试剂),生成紫红色偶氮胆红素,最后加入强碱性酒石酸钠溶 液,使颜色不稳定的紫红色偶氮胆红素在咖啡因存在下转化为稳定的蓝色偶氮胆红 素,600nm。(Hijman van den Bergh 反应)2、胆红素氧化酶法:( 1) 总胆红素测定:胆红素氧化酶,淡紫色化合物, 460nm( 2) 可溶性结合胆红素测定:快反应,胆红素氧化酶,淡紫色化合物, 460nm 十五、血清麝香草酚浊度试验(TTT)1、 是血清浊度试验中的一种,它反映了肝脏对蛋白质代谢的功能状态,与血清蛋白质 的质与量的改变

7、有关。650nm十六、血清尿素(BUN)测定1、二乙酰一肟检测法:二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑 化合物,颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定,故由试剂中二乙酰一肟与 强酸作用产生二乙酰。2、脲酶-波氏比色法:脲酶水解尿素产生2分子氨和1分子二氧化碳,氨在碱性介质中 与苯酚及次氯酸钠反应,生成蓝色的吲哚酚阴离子,此过程需用亚硝基铁氰化钠催 化反应, 630nm。3、酶偶联速率法:尿素经脲酶催化水解生成2分子氨及1分子二氧化碳,在谷氨酸脱 氢酶催化下,氨与a -酮戊二酸和还原型辅酶I (NADH)作用生成谷氨酸和氧化型 辅酶I, 340nm。十七、血清肌酐(C

8、r)检测一肾功能1、血浆或血清标本经除蛋白处理后,肌酐与碱性苦味酸产生Jaffe反应,生成橙红色 的苦味酸肌酐复合物,在 510 nm 和 520nm 间测定吸光度,与肌酐含量成正比。尿 液标本可稀释后直接测定。2、不去蛋白速率法测定-选择2560s的反应速率来反映真肌酐的含量。一些假肌酐 如乙酰乙酸在20s内已与碱性苦味酸反应,而在2080s之间,肌酐反应占绝对优 势,其他多数干扰物才有较快的反应。十八、血清钠钾检测1、火焰光度法、原子吸收分光光度法、酶法和离子选择电极分析法;2、火焰光度法测定血清(尿)钾、钠:发射光谱分析3、离子选择电极分析法测定钾、钠、氯化物选择性强、标本用量少、快速准

9、确,是应 用最广泛的方法,有取代其它方法的趋势。十九、氯化物检测1、标准硝酸汞溶液滴定血清或尿液中的氯离子,生成溶解但不解离的氯化汞。当到达 滴定终点时,过量的汞离子与指示剂二苯卡巴腙作用,生成淡紫色的络合物。二十、血清钙检测1、血清中的钙离子在碱性溶液中与钙红指示剂结合形成可溶性复合物,使溶液呈淡红 色。EDTA-Na2对钙离子的亲和力很大,能夺取复合物中的钙离子并与钙离子络合, 使钙红指示剂游离,溶液变成蓝色(即滴定终点)。根据测定管EDTA-Na2的滴定 用量,与标准管EDTA-Na2的滴定用量比较,可计算出血清钙的含量。二十一、 血浆碳酸氢根浓度检测1、在血浆(血清)中加入过量的标准H

10、C1溶液,使之与标本中HCO3-进行中和反应, 释放出CO2,然后以酚红为指示剂,用标准NaOH溶液滴定剩余的HC1。根据标准 NaOH溶液的消耗量,计算血浆HCO3-浓度。二十二、 血清磷检测1、 在无蛋白血滤液中加入钼酸铵溶液,与无机磷结合生成磷钼酸,再以硫酸亚铁为还 原剂,可将磷钼酸还原为蓝色的磷钼蓝。通过比色分析,与同样处理的标准液比较, 可求得血清无机磷的含量。二十三、尿 17-酮类固醇检测1、17-酮类固醇(17-ketosteroids, 17-KS)是肾上腺皮质激素及雄性激素的代谢产物,他们 都是环戊烷多氢菲的衍生物,在第17位碳原子上都有一酮基。这类化合物主要为雄酮、表 雄酮、去氢表雄酮和原胆烷醇酮等,大部分结合成为水溶性的葡萄糖醛酸酯或硫酸酯。他们 必须经过酸水解成游离的类固醇后,再用有机溶剂提取,经过洗涤除去酸类与酚类物质,利 用17-酮类固醇分子结构中酮-亚甲基(一COCH2 )能在碱性溶液中与间二硝基苯作用 生成紫红色化合物 (Zimmermann 反应),在 520nm 波长处有一吸收峰,可与标准同时操作 进行比色测定。二十四、 常规室内质控图制作

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